Hodnocení genotoxicity dentálních implantátů v buňkách gingiválního epitelu

Pacienti jsou rozděleni do dvou skupin podle použitého systému zubních implantátů při terapii. Zubní implantáty Ankylos (Dentsplay Sirona, Charlotte, USA) se používají v první skupině pacientů a Dentium SuperLine (Dentium Co., Soul, Korea) ve druhé skupině.

Implantáty jsou umístěny v souladu s pokyny každého výrobce implantátového systému a léčba byla provedena podle standardů a indikací pacienta. Operační výkony u všech pacientů provádí stejný operátor se stejným operačním přístupem, protokolem a přístrojovým vybavením.

Operace se provádějí v lokální anestezii a standardním postupem byla podávána systémová antibiotika. K zajištění pooperační ústní hygieny se pacientům doporučuje vyplachovat dutinu ústní chlorhexidinem až do dne odstranění stehů. Stehy se odstraní 10 dní po implantaci. Implantáty se hojí ponořením na 12 týdnů na základě klinického úsudku chirurga, daných indikací a potřeb a preferencí pacientů. Po zahojení se umístí gingivální formovače.

Odběr vzorků a mikronukleární test v gingiválních epiteliálních buňkách Aby se snížily individuální variace, pacienti jsou pozorováni podélně a každý subjekt je sloužil jako jeho vlastní kontrola. Vzorky gingiválních epiteliálních buněk se odebírají z místa implementace každého účastníka pomocí techniky výtěru ve třech různých časových bodech: kontrolní výtěr se odebere těsně před umístěním zubního implantátu (TO); druhý výtěr se odebere 90 dní po implantaci, což znamená bezprostředně před umístěním formovače dásně (T1); a třetí tampon se odebere 21 dní po umístění gingiválního formovače (T2).

Hodinu před odběrem vzorků se účastníci zdrží konzumace jakéhokoli jídla a nápojů. Po 3x opláchnutí ústní dutiny vlažnou vodou k odstranění exfoliovaných buněk se odebere tampon T0 jemným kartáčkem gingivy kolem místa určeného pro umístění implantátu a později T1 a T2 kolem implantátu cytokartáčkem (Cytobrush Plus; GmbH. Dietramszell-Linden, Německo). Vzorky jsou následně aplikovány na kódovaná laboratorní skla.

Buňky nanesené na mikroskopická sklíčka se nechají uschnout na vzduchu a fixují se v methanolu (80 % v/v) při 4 °C po dobu 20 minut. Barvení se provádí 5% roztokem Giemsa po dobu 10 minut. Poté se sklíčka opláchnou vodným destilátem a vysuší na vzduchu. Sklíčka se zkoumají pod světelným mikroskopem Olympus CX40 (Olympus. Tokio. Japonsko) se 400násobným zvětšením a každé mikronukleus a další jaderné anomálie jsou navíc ověřeny při 1000násobném zvětšení. Pro každý subjekt se připraví dvě replikační sklíčka a pro každý čas odběru vzorků se analyzuje 1000 epitelových buněk na preparát.

Jaderné anomálie, jako je mikronukleus, karyorrhexe (dezintegrace jádra indikující apoptózu), karyolýza (rozpuštění jádra většinou indikující nekrózu a apoptózu), pyknóza (stažení jádra v důsledku apoptózy), kondenzovaný chromatin (DNA v komplexu s proteiny a apoptózou), jaderný pupen (prekurzory mikrojader nebo vysoká hustota opravných komplexů DNA) a rozbitá vajíčka (jádra, která vypadají jako sevřené, dvoujaderné buňky (indikující zhoršenou rychlost buněčné proliferace)) jsou odhadnuty a kvalifikovány.