Precisiegeneeskunde in LN: een multicenter proof-of-concept-onderzoek voor analyse van histopathologische biomarkers bij nierbiopsie

Steekproefomvang Voor deze proof-of-concept-studie is het ons doel om ongeveer 60 nierbiopsiemonsters te analyseren (uitbreidbaar volgens de verkregen resultaten).

methoden:

De volgende algemene variabelen worden verzameld:

• demografische gegevens: leeftijd, geslacht, etniciteit.
• klinische gegevens over SLE:
• diagnose en chronologische gegevens: tijd van SLE-diagnose, tijd van LN-diagnose, tijd van SLE-diagnose naar LN.
• 1997 ACR SLE classificatiecriteria,
• activiteit: betrokkenheid van verschillende organen en systemen door SELENA-SLEDAI op het moment van LN-diagnose en op het moment van de laatste evaluatie van de patiënt (of overlijden, indien van toepassing).
• schade: per item en per domein volgens de Systemic Lupus International Collaborating Clinics Damage Index (SDI) op het moment van LN-diagnose en op het moment van de laatste evaluatie van de patiënt (of overlijden, indien van toepassing).
• comorbiditeit: arteriële hypertensie, diabetes, dyslipemie, rookgewoonte, ernstige infecties, neoplasmata, enz. op het moment van LN-diagnose en op het moment van de laatste evaluatie van de patiënt (of overlijden, indien van toepassing).
• laboratoriumgegevens op het moment van LN-diagnose en op het moment van de laatste evaluatie van de patiënt (of overlijden, indien van toepassing):
• bloed (algemene tests): acute fase-reactanten (bezinkingssnelheid van erytrocyten en C-reactief proteïne), volledig bloedbeeld, creatinine, glomerulaire filtratiesnelheid, bloedureumstikstof, leverfunctietesten, lipidenprofiel.
• bloed (serologische tests): complement (C3 en C4), niveaus van anti-dsDNA-antilichamen, antifosfolipide-antilichamen: anticardiolipine (Ig M en Ig G), anti-beta2GP-1 (Ig M en Ig G), lupus-anticoagulans.
• urine: hematurie, piurie, proteïnurie, afgietsels.
• histopathologische markers van nierbiopsie:
• histologische klasse volgens de ISN/RPS-classificatie van 2003.
• Activiteitsindex van de National Institutes of Health (NIH): score (maximaal 24) en per item (endocapillaire hypercellulariteit, neutrofielen/karyorhexis, hyaliene afzettingen/draadlussen, fibrinoïde necrose, cellulaire of fibrocellulaire halve manen, interstitiële ontsteking).
• National Institutes of Health (NIH) chroniciteitsindex: score (maximaal 12) en per item (globale glomerulosclerose, fibreuze halve manen, tubulaire atrofie, interstitiële fibrose).
• markers gerelateerd aan B-lymfocyten, waaronder mogelijk maar niet beperkt tot: CD19, CD20 en CD138.
• markers die verband houden met BLyS (B-lymfocytenstimulator) en de functionele gevolgen ervan, waaronder, maar niet beperkt tot, de expressie van BLyS en zijn receptoren: BAFF-R, BCMA en TACI.
• markers gerelateerd aan andere cellijnen, waaronder mogelijk, maar niet beperkt tot: CD3 voor T-cellen en CD68 voor macrofagen.
• markers waarvan de bepaling in urine nuttig is gebleken bij de diagnose en follow-up van LN, waaronder mogelijk, maar niet beperkt tot, de pro-inflammatoire cytokine Monocyte Chemoattractant Protein-1 (MCP-1) en de Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin (NGAL).
• SLE therapeutische gegevens (inclusief duur van de behandeling):
• behandelingen voor SLE voorafgaand aan de diagnose van LN: antimalariamiddelen, glucocorticoïden (maximale dosis), immunosuppressiva: azathioprine (AZA), mofetilmycofenolaat (MMF), cyclofosfamide (CYC); biologische therapieën: belimumab, rituximab.
• behandeling van LN: glucocorticoïden (maximale dosis), immunosuppressiva: AZA, MMF, CYC; biologische therapieën: belimumab, rituximab.
• therapeutische gegevens van comorbiditeiten (inclusief duur van de behandeling): antihypertensiva, orale antidiabetica, insuline, hypolipidemische geneesmiddelen.
• Evolutie/prognose van SLE: opgelopen schade door gebruik van SDI (per item en per domein), opbouw van comorbiditeiten, ernstige infecties, orgaanfalen, overlijden.

