Прецизионная медицина при ВН: многоцентровое исследование для проверки концепции гистопатологического анализа биомаркеров при биопсии почки

Размер выборки Для этого исследования, подтверждающего концепцию, наша цель состоит в том, чтобы проанализировать около 60 образцов почечной биопсии (с возможностью расширения в соответствии с полученными результатами).

Методы:

Будут собраны следующие общие переменные:

• демографические данные: возраст, пол, этническая принадлежность.
• клинические данные по СКВ:
• диагноз и хронологические данные: время установления диагноза СКВ, время установления диагноза ВН, время от диагноза СКВ до ВН.
• Критерии классификации ACR СКВ 1997 г.,
• активность: поражение различных органов и систем SELENA-SLEDAI во время диагностики ВН и во время последнего обследования пациента (или смерти, если применимо).
• повреждения: по элементам и доменам в соответствии с индексом повреждений (SDI) Systemic Lupus International Collaborating Clinics Damage Index (SDI) во время диагностики ВН и во время последней оценки состояния пациента (или смерти, если применимо).
• сопутствующая патология: артериальная гипертензия, сахарный диабет, дислипемия, курение, тяжелые инфекции, новообразования и др. на момент постановки диагноза ВН и на момент последнего обследования пациента (или смерти, если применимо).
• лабораторные данные на момент постановки диагноза ВН и на момент последней оценки состояния пациента (или смерти, если применимо):
• кровь (общие анализы): реагенты острой фазы (СОЭ и С-реактивный белок), общий анализ крови, креатинин, скорость клубочковой фильтрации, азот мочевины крови, печеночные пробы, липидограмма.
• кровь (серологические тесты): комплемент (С3 и С4), уровни антител к дцДНК, антифосфолипидные антитела: антикардиолипин (Ig M и Ig G), анти-бета2GP-1 (Ig M и Ig G), волчаночный антикоагулянт.
• моча: гематурия, пиурия, протеинурия, цилиндры.
• гистопатологические маркеры биопсии почки:
• гистологический класс по классификации ISN/RPS 2003 года.
• Индекс активности Национального института здоровья (NIH): балл (максимум 24) и по пунктам (эндокапиллярная гиперклеточность, нейтрофилы/кариорексис, гиалиновые отложения/проволочные петли, фибриноидный некроз, клеточные или фиброцеллюлярные полулуния, интерстициальное воспаление).
• Индекс хронизации Национального института здоровья (NIH): балл (максимум 12) и по пунктам (глобальный гломерулосклероз, фиброзные полулуния, канальцевая атрофия, интерстициальный фиброз).
• маркеры, относящиеся к В-лимфоцитам, которые могут включать, но не ограничиваются ими: CD19, CD20 и CD138.
• маркеры, связанные с BLyS (стимулятором В-лимфоцитов) и его функциональными последствиями, которые могут включать, помимо прочего, экспрессию BLyS и его рецепторов: BAFF-R, BCMA и TACI.
• маркеры, относящиеся к другим линиям клеток, которые могут включать, но не ограничиваться ими: CD3 для Т-клеток и CD68 для макрофагов.
• маркеры, определение которых в моче оказалось полезным в диагностике и последующем наблюдении за ВН, которые могут включать, помимо прочего, провоспалительный цитокин Моноцитарный хемоаттрактантный белок-1 (MCP-1) и липокалин, ассоциированный с нейтрофильной желатиназой (NGAL).
• Терапевтические данные по СКВ (включая продолжительность лечения):
• лечение СКВ до постановки диагноза ВН: противомалярийные препараты, глюкокортикоиды (максимальная доза), иммунодепрессанты: азатиоприн (АЗА), мофетил микофенолат (ММФ), циклофосфан (ЦФ); биологическая терапия: белимумаб, ритуксимаб.
• лечение ВН: глюкокортикоиды (максимальная доза), иммунодепрессанты: АЗА, ММФ, ЦИК; биологическая терапия: белимумаб, ритуксимаб.
• терапевтические данные сопутствующих заболеваний (включая продолжительность лечения): антигипертензивные средства, пероральные противодиабетические средства, инсулин, гиполипидемические препараты.
• Эволюция/прогноз СКВ: накопленный ущерб при использовании SDI (по пунктам и доменам), нарастание сопутствующих заболеваний, тяжелые инфекции, органная недостаточность, смерть.

Переменные будут собраны для установления различных моделей ответа на лечение и развития ВН:

1. полный почечный ответ, определенный в соответствии с рекомендациями EULAR/ERA-EDTA (13): протеинурия <0,5 г/24 часа и (почти) нормальная расчетная СКФ.
2. частичный почечный ответ, определенный в соответствии с рекомендациями EULAR/ERA-EDTA: снижение протеинурии на ≥50% до субнефротического уровня и (почти) нормальная рСКФ
3. нет ответа: все остальные случаи.
4. уровень протеинурии через 12 месяцев лечения,
5. почечный рецидив, определяемый как воспроизводимое увеличение uPCR до >1 г, если исходное значение было <0,2 г, до >2 г, если исходное значение составляло от 0,2 до 1 г, или более чем в два раза по сравнению с исходным значением, если исходное значение составил >1 г И/ИЛИ воспроизводимое снижение СКФ >20%, сопровождающееся протеинурией (>1 ​​г) и/или эритроцитами и/или лейкоцитарными цилиндрами (да/нет и количество вспышек), д) время до первого обострение, е) хроническая почечная недостаточность,
6. терминальная стадия почечной недостаточности, требующая диализа и/или трансплантации почки. Сбор данных будет основываться на истории болезни пациентов, включенных в исследование.

