Presisjonsmedisin i LN: En multisenter Proof-of-Concept-studie for histopatologisk biomarkøranalyse i nyrebiopsi

Prøvestørrelse For denne proof-of-concept-studien er målet vårt å analysere rundt 60 nyrebiopsiprøver (kan utvides i henhold til de oppnådde resultatene).

Metoder:

Følgende generelle variabler vil bli samlet inn:

• demografiske data: alder, kjønn, etnisitet.
• kliniske data om SLE:
• diagnose og kronologiske data: tidspunkt for SLE-diagnose, tidspunkt for LN-diagnose, tidspunkt for SLE-diagnose til LN.
• 1997 ACR SLE klassifiseringskriterier,
• aktivitet: involvering av forskjellige organer og systemer av SELENA-SLEDAI på tidspunktet for LN-diagnose og på tidspunktet for siste evaluering av pasienten (eller død, hvis aktuelt).
• skade: etter vare og etter domene i henhold til Systemic Lupus International Collaborating Clinics Damage Index (SDI) på tidspunktet for LN-diagnose og på tidspunktet for siste evaluering av pasienten (eller død, hvis aktuelt).
• komorbiditet: arteriell hypertensjon, diabetes, dyslipemi, røykevaner, alvorlige infeksjoner, neoplasmer, etc. på tidspunktet for LN-diagnose og på tidspunktet for siste evaluering av pasienten (eller død, hvis aktuelt).
• laboratoriedata på tidspunktet for LN-diagnose og på tidspunktet for siste evaluering av pasienten (eller dødsfall, hvis aktuelt):
• blod (generelle tester): akuttfasereaktanter (erytrocyttsedimenteringshastighet og C-reaktivt protein), full blodtelling, kreatinin, glomerulær filtrasjonshastighet, blodurea nitrogen, leverfunksjonstester, lipidprofil.
• blod (serologiske tester): komplement (C3 og C4), nivåer av anti-dsDNA antistoffer, antifosfolipid antistoffer: antikardiolipin (Ig M og Ig G), anti-beta2GP-1 (Ig M og Ig G), lupus antikoagulant.
• urin: hematuri, piuri, proteinuri, gips.
• histopatologiske markører for nyrebiopsi:
• histologisk klasse i henhold til 2003 ISN/RPS-klassifiseringen.
• National Institutes of Health (NIH) aktivitetsindeks: score (maksimalt 24) og etter element (endokapillær hypercellulæritet, nøytrofiler/karyiorrhexis, hyaline avleiringer/trådløkker, fibrinoid nekrose, cellulær eller fibrocellulær halvmåne, interstitiell betennelse).
• National Institutes of Health (NIH) kronisitetsindeks: score (maksimalt 12) og etter element (global glomerulosklerose, fibrøse halvmåner, tubulær atrofi, interstitiell fibrose).
• markører relatert til B-lymfocytter som kan inkludere, men ikke er begrenset til: CD19, CD20 og CD138.
• markører relatert til BLyS (B-lymfocyttstimulator) og dets funksjonelle konsekvenser som kan inkludere, men ikke er begrenset til, uttrykk for BLyS og dets reseptorer: BAFF-R, BCMA og TACI.
• markører relatert til andre cellelinjer som kan inkludere, men ikke er begrenset til: CD3 for T-celler og CD68 for makrofager.
• markører hvis bestemmelse i urin har vist seg nyttig i diagnostisering og oppfølging av LN, som kan inkludere, men ikke er begrenset til, det proinflammatoriske cytokinet Monocyte Chemoattractant Protein-1 (MCP-1) og Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin (NGAL).
• SLE-terapeutiske data (inkludert behandlingens varighet):
• behandlinger for SLE før diagnosen LN: antimalariamidler, glukokortikoider (maksimal dose), immundempende midler: azatioprin (AZA), mofetilmykofenolat (MMF), cyklofosfamid (CYC); biologiske terapier: belimumab, rituximab.
• behandling av LN: glukokortikoider (maksimal dose), immundempende midler: AZA, MMF, CYC; biologiske terapier: belimumab, rituximab.
• terapeutiske data om komorbiditeter (inkludert varighet av behandlingen): antihypertensiva, orale antidiabetika, insulin, hypolipidemiske legemidler.
• Evolusjon/prognose av SLE: akkumulert skade ved bruk av SDI (etter vare og etter domene), komorbiditeter som oppstår, alvorlige infeksjoner, organsvikt, død.

Variabler vil bli samlet inn for å etablere ulike responsmønstre på behandling og utvikling av LN:

1. fullstendig nyrerespons, definert i henhold til EULAR/ERA-EDTA-anbefalinger (13): proteinuri <0,5 g/24 timer og (nær) normal estimert GFR.
2. delvis nyrerespons, definert i henhold til EULAR/ERA-EDTA-anbefalinger: ≥50 % proteinuri-reduksjon til subnefrotiske nivåer og (nær) normal eGFR
3. ingen respons: alle de andre sakene.
4. proteinurinivåer ved 12 måneders behandling,
5. nyretilbakefall som definert som reproduserbar økning i uPCR til >1 g hvis baseline-verdien var <0,2 g, til >2 g hvis baseline-verdien var mellom 0,2 g og 1 g, eller mer enn to ganger verdien ved baseline hvis baseline-verdien var >1 g OG/ELLER reproduserbar reduksjon i GFR på >20 %, ledsaget av proteinuri (>1 g), og/eller RBC og/eller WBC cellulære gips (ja/nei og antall oppbluss), e) tid til første gang bluss, f) kronisk nyresvikt,
6. nyresykdom i sluttstadiet som krever dialyse og/eller nyretransplantasjon. Datainnsamlingen vil være basert på den kliniske historien til pasientene som er inkludert i studien.

