Valutazione della genotossicità degli impianti dentali nelle cellule epiteliali gengivali

I pazienti sono divisi in due gruppi a seconda del sistema implantare utilizzato nella terapia. Gli impianti dentali Ankylos (Dentsplay Sirona, Charlotte, USA) sono utilizzati nel primo gruppo di pazienti e Dentium SuperLine (Dentium Co., Seoul, Corea) nel secondo gruppo.

Gli impianti sono posizionati secondo le istruzioni del produttore di ciascun sistema implantare e il trattamento è stato eseguito secondo gli standard e le indicazioni del paziente. Le procedure chirurgiche su tutti i pazienti vengono eseguite dallo stesso operatore con lo stesso approccio chirurgico, protocollo e strumentazione.

Gli interventi chirurgici vengono eseguiti in anestesia locale e gli antibiotici sistemici sono stati somministrati secondo la procedura standard. Per garantire l'igiene orale post-chirurgica, si consiglia ai pazienti di sciacquare il cavo orale con clorexidina fino al giorno della rimozione dei punti di sutura. Le suture vengono rimosse 10 giorni dopo l'impianto. Gli impianti guariscono se vengono immersi per 12 settimane in base al giudizio clinico del chirurgo, alle indicazioni fornite e alla necessità e preferenza dei pazienti. Dopo la guarigione, vengono posizionati i formatori di gengiva.

Prelievo di campioni e analisi del micronucleo nelle cellule epiteliali gengivali Per ridurre le variazioni individuali, i pazienti vengono osservati longitudinalmente e ogni soggetto viene servito come proprio controllo. Campioni di cellule epiteliali gengivali vengono raccolti dal sito di implementazione di ciascun partecipante utilizzando la tecnica del tampone in tre diversi momenti: un tampone di controllo viene prelevato appena prima del posizionamento dell'impianto dentale (T0); il secondo tampone viene prelevato 90 giorni dopo l'impianto, ovvero immediatamente prima del posizionamento del gingiva former (T1); e il terzo tampone viene prelevato 21 giorni dopo il posizionamento del formatore gengivale (T2).

Un'ora prima del campionamento, i partecipanti si astengono dal consumare cibi e bevande. Dopo aver risciacquato la cavità orale 3 volte con acqua tiepida per rimuovere le cellule esfoliate, viene prelevato un tampone T0 spazzolando delicatamente la gengiva attorno al punto indicato per l'inserimento dell'impianto e successivamente T1 e T2 attorno all'impianto con un cytobrush (Cytobrush Plus; GmbH. Dietramszell-Linden, Germania). I campioni vengono successivamente applicati a vetrini da laboratorio codificati.

Le cellule applicate ai vetrini microscopici vengono lasciate asciugare all'aria e fissate in metanolo (80% v/v) a 4°C per 20 minuti. La colorazione viene condotta con una soluzione di Giemsa al 5% per 10 minuti. Successivamente, i vetrini vengono risciacquati con acqua distillata e asciugati all'aria. I vetrini vengono esaminati al microscopio ottico Olympus CX40 (Olympus. Tokio. Giappone) con ingrandimento 400x, e ogni micronucleo e altre anomalie nucleari sono ulteriormente verificate con ingrandimento 1000x. Per ciascun soggetto vengono preparati due vetrini replicati e sono state analizzate 1000 cellule epiteliali per preparazione per ciascun tempo di campionamento.

Anomalie nucleari, come micronucleo, carioressi (disintegrazione nucleare che indica apoptosi), cariolisi (dissoluzione del nucleo che indica principalmente necrosi e apoptosi), picnosi (restringimento nucleare dovuto all'apoptosi), cromatina condensata (DNA complessato con proteine ​​e apoptosi), gemme nucleari (precursori di micronuclei, o alta densità di complessi di riparazione del DNA) e uova rotte (nuclei che sembrano cellule binucleate e strette (che indicano una ridotta velocità di proliferazione cellulare)) sono stimati e qualificati.