Оценка генотоксичности зубных имплантатов в эпителиальных клетках десны

Пациенты разделены на две группы в зависимости от используемой в терапии системы дентальных имплантатов. Зубные имплантаты Ankylos (Dentsplay Sirona, Шарлотта, США) используются в первой группе пациентов и Dentium SuperLine (Dentium Co., Сеул, Корея) во второй группе.

Имплантаты устанавливаются в соответствии с инструкциями производителя каждой системы имплантатов, а лечение проводится в соответствии со стандартами и показаниями пациента. Хирургические процедуры у всех пациентов выполняются одним и тем же оператором с использованием одного и того же хирургического подхода, протокола и инструментария.

Операции проводятся под местной анестезией, а системные антибиотики назначаются в соответствии со стандартной процедурой. Для обеспечения послеоперационной гигиены полости рта пациентам рекомендуется полоскание полости рта хлоргексидином до дня снятия швов. Швы снимают через 10 дней после имплантации. Имплантаты заживают путем погружения в воду на 12 недель в зависимости от клинической оценки хирурга, данных показаний, а также потребностей и предпочтений пациентов. После заживления устанавливаются формирователи десны.

Сбор образцов и анализ микроядер в эпителиальных клетках десны. Чтобы уменьшить индивидуальные вариации, за пациентами наблюдают лонгитюдно, и каждый субъект служит своим собственным контролем. Образцы эпителиальных клеток десны берутся у каждого участника из места внедрения с использованием техники мазка в три разных момента времени: контрольный мазок берется непосредственно перед установкой зубного имплантата (T0); второй мазок берется через 90 дней после имплантации, то есть непосредственно перед установкой формирователя десны (Т1); и третий мазок берется через 21 день после установки формирователя десны (Т2).

За час до отбора проб участники воздерживаются от употребления какой-либо пищи и напитков. После 3-кратного полоскания ротовой полости прохладной водой для удаления отслоившихся клеток берется мазок Т0 путем осторожной чистки десны вокруг места, указанного для установки имплантата, а затем Т1 и Т2 вокруг имплантата с помощью цитощетки (Cytobrush Plus; GmbH. Дитрамцелль-Линден, Германия). Затем образцы наносят на закодированные лабораторные предметные стекла.

Клетки, нанесенные на микроскопические предметные стекла, высушивали на воздухе и фиксировали в метаноле (80% об./об.) при 4°С в течение 20 минут. Окрашивание проводят 5% раствором Гимза в течение 10 минут. После этого предметные стекла промывают водным дистиллятом и сушат на воздухе. Препараты исследуют под световым микроскопом Olympus CX40 (Olympus. Токио. Япония) при 400-кратном увеличении, а каждое микроядро и другие ядерные аномалии дополнительно верифицируют при 1000-кратном увеличении. Для каждого субъекта готовили два повторных предметных стекла и анализировали 1000 клеток эпителия на препарат для каждого времени отбора проб.

Ядерные аномалии, такие как микронуклеус, кариорексис (распад ядра, указывающий на апоптоз), кариолизис (растворение ядра, в основном указывающее на некроз и апоптоз), пикноз (уменьшение ядра из-за апоптоза), конденсированный хроматин (ДНК в комплексе с белками и апоптоз), зачатки ядра (предшественники микроядер или высокая плотность комплексов репарации ДНК) и разбитые яйца (ядра, которые выглядят стянутыми, двуядерные клетки (что указывает на нарушение скорости клеточной пролиферации)) оцениваются и квалифицируются.