Präzisionsmedizin in LN: Eine multizentrische Proof-of-Concept-Studie zur Analyse histopathologischer Biomarker in der Nierenbiopsie

Probengröße Für diese Proof-of-Concept-Studie ist es unser Ziel, etwa 60 Nierenbiopsieproben zu analysieren (erweiterbar entsprechend den erzielten Ergebnissen).

Methoden:

Die folgenden allgemeinen Variablen werden erfasst:

• demografische Daten: Alter, Geschlecht, ethnische Zugehörigkeit.
• klinische Daten zu SLE:
• Diagnose und chronologische Daten: Zeitpunkt der SLE-Diagnose, Zeitpunkt der LN-Diagnose, Zeit von SLE-Diagnose bis LN.
• 1997 ACR SLE-Klassifizierungskriterien,
• Aktivität: Beteiligung verschiedener Organe und Systeme durch SELENA-SLEDAI zum Zeitpunkt der LN-Diagnose und zum Zeitpunkt der letzten Untersuchung des Patienten (oder gegebenenfalls des Todes).
• Schaden: nach Artikel und nach Domäne gemäß dem Systemic Lupus International Collaborating Clinics Damage Index (SDI) zum Zeitpunkt der LN-Diagnose und zum Zeitpunkt der letzten Beurteilung des Patienten (oder des Todes, falls zutreffend).
• Komorbidität: arterielle Hypertonie, Diabetes, Dyslipämie, Rauchgewohnheiten, schwere Infektionen, Neoplasien usw. zum Zeitpunkt der LN-Diagnose und zum Zeitpunkt der letzten Untersuchung des Patienten (oder ggf. Tod).
• Labordaten zum Zeitpunkt der LN-Diagnose und zum Zeitpunkt der letzten Untersuchung des Patienten (oder ggf. des Todes):
• Blut (allgemeine Tests): Akute-Phase-Reaktanten (Erythrozytensedimentationsrate und C-reaktives Protein), großes Blutbild, Kreatinin, glomeruläre Filtrationsrate, Blut-Harnstoff-Stickstoff, Leberfunktionstests, Lipidprofil.
• Blut (serologische Tests): Komplement (C3 und C4), Spiegel von Anti-dsDNA-Antikörpern, Antiphospholipid-Antikörper: Anticardiolipin (Ig M und Ig G), Anti-Beta2GP-1 (Ig M und Ig G), Lupus-Antikoagulans.
• Urin: Hämaturie, Piurie, Proteinurie, Zylinder.
• histopathologische Marker der Nierenbiopsie:
• histologische Klasse gemäß der ISN/RPS-Klassifikation von 2003.
• Aktivitätsindex der National Institutes of Health (NIH): Punktzahl (maximal 24) und nach Elementen (endokapilläre Hyperzellularität, Neutrophile/Karyiorrhexis, hyaline Ablagerungen/Drahtschleifen, fibrinoide Nekrose, zelluläre oder fibrozelluläre Halbmonde, interstitielle Entzündung).
• Chronizitätsindex der National Institutes of Health (NIH): Punktzahl (maximal 12) und nach Elementen (globale Glomerulosklerose, fibröse Halbmonde, tubuläre Atrophie, interstitielle Fibrose).
• Marker im Zusammenhang mit B-Lymphozyten, zu denen unter anderem gehören können: CD19, CD20 und CD138.
• Marker im Zusammenhang mit BLyS (B-Lymphozyten-Stimulator) und seinen funktionellen Konsequenzen, zu denen unter anderem die Expression von BLyS und seinen Rezeptoren gehören kann: BAFF-R, BCMA und TACI.
• Marker im Zusammenhang mit anderen Zelllinien, zu denen unter anderem gehören können: CD3 für T-Zellen und CD68 für Makrophagen.
• Marker, deren Bestimmung im Urin sich bei der Diagnose und Nachsorge von LN als nützlich erwiesen hat, zu denen unter anderem das proinflammatorische Zytokin Monozyten-Chemoattraktiv-Protein-1 (MCP-1) und das Neutrophile-Gelatinase-assoziierte Lipocalin (NGAL) gehören können.
• SLE-Therapiedaten (einschließlich Dauer der Behandlung):
• Behandlungen für SLE vor der Diagnose von LN: Malariamedikamente, Glukokortikoide (Höchstdosis), Immunsuppressiva: Azathioprin (AZA), Mophetilmycophenolat (MMF), Cyclophosphamid (CYC); Biologische Therapien: Belimumab, Rituximab.
• Behandlung von LN: Glukokortikoide (maximale Dosis), Immunsuppressiva: AZA, MMF, CYC; Biologische Therapien: Belimumab, Rituximab.
• therapeutische Daten zu Komorbiditäten (einschließlich Dauer der Behandlung): blutdrucksenkende Mittel, orale Antidiabetika, Insulin, hypolipidämische Medikamente.
• Entwicklung/Prognose von SLE: akkumulierte Schäden durch die Verwendung von SDI (nach Artikel und nach Domäne), Anhäufung von Komorbiditäten, schwere Infektionen, Organversagen, Tod.

