Ocena genotoksyczności implantów dentystycznych w komórkach nabłonka dziąseł

Pacjentów dzieli się na dwie grupy w zależności od zastosowanego w terapii systemu implantologicznego. W pierwszej grupie pacjentów stosowane są implanty dentystyczne Ankylos (Dentsplay Sirona, Charlotte, USA), aw drugiej Dentium SuperLine (Dentium Co., Seul, Korea).

Implanty umieszczane są zgodnie z zaleceniami każdego producenta systemu implantologicznego, a leczenie zostało przeprowadzone zgodnie ze standardami i wskazaniami pacjenta. Zabiegi chirurgiczne na wszystkich pacjentach są wykonywane przez tego samego operatora przy użyciu tego samego podejścia chirurgicznego, protokołu i oprzyrządowania.

Operacje przeprowadzane są w znieczuleniu miejscowym i podano antybiotyki ogólnoustrojowe zgodnie ze standardową procedurą. W celu zapewnienia higieny jamy ustnej po zabiegu zaleca się płukanie jamy ustnej chlorheksydyną do dnia zdjęcia szwów. Szwy są usuwane 10 dni po implantacji. Implanty goją się poprzez zanurzenie na 12 tygodni w oparciu o ocenę kliniczną chirurga, podane wskazania oraz potrzeby i preferencje pacjentów. Po wygojeniu zakłada się szablony dziąseł.

Pobieranie próbek i test mikrojądrowy w komórkach nabłonka dziąseł Aby zredukować indywidualne odchylenia, pacjentów obserwuje się podłużnie, a każdy osobnik stanowi własną kontrolę. Próbki komórek nabłonka dziąseł są pobierane z miejsca implantacji każdego uczestnika przy użyciu techniki wymazowej w trzech różnych punktach czasowych: wymaz kontrolny jest pobierany tuż przed umieszczeniem implantu dentystycznego (T0); drugi wymaz pobierany jest 90 dni po implantacji, czyli bezpośrednio przed założeniem protezy dziąsłowej (T1); a trzeci wymaz pobiera się 21 dni po założeniu protezy dziąsłowej (T2).

Na godzinę przed pobraniem próbki uczestnicy powstrzymują się od spożywania jakichkolwiek pokarmów i napojów. Po trzykrotnym przepłukaniu jamy ustnej letnią wodą w celu usunięcia złuszczonych komórek, pobiera się wymaz T0 delikatnie szczotkując dziąsło wokół miejsca wskazanego do umieszczenia implantu, a następnie T1 i T2 wokół implantu za pomocą cytobrush (Cytobrush Plus; GmbH. Dietramszell-Linden, Niemcy). Próbki są następnie nakładane na kodowane szkiełka laboratoryjne.

Komórki naniesione na szkiełka mikroskopowe pozostawia się do wyschnięcia na powietrzu i utrwala w metanolu (80% obj./obj.) w temperaturze 4°C przez 20 minut. Barwienie przeprowadza się 5% roztworem Giemsy przez 10 minut. Następnie szkiełka przemywa się wodnym destylatem i suszy na powietrzu. Szkiełka bada się pod mikroskopem świetlnym Olympus CX40 (Olympus. Tokio. Japan) w powiększeniu 400×, a każde mikrojądro i inne anomalie jądrowe są dodatkowo weryfikowane przy powiększeniu 1000×. Dla każdego osobnika przygotowano dwa powtórzenia szkiełek i analizowano 1000 komórek nabłonka na preparat dla każdego czasu pobierania próbek.

Anomalie jądrowe, takie jak mikrojądro, kariorrhexis (rozpad jądra wskazujący na apoptozę), karioliza (rozpuszczenie jądra, głównie wskazujące na martwicę i apoptozę), pyknozę (kurczenie się jądra z powodu apoptozy), skondensowaną chromatynę (kompleks DNA z białkami i apoptozą), pąki jądrowe (prekursory mikrojąder lub kompleksy naprawcze DNA o dużej gęstości) i rozbite jaja (jądra, które wyglądają na ściśnięte, dwujądrzaste komórki (wskazujące na upośledzoną szybkość proliferacji komórek)) są oceniane i kwalifikowane.