Precision Medicine in LN: A Multicenter Proof-of-Concept-studie för histopatologisk biomarköranalys vid njurbiopsi

Provstorlek För denna proof-of-concept-studie är vårt mål att analysera cirka 60 njurbiopsiprover (expanderbara enligt erhållna resultat).

Metoder:

Följande allmänna variabler kommer att samlas in:

• demografiska data: ålder, kön, etnicitet.
• kliniska data om SLE:
• diagnos och kronologiska data: tidpunkt för SLE-diagnos, tidpunkt för LN-diagnos, tidform SLE-diagnos till LN.
• 1997 ACR SLE klassificeringskriterier,
• aktivitet: involvering av olika organ och system av SELENA-SLEDAI vid tidpunkten för LN-diagnostik och vid tidpunkten för den senaste utvärderingen av patienten (eller dödsfall, om tillämpligt).
• skada: per artikel och per domän enligt Systemic Lupus International Collaborating Clinics Damage Index (SDI) vid tidpunkten för LN-diagnos och vid tidpunkten för den senaste utvärderingen av patienten (eller dödsfall, om tillämpligt).
• samsjuklighet: arteriell hypertoni, diabetes, dyslipemi, rökvana, svåra infektioner, neoplasmer etc. vid tidpunkten för LN-diagnos och vid tidpunkten för den senaste utvärderingen av patienten (eller dödsfall, om tillämpligt).
• laboratoriedata vid tidpunkten för LN-diagnostik och vid tidpunkten för den senaste utvärderingen av patienten (eller dödsfall, om tillämpligt):
• blod (allmänna tester): akutfasreaktanter (erytrocytsedimentationshastighet och C-reaktivt protein), fullt blodvärde, kreatinin, glomerulär filtrationshastighet, blodureakväve, leverfunktionstester, lipidprofil.
• blod (serologiska tester): komplement (C3 och C4), nivåer av anti-dsDNA-antikroppar, antifosfolipidantikroppar: antikardiolipin (Ig M och Ig G), anti-beta2GP-1 (Ig M och Ig G), lupus antikoagulant.
• urin: hematuri, piuri, proteinuri, gips.
• histopatologiska markörer för njurbiopsi:
• histologisk klass enligt 2003 års ISN/RPS-klassificering.
• National Institutes of Health (NIH) aktivitetsindex: poäng (maximalt 24) och per post (endokapillär hypercellularitet, neutrofiler/karyiorrhexis, hyalina avlagringar/trådslingor, fibrinoid nekros, cellulär eller fibrocellulär halvmåne, interstitiell inflammation).
• National Institutes of Health (NIH) kronicitetsindex: poäng (maximalt 12) och per post (global glomeruloskleros, fibrösa halvmånar, tubulär atrofi, interstitiell fibros).
• markörer relaterade till B-lymfocyter som kan innefatta men inte är begränsade till: CD19, CD20 och CD138.
• markörer relaterade till BLyS (B-lymfocytstimulator) och dess funktionella konsekvenser som kan innefatta men inte begränsas till uttryck av BLyS och dess receptorer: BAFF-R, BCMA och TACI.
• markörer relaterade till andra cellinjer som kan innefatta men inte är begränsade till: CD3 för T-celler och CD68 för makrofager.
• markörer vars bestämning i urin har visat sig användbara vid diagnos och uppföljning av LN, vilket kan innefatta men inte begränsas till det proinflammatoriska cytokinet Monocyte Chemoattractant Protein-1 (MCP-1) och Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin (NGAL).
• SLE-terapeutiska data (inklusive behandlingens varaktighet):
• behandlingar för SLE före diagnosen LN: antimalariamedel, glukokortikoider (maximal dos), immunsuppressiva medel: azatioprin (AZA), mofetilmykofenolat (MMF), cyklofosfamid (CYC); biologiska terapier: belimumab, rituximab.
• behandling av LN: glukokortikoider (maximal dos), immunsuppressiva medel: AZA, MMF, CYC; biologiska terapier: belimumab, rituximab.
• terapeutiska data om komorbiditeter (inklusive behandlingens varaktighet): antihypertensiva medel, orala antidiabetika, insulin, hypolipidemiska läkemedel.
• Utveckling/prognos för SLE: ackumulerad skada genom användning av SDI (per produkt och per domän), komorbiditeter som uppstår, allvarliga infektioner, organsvikt, död.

Variabler kommer att samlas in för att fastställa olika svarsmönster på behandling och utveckling av LN:

1. fullständigt njursvar, definierat enligt EULAR/ERA-EDTA-rekommendationer (13): proteinuri <0,5 g/24 timmar och (nära) normal uppskattad GFR.
2. partiellt njursvar, definierat enligt EULAR/ERA-EDTA-rekommendationer: ≥50 % proteinuriminskning till subnefrotiska nivåer och (nära) normal eGFR
3. inget svar: alla andra fall.
4. proteinurinivåer vid 12 månaders behandling,
5. njurrelaps som definieras som reproducerbar ökning av uPCR till >1 g om baslinjevärdet var <0,2 g, till >2 g om baslinjevärdet var mellan 0,2 g och 1 g, eller mer än två gånger värdet vid baslinjen om baslinjevärdet var >1 g OCH/ELLER reproducerbar minskning av GFR på >20 %, åtföljd av proteinuri (>1 g) och/eller RBC och/eller WBC cellulära gipsningar (ja/nej och antal utbrott), e) tid till första flare, f) kronisk njursvikt,
6. njursjukdom i slutstadiet som kräver dialys och/eller njurtransplantation. Datainsamlingen kommer att baseras på den kliniska historien för de patienter som ingår i studien.

