LN 中的精准医学：肾活检中组织病理学生物标志物分析的多中心概念验证研究

样本量 对于这项概念验证研究，我们的目标是分析大约 60 个肾活检样本（可根据获得的结果进行扩展）。

方法：

将收集以下一般变量：

• 人口统计数据：年龄、性别、种族。
• SLE的临床资料：
• 诊断和时序数据：SLE诊断时间、LN诊断时间、SLE诊断到LN的时间。
• 1997 ACR SLE 分类标准，
• 活动：SELENA-SLEDAI 在 LN 诊断时和患者最后一次评估（或死亡，如果适用）时涉及不同器官和系统。
• 损害：根据 LN 诊断时和患者最后一次评估（或死亡，如果适用）时的系统性狼疮国际合作诊所损害指数 (SDI) 按项目和领域分类。
• 合并症：动脉高血压、糖尿病、血脂异常、吸烟习惯、严重感染、肿瘤等，在 LN 诊断时和患者最后一次评估时（或死亡，如果适用）。
• LN 诊断时和患者最后一次评估（或死亡，如果适用）时的实验室数据：
• 血液（一般检查）：急性期反应物（红细胞沉降率和 C 反应蛋白）、全血细胞计数、肌酸酐、肾小球滤过率、血尿素氮、肝功能检查、血脂分析。
• 血液（血清学检查）：补体（C3 和 C4）、抗 dsDNA 抗体水平、抗磷脂抗体：抗心磷脂（Ig M 和 Ig G）、抗β2GP-1（Ig M 和 Ig G）、狼疮抗凝物。
• 尿：血尿、脓尿、蛋白尿、管型。
• 肾活检的组织病理学标志物：
• 根据 2003 ISN/RPS 分类的组织学分类。
• 美国国立卫生研究院 (NIH) 活动指数：评分（最大 24）和按项目（毛细血管内细胞过多、嗜中性粒细胞/核破裂、透明沉积物/线环、纤维蛋白样坏死、细胞或纤维细胞新月体、间质性炎症）。
• 美国国立卫生研究院 (NIH) 慢性指数：评分（最高 12）和项目（球性肾小球硬化、纤维新月体、肾小管萎缩、间质纤维化）。
• 与 B 淋巴细胞相关的标志物可能包括但不限于：CD19、CD20 和 CD138。
• 与 BLyS（B 淋巴细胞刺激物）相关的标志物及其功能后果，可能包括但不限于 BLyS 及其受体的表达：BAFF-R、BCMA 和 TACI。
• 与其他细胞谱系相关的标记物，包括但不限于：T 细胞的 CD3 和巨噬细胞的 CD68。
• 在尿液中测定已证明对 LN 的诊断和随访有用的标记物，可能包括但不限于促炎细胞因子单核细胞趋化蛋白 1 (MCP-1) 和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 (NGAL)。
• SLE治疗数据（包括治疗持续时间）：
• LN 诊断前的 SLE 治疗：抗疟药、糖皮质激素（最大剂量）、免疫抑制剂：硫唑嘌呤 (AZA)、霉酚酸酯 (MMF)、环磷酰胺 (CYC)；生物疗法：贝利木单抗、利妥昔单抗。
• LN的治疗：糖皮质激素（最大剂量）、免疫抑制剂：AZA、MMF、CYC；生物疗法：贝利木单抗、利妥昔单抗。
• 合并症的治疗数据（包括治疗持续时间）：降压药、口服降糖药、胰岛素、降血脂药。
• SLE 的演变/预后：使用 SDI 造成的累积损伤（按项目和按领域）、应计合并症、严重感染、器官衰竭、死亡。

将收集变量以建立对 LN 治疗和演变的不同反应模式：

1. 完全肾反应，根据 EULAR/ERA-EDTA 推荐 (13) 定义：蛋白尿 <0.5 g/24 小时和（接近）正常估计 GFR。
2. 根据 EULAR/ERA-EDTA 推荐定义的部分肾脏反应：≥50% 的蛋白尿降低至亚肾病水平和（接近）正常的 eGFR
3. 无响应：所有其他情况。
4. 治疗 12 个月时的蛋白尿水平，
5. 肾复发定义为如果基线值<0.2 g，uPCR可重复增加到> 1 g，如果基线值在0.2 g和1 g之间，则增加到> 2 g，或者如果基线值是基线值的两倍以上>1 g 和/或 GFR 可重复降低 >20%，伴有蛋白尿 (>1 g)，和/或 RBC 和/或 WBC 细胞管型（是/否和耀斑数量），e) 首次出现的时间耀斑，f）慢性肾功能衰竭，
6. 需要透析和/或肾移植的终末期肾病。 数据收集将基于参与研究的患者的临床病史。