Es werden Variablen gesammelt, um unterschiedliche Reaktionsmuster auf die Behandlung und Entwicklung von LN zu ermitteln:

1. vollständige renale Reaktion, definiert gemäß den EULAR/ERA-EDTA-Empfehlungen (13): Proteinurie <0,5 g/24 Stunden und (nahezu) normale geschätzte GFR.
2. partielles Nierenansprechen, definiert gemäß EULAR/ERA-EDTA-Empfehlungen: ≥50 % Proteinurie-Reduktion auf subnephrotische Werte und (nahezu) normale eGFR
3. keine Antwort: alle anderen Fälle.
4. Proteinuriewerte nach 12-monatiger Behandlung,
5. Nierenrückfall, definiert als reproduzierbarer Anstieg der uPCR auf > 1 g, wenn der Ausgangswert <0,2 g betrug, auf > 2 g, wenn der Ausgangswert zwischen 0,2 g und 1 g lag, oder auf mehr als das Doppelte des Ausgangswertes, wenn der Ausgangswert betrug war > 1 g UND/ODER reproduzierbare Abnahme der GFR um > 20 %, begleitet von Proteinurie (> 1 g) und/oder Erythrozyten- und/oder Leukozytenzylindern (ja/nein und Anzahl der Schübe), e) Zeit bis zum ersten Mal Schub, f) chronisches Nierenversagen,
6. Nierenerkrankung im Endstadium, die eine Dialyse und/oder Nierentransplantation erfordert. Die Datenerhebung basiert auf der klinischen Vorgeschichte der in die Studie einbezogenen Patienten.

Die Vertraulichkeit wird gemäß RD 1720/2007 und den Datenschutzgesetzen gewahrt. Die Genehmigung wird bei der galizischen Ethikkommission für klinische Forschung (CEIC) sowie bei Bedarf bei der CEIC jedes Zentrums eingeholt.

EXPERIMENTELLE STRATEGIE UND RATIONALE In diesem Projekt werden wir Nierenbiopsien von Patienten mit LN verwenden. Diese Proben, die von den entsprechenden Anatomic Pathology Services in 10 % Formaldehyd konserviert und in Paraffinblöcke eingebettet wurden, stammen von Patienten mit LN, die sich in den am Projekt beteiligten Zentren einer Nierenbiopsie unterzogen haben.

BLyS (B-Lymphozyten-Stimulator) spielt eine Schlüsselrolle in der Pathophysiologie von LN. Daher konzentrieren wir uns in dieser Studie auf Marker im Zusammenhang mit BLyS und seinen funktionellen Konsequenzen. Einerseits werden wir unter anderem die Expressionsniveaus von BLyS und seinen Rezeptoren (BAFF-R, BCMA und TACI) analysieren, da die Expressionsniveaus von BLyS und seinen Rezeptoren in Serum- und Nierenbiopsien von Patienten mit LN erhöht sind und sind mit dem Fortschreiten und der Schwere der Erkrankung verbunden.

Da BLyS andererseits das Überleben von B-Zellen induziert, werden wir die Expressionsniveaus verschiedener B-Zell-Marker wie unter anderem CD19 und CD20 analysieren. Abschließend analysieren wir den Plasmazellmarker CD138, da die Infiltration von Plasmazellen mit einem erhöhten Schweregrad der Lupusnephritis verbunden ist. Wir werden die Expressionsniveaus von Markern anderer Zelllinien wie CD3 für T-Zellen und CD68 für Makrophagen analysieren.