Sekretess kommer att respekteras i enlighet med RD 1720/2007 och dataskyddslagarna. Godkännande kommer att begäras från den galiciska kliniska forskningsetiska kommittén (CEIC) samt från CEIC för varje center, om nödvändigt.

EXPERIMENTELL STRATEGI OCH RATIONAL I detta projekt kommer vi att använda njurbiopsier från patienter med LN. Dessa prover, konserverade i 10 % formaldehyd och inbäddade i paraffinblock av motsvarande Anatomic Pathology Services, motsvarar patienter med LN som genomgått njurbiopsi i de centra som deltar i projektet.

BLyS (B-lymfocytstimulator) spelar en nyckelroll i patofysiologin för LN. Därför kommer vi i denna studie att fokusera på markörer relaterade till BLyS och dess funktionella konsekvenser. Å ena sidan kommer vi att analysera bland annat expressionsnivåerna av BLyS och dess receptorer (BAFF-R, BCMA och TACI), eftersom expressionsnivåerna av BLyS och dess receptorer är förhöjda i serum- och njurbiopsier av patienter med LN och är associerad med sjukdomsprogression och svårighetsgrad.

Å andra sidan, eftersom BLyS inducerar B-cellsöverlevnad, kommer vi att analysera uttrycksnivåerna för olika B-cellsmarkörer som CD19 och CD20 bland andra. Slutligen kommer vi att analysera plasmacellsmarkören CD138, eftersom plasmacellsinfiltration är associerad med ökad svårighetsgrad av lupus nefrit. Vi kommer att analysera uttrycksnivåerna för markörer för andra cellinjer såsom CD3 för T-celler och CD68 för makrofager.

Vi kommer också att analysera minst 2 biomarkörer vars urinnivåer hos patienter med LN har associerats med en sämre prognos för LN: kemokinet MCP-1 (monocyt chemoattractant protein-1) och enzymet NGAL (neutrofil gelatinas-associerat lipokalin).

Uttrycket av dessa markörer kommer initialt att bestämmas genom immunhistokemisk färgning av njurbiopsier, som bevaras i formaldehyd. Proverna kommer att färgas och analyseras huvudsakligen i den anatomiska patologitjänsten vid "Complejo Hospitalario Universitario de Vigo" och i laboratorierna vid "Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur" (IISGS), även om de olika deltagande centren kommer att delta i detta arbete i den mån det är möjligt och kostnadseffektivt för projektet. Olika metoder för kvantifiering kommer att användas beroende på fläckarna på de olika markörerna.

STATISTISK ANALYS I den deskriptiva studien kommer numeriska variabler att uttryckas som medelvärde ± standardavvikelse (SD) eller median- och interkvartilintervall (IQR), beroende på om fördelningen är normal eller inte. Vi kommer att etablera 2 grupper av patienter, beroende på svaret på behandlingen och den kliniska utvecklingen av patienten med LN (dvs fullständig remission ja/nej). För att fastställa skillnader mellan patienter i dessa 2 grupper kommer vi att använda χ2-testet för kategoriska variabler eller Fishers exakta test när de förväntade frekvenserna är små, t-Student-testet för normala kontinuerliga variabler och Mann-Whitney U-testet för variabler med icke-normalfördelning.

Olika metoder för att analysera och/eller mildra problemet med saknade data kommer att användas.

Andelen positiva celler och färgningsintensiteten kommer att korreleras med de olika mönstren för svar på behandling och utveckling av LN.

Univariata och multivariata linjära logistiska regressionsanalyser kommer att utföras för att utforska sambanden mellan de olika studerade variablerna (kliniska, histopatologiska, terapeutiska...) och förekomsten av de olika njurutfallen (beroende variabel). Värden på p <0,05 kommer att anses vara signifikanta.

Vi kommer att utföra andra olika statistiska metoder enligt de resultat som vi observerar från vår inledande analys.

Statistiska analyser kommer att utföras av IRIDIS-gruppens statistiska specialist.

TIDSLINJER Utveckling av det definitiva protokollet: månad 1. Inlämning och godkännande av etikkommittén: månader 1-3. Identifiering och beredning av njurprover: månader 4-5. Underskrifter för informerat samtycke: månader 4-6. Leverans av njurprover: månader 4-6. Anatomopatologiska studier och laboratoriestudier: månader 7-12. Genomgång av kliniska diagram: månader 7-12. Övervakning av databasen: månader 13-15. Statistisk analys: månad 16. Utarbetning av slutrapporten: månad 17-18.

FORSKNINGSTEAM Huvudutredare: Dr. José Mª Pego Reigosa, reumatologispecialist, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo. IRIDIS-VIGO Group (Utredning i reumatologi och immunförmedlade sjukdomar), Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur (IISGS).

Forskare i det koordinerande centret: Dr Irene Altabás González (reumatolog, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, IRIDIS-VIGO Group), Dr Noemí Martínez López de Castro (sjukhusfarmaceut, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, IRIDIS-VIGO Group), Dr. Carmen Fachal Bermúdez (nefropatolog, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo) och Dr Samuel García Pérez (molekylärbiolog, seniorforskare, IRIDIS-VIGO Group).

Samarbetscentrum (reumatologi, nefrologi, patologiska anantomitjänster): Hospital 12 de octubre (Madrid, Spanien), Hospital Araba (Vitoria, Spanien), Hospital Germans Trias i Pujol (Barcelona, ​​Spanien), Hospital del Mar (Barcelona, ​​Spanien) och Hospital Dr. Negrín (Gran Canaria, Spanien).