LN의 정밀 의학: 신장 생검에서 조직병리학적 바이오마커 분석을 위한 다기관 개념 증명 연구

샘플 크기 이 개념 증명 연구의 목표는 약 60개의 신장 생검 샘플을 분석하는 것입니다(획득한 결과에 따라 확장 가능).

행동 양식:

다음 일반 변수가 수집됩니다.

• 인구 통계학적 데이터: 연령, 성별, 민족.
• SLE에 대한 임상 데이터:
• 진단 및 시간순 데이터: SLE 진단 시간, LN 진단 시간, LN에 대한 SLE 진단 시간.
• 1997 ACR SLE 분류 기준,
• 활동: LN 진단 시점과 환자의 마지막 평가 시점(또는 해당되는 경우 사망)에 SELENA-SLEDAI에 의한 다양한 기관 및 시스템의 개입.
• 손상: LN 진단 시점과 환자의 마지막 평가 시점(또는 해당되는 경우 사망) 시점의 전신성 루푸스 국제 협력 클리닉 손상 지수(SDI)에 따라 항목 및 영역별.
• 동반이환: 동맥 고혈압, 당뇨병, 이상지질혈증, 흡연 습관, 중증 감염, 신생물 등 LN 진단 시점 및 환자의 마지막 평가 시점(또는 해당되는 경우 사망).
• LN 진단 시점과 환자의 마지막 평가 시점(또는 해당되는 경우 사망 시점)의 실험실 데이터:
• 혈액(일반 검사): 급성기 반응물(적혈구 침강 속도 및 C-반응성 단백질), 전체 혈구 수, 크레아티닌, 사구체 여과율, 혈액 요소 질소, 간 기능 검사, 지질 프로필.
• 혈액(혈청 검사): 보체(C3 및 C4), 항dsDNA 항체, 항인지질 항체 수치: 항카디오리핀(Ig M 및 Ig G), 항베타2GP-1(Ig M 및 Ig G), 루푸스 항응고인자.
• 소변: 혈뇨, 잔뇨증, 단백뇨, 원주.
• 신장 생검의 조직병리학적 마커:
• 2003 ISN/RPS 분류에 따른 조직학적 분류.
• NIH(National Institutes of Health) 활동 지수: 점수(최대 24) 및 항목별(내모세혈관 과세포성, 호중구/핵경변증, 유리질 침전물/와이어 루프, 피브리노이드 괴사, 세포 또는 섬유세포 초승달 모양, 간질 염증).
• NIH(National Institutes of Health) 만성 지수: 점수(최대 12) 및 항목별(전체 사구체 경화증, 섬유성 초승달 모양, 세뇨관 위축, 간질 섬유증).
• CD19, CD20 및 CD138을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는 B 림프구와 관련된 마커.
• BLyS(B 림프구 자극제)와 관련된 마커 및 BLyS 및 이의 수용체: BAFF-R, BCMA 및 TACI의 발현을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는 이의 기능적 결과.
• T 세포용 CD3 및 대식세포용 CD68을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는 다른 세포 계통과 관련된 마커.
• 소변에서의 결정이 LN의 진단 및 추적에 유용한 것으로 입증된 마커로, 전염증성 사이토카인 단핵구 화학유인 단백질-1(MCP-1) 및 NGAL(Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin)을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않습니다.
• SLE 치료 데이터(치료 기간 포함):
• LN 진단 전 SLE 치료: 항말라리아제, 글루코코르티코이드(최대 용량), 면역억제제: 아자티오프린(AZA), 모페틸 마이코페놀레이트(MMF), 사이클로포스파미드(CYC); 생물학적 요법: 벨리무맙, 리툭시맙.
• LN의 치료: 글루코코르티코이드(최대 용량), 면역억제제: AZA, MMF, CYC; 생물학적 요법: 벨리무맙, 리툭시맙.
• 동반 질환의 치료 데이터(치료 기간 포함): 항고혈압제, 경구 항당뇨병제, 인슐린, 지질강하제.
• SLE의 진화/예후: SDI를 사용한 누적 손상(항목별 및 영역별), 동반 질환 발생, 중증 감염, 장기 부전, 사망.

LN의 치료 및 진화에 대한 다양한 반응 패턴을 설정하기 위해 변수가 수집됩니다.

1. EULAR/ERA-EDTA 권장 사항(13)에 따라 정의된 완전 신장 반응: 단백뇨 <0.5g/24시간 및 (거의) 정상 추정 GFR.
2. EULAR/ERA-EDTA 권장 사항에 따라 정의된 부분 신장 반응: 50% 이상의 단백뇨가 신하 수준으로 감소하고 (거의) 정상 eGFR
3. 응답 없음: 다른 모든 경우.
4. 치료 12개월째 단백뇨 수준,
5. 베이스라인 값이 0.2g 미만인 경우 uPCR이 >1g로, 베이스라인 값이 0.2g과 1g 사이인 경우 >2g로, 베이스라인 값이 베이스라인 값의 2배 이상인 경우 uPCR이 재현 가능하게 증가하는 것으로 정의된 신장 재발 1g 초과 및/또는 단백뇨(>1g) 및/또는 RBC 및/또는 WBC 세포 원주(예/아니오 및 발적 횟수)를 동반한 >20%의 재현 가능한 GFR 감소, e) 처음에서 처음까지의 시간 플레어, f) 만성 신부전,
6. 투석 및/또는 신장 이식이 필요한 말기 신장 질환. 데이터 수집은 연구에 포함된 환자의 임상 병력을 기반으로 합니다.

