Genotoksicitetsvurdering af tandimplantater i gingivalepitelceller

Patienterne er opdelt i to grupper afhængigt af det tandimplantatsystem, der anvendes i behandlingen. Ankylos tandimplantater (Dentsplay Sirona, Charlotte, USA) bruges i den første gruppe af patienter og Dentium SuperLine (Dentium Co., Seoul, Korea) i den anden gruppe.

Implantaterne placeres i overensstemmelse med hver implantatsystemproducents anvisninger, og behandlingen blev udført i henhold til patientens standarder og indikationer. Kirurgiske procedurer på alle patienter udføres af den samme operatør med samme kirurgiske tilgang, protokol og instrumentering.

Operationerne udføres under lokalbedøvelse, og systemiske antibiotika blev givet efter standardprocedure. For at sikre post-kirurgisk mundhygiejne rådes patienterne til at skylle mundhulen med klorhexidin indtil dagen for suturernes fjernelse. Suturene fjernes 10 dage efter implantation. Implantaterne heler ved at være nedsænket i 12 uger baseret på kirurgens kliniske vurdering, givne indikationer og patienternes behov og præferencer. Efter heling placeres gingivadannere.

Prøveindsamling og et mikronukleusassay i gingivalepitelceller For at reducere individuelle variationer observeres patienter i længderetningen, og hvert individ betjenes som deres egen kontrol. Prøver af gingivalepitelceller udtages fra hver deltagers implementeringssted ved brug af podningsteknikken på tre forskellige tidspunkter: en kontrolpodning tages lige før placeringen af ​​tandimplantatet (T0); den anden podning tages 90 dage efter implantation, dvs. umiddelbart før anbringelse af gingivadanneren (T1); og den tredje podning tages 21 dage efter anbringelse af gingivadanneren (T2).

En time før prøveudtagningen afholder deltagerne sig fra at indtage mad og drikkevarer. Efter skylning af mundhulen 3 gange med lunkent vand for at fjerne eksfolierede celler, tages en T0-podning ved forsigtigt at børste tandkødet rundt om det angivne implantatplacering og senere T1 og T2 omkring implantatet med en cytobørste (Cytobrush Plus; GmbH. Dietramszell-Linden, Tyskland). Prøverne påføres efterfølgende på kodede laboratorieglas.

Cellerne påført på mikroskopiske objektglas får lov til at lufttørre og fikseres i methanol (80% v/v) ved 4°C i 20 minutter. Farvning udføres med 5 % Giemsa-opløsning i 10 minutter. Bagefter skylles objektglassene med vanddestillat og lufttørres. Objektglassene undersøges under Olympus CX40 lysmikroskop (Olympus. Tokyo. Japan) med 400× forstørrelse, og hver mikrokerne og andre nukleare anomalier verificeres desuden under 1000× forstørrelse. To replikatobjektglas fremstilles for hvert individ, og 1000 epitelceller pr. præparat blev analyseret for hver prøveudtagningstid.

Nukleare anomalier, såsom mikronukleus, karyorrhexis (nuklear disintegration, der indikerer apoptose), karyolyse (opløsning af kernen, der for det meste indikerer nekrose og apoptose), pyknose (nuklear svind på grund af apoptose), kondenseret kromatinkompleks med proteiner (DNA-komplekser) (forstadier til mikrokerner eller høj tæthed af DNA-reparationskomplekser) og knækkede æg (kerner, der ser ud til at være sammenknebnede, binukleerede celler (indikerer nedsat celleproliferationshastighed)) estimeres og kvalificeres.