Wir werden auch mindestens zwei Biomarker analysieren, deren Urinwerte bei Patienten mit LN mit einer schlechteren Prognose von LN in Verbindung gebracht wurden: das Chemokin MCP-1 (monozyten-chemoattraktives Protein-1) und das Enzym NGAL (Neutrophile-Gelatinase-assoziiertes Lipocalin).

Die Expression dieser Marker wird zunächst durch immunhistochemische Färbung von Nierenbiopsien bestimmt, die in Formaldehyd konserviert werden. Die Proben werden hauptsächlich im Anatomischen Pathologischen Dienst des „Complejo Hospitalario Universitario de Vigo“ und in den Laboren des „Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur“ (IISGS) gefärbt und analysiert, obwohl die verschiedenen teilnehmenden Zentren an dieser Arbeit beteiligt sein werden soweit dies für das Projekt möglich und kosteneffizient ist. Abhängig von der Färbung der verschiedenen Marker werden unterschiedliche Quantifizierungsmethoden verwendet.

STATISTISCHE ANALYSE In der deskriptiven Studie werden numerische Variablen als Mittelwert ± Standardabweichung (SD) oder Median und Interquartilbereich (IQR) ausgedrückt, je nachdem, ob die Verteilung normal ist oder nicht. Wir werden zwei Patientengruppen bilden, je nach Ansprechen auf die Behandlung und der klinischen Entwicklung des Patienten mit LN (d. h. vollständige Remission ja/nein). Um Unterschiede zwischen Patienten in diesen beiden Gruppen festzustellen, verwenden wir den χ2-Test für kategoriale Variablen oder den exakten Fisher-Test, wenn die erwarteten Häufigkeiten gering sind, den t-Student-Test für normal kontinuierliche Variablen und den Mann-Whitney-U-Test für Variablen mit Nichtnormalverteilung.

Es werden verschiedene Methoden zur Analyse und/oder Minderung des Problems fehlender Daten eingesetzt.

Der Prozentsatz positiver Zellen und die Intensität der Färbung werden mit den unterschiedlichen Reaktionsmustern auf die Behandlung und der Entwicklung von LN korreliert.

Es werden univariate und multivariate lineare logistische Regressionsanalysen durchgeführt, um die Beziehungen zwischen den verschiedenen untersuchten Variablen (klinisch, histopathologisch, therapeutisch ...) und dem Vorhandensein der verschiedenen renalen Ergebnisse (abhängige Variable) zu untersuchen. Werte von p <0,05 werden als signifikant angesehen.

Wir werden weitere verschiedene statistische Methoden entsprechend den Ergebnissen durchführen, die wir bei unserer ersten Analyse beobachten.

Statistische Analysen werden vom Statistikspezialisten der IRIDIS-Gruppe durchgeführt.

ZEITPLAN Entwicklung des endgültigen Protokolls: Monat 1. Einreichung und Genehmigung durch die Ethikkommission: Monate 1-3. Identifizierung und Vorbereitung von Nierenproben: Monate 4–5. Unterschriften der Einverständniserklärung: Monate 4–6. Versand von Nierenproben: Monate 4–6. Anatomisch-pathologische und Laboruntersuchungen: Monate 7–12. Überprüfung der klinischen Diagramme: Monate 7–12. Überwachung der Datenbank: Monate 13-15. Statistische Analyse: Monat 16. Ausarbeitung des Abschlussberichts: Monat 17-18.

FORSCHUNGSTEAM Hauptforscher: Dr. José Mª Pego Reigosa, Rheumatologe, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo. IRIDIS-VIGO-Gruppe (Untersuchung in Rheumatologie und immunvermittelten Krankheiten), Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur (IISGS).

Forscher im Koordinierungszentrum: Dr. Irene Altabás González (Rheumatologin, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, IRIDIS-VIGO-Gruppe), Dr . Carmen Fachal Bermúdez (Nephropathologin, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo) und Dr. Samuel García Pérez (Molekularbiologe, leitender Forscher, IRIDIS-VIGO-Gruppe).

Kooperationszentren (Rheumatologie, Nephrologie, Pathologische Anantomiedienste): Hospital 12 de octubre (Madrid, Spanien), Hospital Araba (Vitoria, Spanien), Hospital Germans Trias i Pujol (Barcelona, ​​Spanien), Hospital del Mar (Barcelona, ​​Spanien) und Krankenhaus Dr. Negrín (Gran Canaria, Spanien).