Bewertung der Genotoxizität von Zahnimplantaten in gingivalen Epithelzellen

Die Patienten werden je nach dem in der Therapie verwendeten Zahnimplantatsystem in zwei Gruppen eingeteilt. In der ersten Patientengruppe kommen Ankylos Zahnimplantate (Dentsplay Sirona, Charlotte, USA) und in der zweiten Gruppe Dentium SuperLine (Dentium Co., Seoul, Korea) zum Einsatz.

Die Implantate wurden gemäß den Anweisungen des jeweiligen Implantatsystemherstellers platziert und die Behandlung wurde gemäß den Standards und Indikationen des Patienten durchgeführt. Chirurgische Eingriffe werden bei allen Patienten von demselben Operateur mit demselben chirurgischen Ansatz, Protokoll und Instrumentarium durchgeführt.

Die Operationen werden unter örtlicher Betäubung durchgeführt und systemische Antibiotika wurden gemäß Standardverfahren verabreicht. Um die postoperative Mundhygiene zu gewährleisten, wird den Patienten empfohlen, die Mundhöhle bis zum Tag der Nahtentfernung mit Chlorhexidin zu spülen. Die Fäden werden 10 Tage nach der Implantation entfernt. Die Implantate heilen, indem sie 12 Wochen lang eingetaucht bleiben, basierend auf dem klinischen Urteil des Chirurgen, den gegebenen Indikationen und den Bedürfnissen und Präferenzen der Patienten. Nach der Einheilung werden Gingivaformer eingesetzt.

Probenentnahme und Mikronukleus-Assay in gingivalen Epithelzellen Um individuelle Schwankungen zu reduzieren, werden die Patienten längs beobachtet und jeder Proband dient als seine eigene Kontrolle. Proben von gingivalen Epithelzellen werden an der Implantationsstelle jedes Teilnehmers unter Verwendung der Abstrichtechnik zu drei verschiedenen Zeitpunkten entnommen: Ein Kontrollabstrich wird unmittelbar vor dem Einsetzen des Zahnimplantats (T0) entnommen; der zweite Abstrich erfolgt 90 Tage nach der Implantation, d. h. unmittelbar vor dem Einsetzen des Gingivaformers (T1); und der dritte Abstrich wird 21 Tage nach dem Einsetzen des Gingivaformers (T2) entnommen.

Eine Stunde vor der Probenahme verzichten die Teilnehmer auf jegliche Speisen und Getränke. Nach 3-maligem Spülen der Mundhöhle mit lauwarmem Wasser, um abgeblätterte Zellen zu entfernen, wird ein T0-Abstrich entnommen, indem die Gingiva um die für die Implantatinsertion angezeigte Stelle und später T1 und T2 um das Implantat herum mit einer Zytobürste (Cytobrush Plus; GmbH. Dietramszell-Linden, Deutschland). Anschließend werden die Proben auf codierte Laborglasträger aufgetragen.

Die auf mikroskopische Objektträger aufgetragenen Zellen werden an der Luft trocknen gelassen und in Methanol (80 % v/v) bei 4°C für 20 Minuten fixiert. Die Färbung wird mit 5 % Giemsa-Lösung für 10 Minuten durchgeführt. Anschließend werden die Objektträger mit Wasserdestillat gespült und an der Luft getrocknet. Die Objektträger werden unter dem Lichtmikroskop Olympus CX40 (Olympus. Tokio. Japan) mit 400-facher Vergrößerung, und jeder Mikronukleus und andere Kernanomalien werden zusätzlich unter 1000-facher Vergrößerung verifiziert. Für jede Versuchsperson werden zwei Replikat-Objektträger hergestellt und 1000 Epithelzellen pro Präparation wurden für jede Probenahmezeit analysiert.

Kernanomalien wie Mikronukleus, Karyorrhexis (Kernzerfall, der auf Apoptose hinweist), Karyolyse (Auflösung des Kerns, der meistens auf Nekrose und Apoptose hinweist), Pyknose (Kernschrumpfung aufgrund von Apoptose), kondensiertes Chromatin (mit Proteinen und Apoptose komplexierte DNA), Kernknospen (Vorläufer von Mikronuklei oder hochdichte DNA-Reparaturkomplexe) und zerbrochene Eier (Kerne, die zusammengepresste, zweikernige Zellen erscheinen (was auf eine beeinträchtigte Geschwindigkeit der Zellproliferation hinweist)) werden geschätzt und qualifiziert.