保密将根据 RD 1720/2007 和数据保护法得到尊重。 如有必要，将请求加利西亚临床研究伦理委员会 (CEIC) 以及每个中心的 CEIC 批准。

实验策略和基本原理 在这个项目中，我们将使用 LN 患者的肾活检。 这些样本保存在 10% 甲醛中并由相应的解剖病理学服务包埋在石蜡块中，对应于在参与该项目的中心接受肾活检的 LN 患者。

BLyS（B 淋巴细胞刺激剂）在 LN 的病理生理学中起着关键作用。 因此，在本研究中，我们将重点关注与 BLyS 相关的标志物及其功能后果。 一方面，我们将分析 BLyS 及其受体（BAFF-R、BCMA 和 TACI）的表达水平，因为 BLyS 及其受体的表达水平在 LN 患者的血清和肾活检组织中升高，并且与疾病进展和严重程度有关。

另一方面，由于 BLyS 诱导 B 细胞存活，我们将分析不同 B 细胞标记物（如 CD19 和 CD20 等）的表达水平。 最后，我们将分析浆细胞标记物 CD138，因为浆细胞浸润与狼疮性肾炎的严重程度增加有关。 我们将分析其他细胞谱系标记物的表达水平，例如 T 细胞的 CD3 和巨噬细胞的 CD68。

我们还将分析至少 2 种生物标志物，其 LN 患者尿液水平与 LN 预后较差相关：趋化因子 MCP-1（单核细胞趋化蛋白-1）和 NGAL（中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白）。

这些标记物的表达最初将通过保存在甲醛中的肾活组织检查的免疫组织化学染色来确定。 样本将主要在“Complejo Hospitario Universitario de Vigo”的解剖病理学服务和“Instituto de Investigación Sanitaria Sur”（IISGS）的实验室进行染色和分析，尽管不同的参与中心将参与这项工作在项目可能和成本效益的范围内。 不同的量化方法将用于不同标记的染色的功能。

统计分析 在描述性研究中，数值变量将分别表示为平均值±标准差（SD）或中位数和四分位距（IQR），具体取决于分布是否正态。 我们将根据对治疗的反应和 LN 患者的临床进展（即完全缓解是/否）建立 2 组患者。 为了确定这 2 组患者之间的差异，我们将对分类变量使用 χ2 检验，或在预期频率较小时使用 Fisher 精确检验，对正常连续变量使用 t-Student 检验，对具有以下变量的变量使用 Mann-Whitney U 检验非正态分布。

将使用不同的方法来分析和/或缓解丢失数据问题。

阳性细胞的百分比和染色强度将与对 LN 治疗和进化的不同反应模式相关。

将进行单变量和多变量线性逻辑回归分析，以探索所研究的不同变量（临床、组织病理学、治疗......）与不同肾脏结果（因变量）的存在之间的关系。 p <0.05 的值将被认为是显着的。

我们将根据我们从初步分析中观察到的结果进行其他不同的统计方法。

统计分析将由 IRIDIS 集团的统计专家进行。

时间表 最终方案的制定：第 1 个月。伦理委员会的提交和批准：第 1-3 个月。 肾脏样本鉴定和制备：4-5 个月。 知情同意书签名：4-6 个月。 肾脏样本的运输：4-6 个月。 解剖病理学和实验室研究：7-12 个月。 回顾临床图表：7-12 个月。 数据库监控：13-15月。 统计分析：第 16 个月。 最终报告的制定：17-18 月。

研究团队 首席研究员：José Mª Pego Reigosa 博士，Complexo Hospitario Universitario de Vigo 风湿病学专家。 IRIDIS-VIGO 组（风湿病学和免疫介导疾病研究），Instituto de Investigación Sanitaria Sur (IISGS)。

协调中心的研究人员：Irene Altabás González 博士（风湿病学家，Complexo Hospitario Universitario de Vigo，IRIDIS-VIGO 集团），Noemí Martínez López de Castro 博士（医院药剂师，Complexo Hospitario Universitario de Vigo，IRIDIS-VIGO 集团），Dr. . Carmen Fachal Bermúdez（肾病学家，Complexo Hospitario Universitario de Vigo）和 Samuel García Pérez 博士（分子生物学家，高级研究员，IRIDIS-VIGO 集团）。

合作中心（风湿病学、肾脏病学、病理解剖学服务）：Hospital 12 de octubre（西班牙马德里）、Hospital Araba（西班牙维多利亚）、Hospital Germans Trias i Pujol（西班牙巴塞罗那）、Hospital del Mar（西班牙巴塞罗那）和Negrín 医生医院（西班牙大加那利岛）。