Evaluación de genotoxicidad de implantes dentales en células epiteliales gingivales

Los pacientes se dividen en dos grupos según el sistema de implante dental utilizado en la terapia. Los implantes dentales Ankylos (Dentsplay Sirona, Charlotte, EE. UU.) se utilizan en el primer grupo de pacientes y Dentium SuperLine (Dentium Co., Seúl, Corea) en el segundo grupo.

Los implantes se colocaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante de cada sistema de implantes y el tratamiento se realizó de acuerdo con los estándares e indicaciones del paciente. Los procedimientos quirúrgicos en todos los pacientes son realizados por el mismo operador con el mismo abordaje quirúrgico, protocolo e instrumentación.

Las cirugías se realizan bajo anestesia local y se administraron antibióticos sistémicos de acuerdo con el procedimiento estándar. Para garantizar la higiene bucal posquirúrgica, se recomienda a los pacientes enjuagar la cavidad bucal con clorhexidina hasta el día de la retirada de las suturas. Las suturas se retiran 10 días después de la implantación. Los implantes cicatrizan sumergidos durante 12 semanas según el juicio clínico del cirujano, las indicaciones dadas y la necesidad y preferencia de los pacientes. Después de la cicatrización, se colocan formadores de encía.

Recolección de muestras y ensayo de micronúcleos en células epiteliales gingivales Para reducir las variaciones individuales, los pacientes se observan longitudinalmente y cada sujeto se sirve como su propio control. Se recolectan muestras de células epiteliales gingivales del sitio de implementación de cada participante utilizando la técnica de hisopado en tres puntos de tiempo diferentes: se toma un hisopo de control justo antes de la colocación del implante dental (T0); el segundo hisopo se toma 90 días después de la implantación, es decir, inmediatamente antes de la colocación del formador de encía (T1); y el tercer hisopado se toma 21 días después de la colocación del formador de encía (T2).

Una hora antes de la toma de muestras, los participantes se abstienen de consumir alimentos y bebidas. Después de enjuagar la cavidad oral 3 veces con agua tibia para eliminar las células exfoliadas, se toma un hisopo T0 cepillando suavemente la encía alrededor del lugar indicado para la colocación del implante y luego T1 y T2 alrededor del implante con un citocepillo (Cytobrush Plus; GmbH. Dietramszell-Linden, Alemania). Las muestras se aplican posteriormente a portaobjetos de vidrio de laboratorio codificados.

Las células aplicadas a portaobjetos microscópicos se dejan secar al aire y se fijan en metanol (80% v/v) a 4°C durante 20 minutos. La tinción se realiza con solución de Giemsa al 5% durante 10 minutos. Posteriormente, los portaobjetos se enjuagan con agua destilada y se secan al aire. Los portaobjetos se examinan con el microscopio óptico Olympus CX40 (Olympus. Tokio. Japón) con un aumento de 400x, y cada micronúcleo y otras anomalías nucleares también se verifican con un aumento de 1000x. Se preparan dos portaobjetos duplicados para cada sujeto y se analizan 1000 células epiteliales por preparación para cada tiempo de muestreo.

Anomalías nucleares, como micronúcleos, cariorrexis (desintegración nuclear que indica apoptosis), cariolisis (disolución del núcleo que indica principalmente necrosis y apoptosis), picnosis (encogimiento nuclear debido a apoptosis), cromatina condensada (ADN complejado con proteínas y apoptosis), brotes nucleares (precursores de micronúcleos, o alta densidad de complejos de reparación de ADN) y huevos rotos (núcleos que parecen ceñidos, células binucleadas (lo que indica una menor velocidad de proliferación celular)) son estimados y calificados.