Avaliação da Genotoxicidade de Implantes Dentários em Células Epiteliais Gengivais

Os pacientes são divididos em dois grupos, dependendo do sistema de implante dentário utilizado na terapia. Implantes dentários Ankylos (Dentsplay Sirona, Charlotte, EUA) são usados ​​no primeiro grupo de pacientes e Dentium SuperLine (Dentium Co., Seul, Coréia) no segundo grupo.

Os implantes são colocados de acordo com as instruções de cada fabricante do sistema de implantes e o tratamento foi realizado de acordo com as normas e indicações do paciente. Os procedimentos cirúrgicos em todos os pacientes são realizados pelo mesmo operador com a mesma abordagem cirúrgica, protocolo e instrumentação.

As cirurgias são realizadas sob anestesia local e antibióticos sistêmicos foram administrados de acordo com o procedimento padrão. Para garantir a higiene bucal pós-cirúrgica, os pacientes são orientados a enxaguar a cavidade oral com clorexidina até o dia da retirada dos pontos. As suturas são removidas 10 dias após a implantação. Os implantes estão cicatrizando ao serem submersos por 12 semanas com base no julgamento clínico do cirurgião, nas indicações dadas e na necessidade e preferência dos pacientes. Após a cicatrização, são colocados os formadores de gengiva.

Coleta de amostras e análise de micronúcleos em células epiteliais gengivais Para reduzir as variações individuais, os pacientes são observados longitudinalmente e cada sujeito é seu próprio controle. Amostras de células epiteliais gengivais são coletadas do local de implantação de cada participante usando a técnica de swab em três momentos diferentes: um swab de controle é coletado imediatamente antes da colocação do implante dentário (T0); a segunda zaragatoa é recolhida 90 dias após a implantação, ou seja, imediatamente antes da colocação do formador de gengiva (T1); e o terceiro swab é coletado 21 dias após a colocação do formador de gengiva (T2).

Uma hora antes da amostragem, os participantes abstêm-se de consumir qualquer alimento e bebida. Após enxaguar a cavidade oral 3 vezes com água morna para remover as células esfoliadas, um cotonete T0 é retirado escovando suavemente a gengiva ao redor do local indicado para a colocação do implante e posteriormente T1 e T2 ao redor do implante com um cytobrush (Cytobrush Plus; GmbH. Dietramszell-Linden, Alemanha). As amostras são subsequentemente aplicadas em lâminas de vidro de laboratório codificadas.

As células aplicadas às lâminas microscópicas são deixadas secar ao ar e fixadas em metanol (80% v/v) a 4°C por 20 minutos. A coloração é realizada com solução de Giemsa a 5% por 10 minutos. Depois, as lâminas são lavadas com água destilada e secas ao ar. As lâminas são examinadas no microscópio de luz Olympus CX40 (Olympus. Tóquio. Japão) com ampliação de 400×, e cada micronúcleo e outras anomalias nucleares são adicionalmente verificadas com ampliação de 1000×. Duas lâminas replicadas são preparadas para cada sujeito e 1000 células epiteliais por preparação foram analisadas para cada tempo de amostragem.

Anomalias nucleares, como micronúcleo, cariorrexe (desintegração nuclear indicando apoptose), cariólise (dissolução do núcleo indicando principalmente necrose e apoptose), picnose (encolhimento nuclear devido a apoptose), cromatina condensada (DNA complexado com proteínas e apoptose), brotos nucleares (precursores de micronúcleos, ou alta densidade de complexos de reparo de DNA) e ovos quebrados (núcleos que aparecem cinched, células binucleadas (indicando velocidade prejudicada de proliferação celular)) são estimados e qualificados.