Genotoxicitetsbedömning av tandimplantat i tandköttsepitelceller

Patienterna delas in i två grupper beroende på vilket tandimplantatsystem som används i behandlingen. Ankylos tandimplantat (Dentsplay Sirona, Charlotte, USA) används i den första gruppen patienter och Dentium SuperLine (Dentium Co., Seoul, Korea) i den andra gruppen.

Implantaten placeras i enlighet med respektive implantatsystemtillverkares instruktioner och behandlingen utfördes enligt patientens standarder och indikationer. Kirurgiska ingrepp på alla patienter utförs av samma operatör med samma kirurgiska tillvägagångssätt, protokoll och instrumentering.

Operationerna utförs under lokalbedövning och systemisk antibiotika gavs enligt standardprocedur. För att säkerställa munhygien efter kirurgi, rekommenderas patienter att skölja munhålan med klorhexidin fram till dagen för borttagning av suturerna. Suturerna avlägsnas 10 dagar efter implantation. Implantaten läker genom att vara nedsänkta i 12 veckor baserat på kirurgens kliniska bedömning, givna indikationer och patienternas behov och preferenser. Efter läkning placeras gingivabildare.

Provtagning och en mikrokärnanalys i tandköttsepitelceller För att minska individuella variationer observeras patienter longitudinellt och varje individ tjänar som sin egen kontroll. Prover av gingivala epitelceller samlas in från varje deltagares implementeringsplats med hjälp av pinnprovstekniken vid tre olika tidpunkter: en kontrollpinne tas strax före placeringen av tandimplantatet (T0); den andra provtagningspinnen tas 90 dagar efter implantation, vilket betyder omedelbart före placeringen av gingivabildaren (T1); och den tredje pinnen tas 21 dagar efter placeringen av gingivabildaren (T2).

En timme före provtagningen avstår deltagarna från att konsumera all mat och dryck. Efter sköljning av munhålan 3 gånger med ljummet vatten för att avlägsna exfolierade celler, tas en T0-pinne genom att försiktigt borsta tandköttet runt den plats som indikeras för implantatplacering och senare T1 och T2 runt implantatet med en cytoborste (Cytobrush Plus; GmbH. Dietramszell-Linden, Tyskland). Proverna appliceras därefter på kodade laboratorieglas.

Cellerna som appliceras på mikroskopiska objektglas får lufttorka och fixeras i metanol (80 % v/v) vid 4°C under 20 minuter. Färgning utförs med 5 % Giemsa-lösning i 10 minuter. Efteråt sköljs objektglasen med vattendestillat och lufttorkas. Objektglasen undersöks under Olympus CX40 ljusmikroskop (Olympus. Tokyo. Japan) med 400× förstoring, och varje mikrokärna och andra nukleära anomalier verifieras dessutom under 1000× förstoring. Två replikatobjektglas prepareras för varje individ och 1000 epitelceller per beredning analyserades för varje provtagningstid.

Nukleära anomalier, såsom mikronukleus, karyorrhexis (kärnans sönderfall som indikerar apoptos), karyolys (upplösning av kärnan som mestadels indikerar nekros och apoptos), pyknos (kärnkrympning på grund av apoptos), kondenserad kromatin med proteiner (DNA-komplex) (föregångare till mikrokärnor, eller hög täthet av DNA-reparationskomplex) och trasiga ägg (kärnor som ser ut att vara spända, binukleerade celler (som indikerar nedsatt cellproliferationshastighet)) uppskattas och kvalificeras.