기밀성은 RD 1720/2007 및 데이터 보호법에 따라 존중됩니다. 필요한 경우 갈리시아 임상 연구 윤리 위원회(CEIC) 및 각 센터의 CEIC에서 승인을 요청합니다.

실험 전략 및 근거 이 프로젝트에서 우리는 LN 환자의 신장 생검을 사용할 것입니다. 10% 포름알데히드에 보존되고 해당 해부학 병리학 서비스에 의해 파라핀 블록에 내장된 이 샘플은 프로젝트에 참여하는 센터에서 신장 생검을 받은 LN 환자에 해당합니다.

BLyS(B 림프구 자극제)는 LN의 병리생리학에서 중요한 역할을 합니다. 따라서 이 연구에서는 BLyS와 그 기능적 결과와 관련된 마커에 초점을 맞출 것입니다. 한편으로는 BLyS와 그 수용체(BAFF-R, BCMA 및 TACI)의 발현 수준을 분석할 것입니다. 질병의 진행 및 중증도와 관련이 있습니다.

한편, BLyS는 B 세포 생존을 유도하기 때문에 CD19 및 CD20과 같은 다른 B 세포 마커의 발현 수준을 분석할 것입니다. 마지막으로, 혈장 세포 침윤이 루푸스 신염의 중증도 증가와 연관되기 때문에 형질 세포 마커 CD138을 분석할 것입니다. 우리는 T 세포에 대한 CD3 및 대식세포에 대한 CD68과 같은 다른 세포 계통의 마커의 발현 수준을 분석할 것입니다.

우리는 또한 LN 환자의 소변 수치가 LN의 더 나쁜 예후와 관련이 있는 적어도 2개의 바이오마커인 케모카인 MCP-1(단핵구 화학유인 단백질-1) 및 효소 NGAL(호중구 젤라티나제 관련 리포칼린)을 분석할 것입니다.

이들 마커의 발현은 초기에 포름알데히드에 보존된 신장 생검의 면역조직화학적 염색에 의해 결정될 것이다. 샘플은 "Complejo Hospitalario Universitario de Vigo"의 해부학 병리학 서비스와 "Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur"(IISGS)의 실험실에서 주로 염색 및 분석되지만 다른 참여 센터가 이 작업에 참여할 예정입니다. 프로젝트에 대해 가능하고 비용 효율적인 범위 내에서. 상이한 마커의 염색 기능에 상이한 정량화 방법이 사용될 것이다.

통계 분석 기술 연구에서 수치 변수는 분포가 정상인지 여부에 따라 각각 평균 ​​± 표준 편차(SD) 또는 중앙값 및 사분위수 범위(IQR)로 표시됩니다. 우리는 치료에 대한 반응과 LN 환자의 임상적 발전에 따라 두 그룹의 환자를 설정할 것입니다(즉, 완전 관해 예/아니오). 이 두 그룹의 환자들 사이의 차이점을 확인하기 위해 범주형 변수에 대해 χ2 검정을 사용하거나 예상 빈도가 작을 때 Fisher의 정확 검정을 사용하고 정상 연속 변수에 대해 t-Student 검정을 사용하고 다음과 같은 변수에 대해 Mann-Whitney U 검정을 사용합니다. 비정규 분포.

누락된 데이터 문제를 분석 및/또는 완화하기 위한 다양한 방법이 사용됩니다.

양성 세포의 백분율 및 염색 강도는 LN의 치료 및 진화에 대한 다양한 반응 패턴과 상관 관계가 있습니다.

단변량 및 다변량 선형 로지스틱 회귀 분석을 수행하여 연구된 다양한 변수(임상, 조직병리학적, 치료...)와 다양한 신장 결과(종속 변수)의 존재 사이의 관계를 탐색합니다. p<0.05의 값은 유의한 것으로 간주됩니다.

우리는 초기 분석에서 관찰한 결과에 따라 다른 다양한 통계 방법을 수행할 것입니다.

통계 분석은 IRIDIS 그룹의 통계 전문가가 수행합니다.

타임라인 최종 프로토콜 개발: 1개월. 윤리 위원회의 제출 및 승인: 1-3개월. 신장 샘플 식별 및 준비: 4-5개월. 정보에 입각한 동의 서명: 4~6개월. 신장 샘플 배송: 4~6개월. 해부학-병리학 및 실험실 연구: 7-12개월. 임상 차트 검토: 7~12개월. 데이터베이스 모니터링: 13-15개월. 통계 분석: 16개월. 최종 보고서 작성: 17-18개월.

연구 팀 수석 연구원: Dr. José Mª Pego Reigosa, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo의 류마티스 전문의. IRIDIS-VIGO 그룹(류마티스 및 면역 매개 질환 조사), Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur(IISGS).

조정 센터의 연구원: Irene Altabás González 박사(Rheumatologist, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, IRIDIS-VIGO Group), Dr. Noemí Martínez López de Castro(병원 약사, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, IRIDIS-VIGO Group), Dr. Carmen Fachal Bermúdez(신장 병리학자, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo) 및 Dr. Samuel García Pérez(분자 생물학자, 선임 연구원, IRIDIS-VIGO 그룹).

협력 센터(류마티스, 신장, 병리 해부학 서비스): Hospital 12 de octubre(마드리드, 스페인), Hospital Araba(비토리아, 스페인), Hospital Germans Trias i Pujol(바르셀로나, 스페인), Hospital del Mar(바르셀로나, 스페인) 및 Negrín 병원(스페인 그란 카나리아).