Konfidensialitet vil bli respektert i samsvar med RD 1720/2007 og databeskyttelseslovene. Godkjenning vil bli bedt om fra Galician Clinical Research Ethics Committee (CEIC) samt fra CEIC for hvert senter, om nødvendig.

EKSPERIMENTELL STRATEGI OG RASJON I dette prosjektet skal vi bruke nyrebiopsier fra pasienter med LN. Disse prøvene, konservert i 10 % formaldehyd og innebygd i parafinblokker av de tilsvarende Anatomic Pathology Services, tilsvarer pasienter med LN som gjennomgikk nyrebiopsi i sentrene som deltar i prosjektet.

BLyS (B-lymfocyttstimulator) spiller en nøkkelrolle i patofysiologien til LN. Derfor vil vi i denne studien fokusere på markører relatert til BLyS og dets funksjonelle konsekvenser. På den ene siden vil vi analysere blant annet ekspresjonsnivåene av BLyS og dets reseptorer (BAFF-R, BCMA og TACI), siden ekspresjonsnivåene av BLyS og dets reseptorer er forhøyet i serum- og nyrebiopsier av pasienter med LN og er assosiert med sykdomsprogresjon og alvorlighetsgrad.

På den annen side, fordi BLyS induserer B-celleoverlevelse, vil vi analysere ekspresjonsnivåene til forskjellige B-cellemarkører som CD19 og CD20 blant andre. Til slutt vil vi analysere plasmacellemarkøren CD138, siden plasmacelleinfiltrasjon er assosiert med økt alvorlighetsgrad av lupus nefritt. Vi vil analysere ekspresjonsnivåene til markører for andre cellelinjer som CD3 for T-celler og CD68 for makrofager.

Vi vil også analysere minst 2 biomarkører hvis urinnivåer hos pasienter med LN har vært assosiert med en dårligere prognose av LN: kjemokinet MCP-1 (monocytt kjemoattraktant protein-1) og enzymet NGAL (nøytrofil gelatinase-assosiert lipokalin).

Uttrykket av disse markørene vil i utgangspunktet bli bestemt ved immunhistokjemisk farging av nyrebiopsier, som er bevart i formaldehyd. Prøvene vil bli farget og analysert hovedsakelig i den anatomiske patologitjenesten til "Complejo Hospitalario Universitario de Vigo" og i laboratoriene til "Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur" (IISGS), selv om de forskjellige deltakende sentrene vil delta i dette arbeidet i den grad det er mulig og kostnadseffektivt for prosjektet. Ulike metoder for kvantifisering vil bli brukt i funksjon av flekkene til de forskjellige markørene.

STATISTISK ANALYSE I den deskriptive studien vil numeriske variabler uttrykkes som gjennomsnitt ± standardavvik (SD) eller median og interkvartilt område (IQR), avhengig av om fordelingen er normal eller ikke. Vi vil etablere 2 grupper av pasienter, i henhold til responsen på behandlingen og den kliniske utviklingen til pasienten med LN (dvs. fullstendig remisjon ja/nei). For å etablere forskjeller mellom pasienter i disse 2 gruppene vil vi bruke χ2-testen for kategoriske variabler eller Fishers eksakte test når de forventede frekvensene er små, t-Student-testen for normale kontinuerlige variabler, og Mann-Whitney U-testen for variabler med ikke-normal fordeling.

Ulike metoder for å analysere og/eller redusere problemet med manglende data vil bli brukt.

Prosentandelen av positive celler og fargeintensiteten vil være korrelert med de forskjellige responsmønstrene på behandling og utviklingen av LN.

Univariate og multivariate lineære logistiske regresjonsanalyser vil bli utført for å utforske sammenhengene mellom de forskjellige variablene som er studert (klinisk, histopatologisk, terapeutisk...) og tilstedeværelsen av de forskjellige nyreutfallene (avhengig variabel). Verdier på p <0,05 vil bli vurdert som signifikante.

Vi vil utføre andre forskjellige statistiske metoder i henhold til resultatene vi observerer fra vår første analyse.

Statistiske analyser vil bli utført av statistikkspesialisten i IRIDIS-gruppen.

TIDSLINJER Utvikling av den endelige protokollen: måned 1. Innlevering og godkjenning av etisk komité: måned 1-3. Identifisering og klargjøring av nyreprøver: måneder 4-5. Informert samtykke signaturer: måneder 4-6. Forsendelse av nyreprøver: måneder 4-6. Anatomopatologiske og laboratoriestudier: måneder 7-12. Gjennomgang av kliniske diagrammer: måneder 7-12. Overvåking av databasen: måned 13-15. Statistisk analyse: måned 16. Utdyping av sluttrapport: måned 17-18.

FORSKNINGSTEAM Hovedetterforsker: Dr. José Mª Pego Reigosa, revmatologisk spesialist, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo. IRIDIS-VIGO Group (Undersøkelse i revmatologi og immunmedierte sykdommer), Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur (IISGS).

Forskere i koordineringssenteret: Dr. Irene Altabás González (revmatolog, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, IRIDIS-VIGO Group), Dr. Noemí Martínez López de Castro (Sykehusfarmasøyt, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, IRIDIS-VIGO Group), Dr. Carmen Fachal Bermúdez (nefropatolog, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo) og Dr. Samuel García Pérez (molekylærbiolog, seniorforsker, IRIDIS-VIGO Group).

Samarbeidende sentre (revmatologi, nefrologi, patologisk anantomitjenester): Hospital 12 de octubre (Madrid, Spania), Hospital Araba (Vitoria, Spania), Hospital Germans Trias i Pujol (Barcelona, ​​Spania), Hospital del Mar (Barcelona, ​​Spania) og Sykehus Dr. Negrín (Gran Canaria, Spania).