Variabelen zullen worden verzameld om verschillende responspatronen op behandeling en evolutie van LN vast te stellen:

1. volledige nierrespons, gedefinieerd volgens EULAR/ERA-EDTA-aanbevelingen (13): proteïnurie <0,5 g/24 uur en (bijna) normale geschatte GFR.
2. gedeeltelijke nierrespons, gedefinieerd volgens EULAR/ERA-EDTA-aanbevelingen: ≥50% vermindering van proteïnurie tot subnefrotische niveaus en (bijna) normale eGFR
3. geen reactie: alle andere gevallen.
4. proteïnurie na 12 maanden behandeling,
5. nierrecidief zoals gedefinieerd als een reproduceerbare toename van uPCR tot >1 g als de uitgangswaarde <0,2 g was, tot >2 g als de uitgangswaarde tussen 0,2 g en 1 g lag, of meer dan twee keer de waarde bij aanvang als de uitgangswaarde was >1 g EN/OF reproduceerbare afname in GFR van >20%, vergezeld van proteïnurie (>1 g), en/of RBC en/of WBC cellulaire casts (ja/nee en aantal opflakkeringen), e) tijd tot eerste opflakkering, f) chronisch nierfalen,
6. nierziekte in het eindstadium waarvoor dialyse en/of niertransplantatie nodig is. De gegevensverzameling zal gebaseerd zijn op de klinische geschiedenis van de patiënten die in het onderzoek zijn opgenomen.

Vertrouwelijkheid wordt gerespecteerd in overeenstemming met RD 1720/2007 en de wetten inzake gegevensbescherming. Goedkeuring zal worden gevraagd aan de Galicische ethische commissie voor klinisch onderzoek (CEIC) en, indien nodig, aan de CEIC van elk centrum.

EXPERIMENTELE STRATEGIE EN RATIONALE In dit project zullen we nierbiopten gebruiken van patiënten met LN. Deze monsters, geconserveerd in 10% formaldehyde en ingebed in paraffineblokken door de overeenkomstige anatomische pathologiediensten, komen overeen met patiënten met LN die een nierbiopsie ondergingen in de centra die aan het project deelnemen.

BLyS (B-lymfocytstimulator) speelt een sleutelrol in de pathofysiologie van LN. Daarom zullen we ons in deze studie concentreren op markers gerelateerd aan BLyS en de functionele gevolgen ervan. Enerzijds zullen we onder meer de expressieniveaus van BLyS en zijn receptoren (BAFF-R, BCMA en TACI) analyseren, aangezien de expressieniveaus van BLyS en zijn receptoren verhoogd zijn in serum- en nierbiopten van patiënten met LN en geassocieerd met ziekteprogressie en ernst.

Aan de andere kant, omdat BLyS B-celoverleving induceert, zullen we de expressieniveaus van verschillende B-celmarkers zoals onder andere CD19 en CD20 analyseren. Ten slotte zullen we de plasmacelmarker CD138 analyseren, aangezien infiltratie van plasmacellen geassocieerd is met een verhoogde ernst van lupus nefritis. We zullen de expressieniveaus van markers van andere cellijnen analyseren, zoals CD3 voor T-cellen en CD68 voor macrofagen.

We zullen ook minstens 2 biomarkers analyseren waarvan de urinespiegels bij patiënten met LN geassocieerd zijn met een slechtere prognose van LN: de chemokine MCP-1 (monocyt chemoattractant protein-1) en het enzym NGAL (neutrofiel gelatinase-geassocieerd lipocaline).