Конфиденциальность будет соблюдаться в соответствии с RD 1720/2007 и законами о защите данных. Утверждение будет запрошено Галисийским комитетом по этике клинических исследований (CEIC), а также, при необходимости, CEIC каждого центра.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ СТРАТЕГИЯ И ОБОСНОВАНИЕ В этом проекте мы будем использовать биоптаты почек пациентов с ВН. Эти образцы, законсервированные в 10% формальдегиде и залитые в парафиновые блоки соответствующими патологоанатомическими службами, соответствуют пациентам с ВН, которым была проведена биопсия почки в центрах, участвующих в проекте.

BLyS (стимулятор В-лимфоцитов) играет ключевую роль в патофизиологии ВН. Поэтому в этом исследовании мы сосредоточимся на маркерах, связанных с BLyS, и его функциональных последствиях. С одной стороны, мы проанализируем среди прочего уровни экспрессии BLyS и его рецепторов (BAFF-R, BCMA и TACI), поскольку уровни экспрессии BLyS и его рецепторов повышены в биоптатах сыворотки и почек пациентов с ВН и связаны с прогрессированием и тяжестью заболевания.

С другой стороны, поскольку BLyS индуцирует выживание В-клеток, мы проанализируем уровни экспрессии различных маркеров В-клеток, таких как CD19 и CD20 среди прочих. Наконец, мы проанализируем маркер плазматических клеток CD138, поскольку инфильтрация плазматических клеток связана с усилением тяжести волчаночного нефрита. Мы проанализируем уровни экспрессии маркеров других клеточных линий, таких как CD3 для Т-клеток и CD68 для макрофагов.

Мы также проанализируем как минимум 2 биомаркера, уровни которых в моче у пациентов с ВН связаны с худшим прогнозом ВН: хемокин MCP-1 (моноцитарный хемоаттрактантный белок-1) и фермент NGAL (липокалин, ассоциированный с нейтрофильной желатиназой).

Экспрессия этих маркеров первоначально будет определяться иммуногистохимическим окрашиванием почечных биоптатов, консервированных в формальдегиде. Образцы будут окрашены и проанализированы в основном в Службе анатомической патологии «Complejo Hospitalario Universitario de Vigo» и в лабораториях «Instituto de Investigacion Sanitaria Galicia Sur» (IISGS), хотя в этой работе будут участвовать различные участвующие центры. насколько это возможно и рентабельно для проекта. Различные методы количественного определения будут использоваться в зависимости от окрашивания различных маркеров.

СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ В описательном исследовании числовые переменные будут выражены как среднее значение ± стандартное отклонение (SD) или медиана и межквартильный размах (IQR), в зависимости от того, является ли распределение нормальным или нет, соответственно. Мы создадим 2 группы пациентов в зависимости от ответа на лечение и клинической эволюции пациента с ВН (т. е. полная ремиссия да/нет). Чтобы установить различия между пациентами в этих двух группах, мы будем использовать критерий χ2 для категориальных переменных или точный критерий Фишера, когда ожидаемые частоты малы, t-критерий Стьюдента для нормальных непрерывных переменных и U-критерий Манна-Уитни для переменных с ненормальное распределение.

Будут использоваться различные методы анализа и/или решения проблемы отсутствия данных.

Процент положительных клеток и интенсивность окрашивания будут коррелировать с различными моделями ответа на лечение и развитием ВН.

Будет проведен одномерный и многомерный линейный логистический регрессионный анализ для изучения взаимосвязей между различными изучаемыми переменными (клиническими, гистопатологическими, терапевтическими...) и наличием различных почечных исходов (зависимая переменная). Значения p<0,05 будут считаться значимыми.

Мы будем применять другие различные статистические методы в соответствии с результатами, которые мы наблюдаем в результате нашего первоначального анализа.

Статистический анализ будет выполняться специалистом по статистике IRIDIS Group.

СРОКИ Разработка окончательного протокола: 1 месяц. Представление и утверждение Комитетом по этике: 1-3 месяца. Идентификация и подготовка образцов почек: 4-5 месяцев. Подписи информированного согласия: месяцы 4-6. Доставка почечных образцов: 4-6 месяцев. Анатомо-патологические и лабораторные исследования: 7-12 мес. Обзор клинических карт: месяцы 7-12. Мониторинг базы данных: 13-15 месяцев. Статистический анализ: месяц 16. Разработка итогового отчета: 17-18 месяц.

ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ ГРУППА Главный исследователь: д-р Хосе Мª Пего Рейгоса, специалист по ревматологии, Университетский госпиталь Виго. Группа IRIDIS-VIGO (исследования в области ревматологии и иммуноопосредованных заболеваний), Instituto de Investigacion Sanitaria Sur (IISGS).

Исследователи в координационном центре: д-р Ирен Альтабас Гонсалес (ревматолог, Университетский госпиталь Виго, группа IRIDIS-VIGO), д-р Ноэми Мартинес Лопес де Кастро (фармацевт больницы, Университетский госпиталь Виго, группа IRIDIS-VIGO), д-р ● Кармен Фачал Бермудес (нефропатолог, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo) и доктор Самуэль Гарсия Перес (молекулярный биолог, старший научный сотрудник группы IRIDIS-VIGO).

Сотрудничающие центры (ревматология, нефрология, патологическая анатомия): больница 12 октября (Мадрид, Испания), больница Араба (Витория, Испания), больница Germans Trias i Pujol (Барселона, Испания), больница дель Мар (Барселона, Испания) и Госпиталь доктора Негрина (Гран-Канария, Испания).