De expressie van deze markers zal in eerste instantie bepaald worden door immunohistochemische kleuring van nierbiopten, die bewaard worden in formaldehyde. De monsters zullen voornamelijk worden gekleurd en geanalyseerd in de anatomische pathologiedienst van de "Complejo Hospitalario Universitario de Vigo" en in de laboratoria van het "Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur" (IISGS), hoewel de verschillende deelnemende centra aan dit werk zullen deelnemen voor zover mogelijk en kosteneffectief voor het project. Verschillende methoden van kwantificering zullen worden gebruikt in functie van de vlekken van de verschillende merkers.

STATISTISCHE ANALYSE In de beschrijvende studie zullen numerieke variabelen worden uitgedrukt als respectievelijk gemiddelde ± standaarddeviatie (SD) of mediaan en interkwartielbereik (IQR), afhankelijk van of de verdeling normaal is of niet. We zullen 2 patiëntengroepen samenstellen, afhankelijk van de respons op de behandeling en de klinische evolutie van de patiënt met LN (d.w.z. volledige remissie ja/nee). Om verschillen tussen patiënten in deze 2 groepen vast te stellen, gebruiken we de χ2-test voor categorische variabelen of Fisher's exact-test wanneer de verwachte frequenties klein zijn, de t-Student-test voor normale continue variabelen en de Mann-Whitney U-test voor variabelen met niet-normale verdeling.

Er zullen verschillende methoden worden gebruikt om het ontbrekende gegevensprobleem te analyseren en/of te verminderen.

Het percentage positieve cellen en kleuringsintensiteit zullen worden gecorreleerd met de verschillende responspatronen op behandeling en evolutie van LN.

Univariate en multivariate lineaire logistische regressieanalyses zullen worden uitgevoerd om de relaties tussen de verschillende bestudeerde variabelen (klinisch, histopathologisch, therapeutisch...) en de aanwezigheid van de verschillende renale uitkomsten (afhankelijke variabele) te onderzoeken. Waarden van p <0,05 worden als significant beschouwd.

We zullen andere verschillende statistische methoden uitvoeren op basis van de resultaten die we waarnemen uit onze eerste analyse.

Statistische analyses worden uitgevoerd door de Statistisch Specialist van de IRIDIS Groep.

TIJDLIJNEN Ontwikkeling van het definitieve protocol: maand 1. Indiening en goedkeuring door ethische commissie: maanden 1-3. Identificatie en voorbereiding van niermonsters: maanden 4-5. Geïnformeerde toestemmingshandtekeningen: maanden 4-6. Verzending van niermonsters: maanden 4-6. Anatomisch-pathologische en laboratoriumonderzoeken: maanden 7-12. Beoordeling van klinische grafieken: maanden 7-12. Monitoring van de database: maanden 13-15. Statistische analyse: maand 16. Uitwerking van het eindrapport: maand 17-18.

ONDERZOEKSTEAM Hoofdonderzoeker: Dr. José Mª Pego Reigosa, specialist reumatologie, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo. Groep IRIDIS-VIGO (Onderzoek in reumatologie en immuungemedieerde ziekten), Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur (IISGS).

Onderzoekers in het coördinatiecentrum: Dr. Irene Altabás González (reumatoloog, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, IRIDIS-VIGO Groep), Dr. Noemí Martínez López de Castro (Ziekenhuisapotheker, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, IRIDIS-VIGO Groep), Dr. Carmen Fachal Bermúdez (nefropatholoog, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo) en dr. Samuel García Pérez (moleculair bioloog, senior onderzoeker, IRIDIS-VIGO-groep).

Samenwerkende centra (Reumatologie, Nefrologie, Pathologische Anantomiediensten): Hospital 12 de octubre (Madrid, Spanje), Hospital Araba (Vitoria, Spanje), Hospital Germans Trias i Pujol (Barcelona, ​​Spanje), Hospital del Mar (Barcelona, ​​Spanje) en Ziekenhuis Dr. Negrín (Gran Canaria, Spanje).