Præcisionsmedicin i LN: En multicenter Proof-of-Concept-undersøgelse for histopatologisk biomarkøranalyse i nyrebiopsi

Prøvestørrelse For denne proof-of-concept undersøgelse er vores mål at analysere omkring 60 nyrebiopsiprøver (kan udvides i henhold til de opnåede resultater).

Metoder:

Følgende generelle variable vil blive indsamlet:

• demografiske data: alder, køn, etnicitet.
• kliniske data om SLE:
• diagnose og kronologiske data: tidspunkt for SLE-diagnose, tidspunkt for LN-diagnose, tidspunkt for SLE-diagnose til LN.
• 1997 ACR SLE klassificeringskriterier,
• aktivitet: involvering af forskellige organer og systemer af SELENA-SLEDAI på tidspunktet for LN-diagnose og på tidspunktet for den sidste evaluering af patienten (eller død, hvis relevant).
• skade: efter vare og efter domæne i henhold til Systemic Lupus International Collaborating Clinics Damage Index (SDI) på tidspunktet for LN-diagnose og på tidspunktet for den sidste evaluering af patienten (eller død, hvis relevant).
• komorbiditet: arteriel hypertension, diabetes, dyslipæmi, rygevaner, alvorlige infektioner, neoplasmer osv. på tidspunktet for LN-diagnose og på tidspunktet for den sidste evaluering af patienten (eller død, hvis relevant).
• laboratoriedata på tidspunktet for LN-diagnose og på tidspunktet for den sidste evaluering af patienten (eller dødsfald, hvis relevant):
• blod (generelle tests): akutfasereaktanter (erythrocytsedimentationshastighed og C-reaktivt protein), fuld blodtælling, kreatinin, glomerulær filtrationshastighed, blodurinstofnitrogen, leverfunktionstest, lipidprofil.
• blod (serologiske tests): komplement (C3 og C4), niveauer af anti-dsDNA antistoffer, antiphospholipid antistoffer: anticardiolipin (Ig M og Ig G), anti-beta2GP-1 (Ig M og Ig G), lupus antikoagulant.
• urin: hæmaturi, piuri, proteinuri, gips.
• histopatologiske markører for nyrebiopsi:
• histologisk klasse ifølge 2003 ISN/RPS klassifikationen.
• National Institutes of Health (NIH) aktivitetsindeks: score (maksimalt 24) og efter emne (endocapillær hypercellularitet, neutrofiler/karyiorrhexis, hyalinaflejringer/trådsløjfer, fibrinoid nekrose, cellulær eller fibrocellulær halvmåne, interstitiel inflammation).
• National Institutes of Health (NIH) kronicitetsindeks: score (maksimalt 12) og efter emne (global glomerulosklerose, fibrøse halvmåner, tubulær atrofi, interstitiel fibrose).
• markører relateret til B-lymfocytter, som kan omfatte, men ikke er begrænset til: CD19, CD20 og CD138.
• markører relateret til BLyS (B-lymfocytstimulator) og dets funktionelle konsekvenser, som kan omfatte, men ikke er begrænset til, ekspression af BLyS og dets receptorer: BAFF-R, BCMA og TACI.
• markører relateret til andre cellelinjer, som kan omfatte, men ikke er begrænset til: CD3 for T-celler og CD68 for makrofager.
• markører, hvis bestemmelse i urin har vist sig nyttige ved diagnosticering og opfølgning af LN, hvilket kan omfatte, men ikke er begrænset til, det proinflammatoriske cytokin Monocyte Chemoattractant Protein-1 (MCP-1) og Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin (NGAL).
• SLE-terapeutiske data (inklusive behandlingens varighed):
• behandlinger for SLE før diagnosen LN: antimalariamidler, glukokortikoider (maksimal dosis), immunsuppressiva: azathioprin (AZA), mophetil mycophenolat (MMF), cyclophosphamid (CYC); biologiske terapier: belimumab, rituximab.
• behandling af LN: glukokortikoider (maksimal dosis), immunsuppressiva: AZA, MMF, CYC; biologiske terapier: belimumab, rituximab.
• terapeutiske data om komorbiditeter (inklusive behandlingens varighed): antihypertensiva, orale antidiabetika, insulin, hypolipidæmiske lægemidler.
• Udvikling/prognose for SLE: akkumuleret skade ved brug af SDI (efter emne og efter domæne), følgesygdomme, alvorlige infektioner, organsvigt, død.

Variabler vil blive indsamlet for at etablere forskellige mønstre af respons på behandling og udvikling af LN:

1. komplet nyrerespons, defineret i henhold til EULAR/ERA-EDTA anbefalinger (13): proteinuri <0,5 g/24 timer og (nær) normal estimeret GFR.
2. delvis nyrerespons, defineret i henhold til EULAR/ERA-EDTA-anbefalinger: ≥50 % proteinuri-reduktion til subnefrotiske niveauer og (nær) normal eGFR
3. intet svar: alle de andre sager.
4. proteinuri niveauer efter 12 måneders behandling,
5. nyretilbagefald som defineret som reproducerbar stigning i uPCR til >1 g, hvis basislinjeværdien var <0,2 g, til >2 g, hvis basislinjeværdien var mellem 0,2 g og 1 g, eller mere end det dobbelte af værdien ved baseline, hvis basislinjeværdien var >1 g OG/ELLER reproducerbart fald i GFR på >20 %, ledsaget af proteinuri (>1 g) og/eller RBC og/eller WBC cellulære afstøbninger (ja/nej og antal opblussen), e) tid til første gang opblussen, f) kronisk nyresvigt,
6. nyresygdom i slutstadiet, der kræver dialyse og/eller nyretransplantation. Dataindsamlingen vil være baseret på den kliniske historie for de patienter, der er inkluderet i undersøgelsen.

Fortrolighed vil blive respekteret i overensstemmelse med RD 1720/2007 og databeskyttelseslovene. Der vil blive anmodet om godkendelse fra Galician Clinical Research Ethics Committee (CEIC) samt fra CEIC for hvert center, hvis det er nødvendigt.

EKSPERIMENTEL STRATEGI OG RATIONALE I dette projekt vil vi bruge nyrebiopsier fra patienter med LN. Disse prøver, konserveret i 10% formaldehyd og indlejret i paraffinblokke af de tilsvarende Anatomic Pathology Services, svarer til patienter med LN, som har gennemgået nyrebiopsi i de centre, der deltager i projektet.

BLyS (B-lymfocytstimulator) spiller en nøglerolle i patofysiologien af ​​LN. Derfor vil vi i denne undersøgelse fokusere på markører relateret til BLyS og dets funktionelle konsekvenser. På den ene side vil vi blandt andet analysere ekspressionsniveauerne af BLyS og dets receptorer (BAFF-R, BCMA og TACI), da ekspressionsniveauerne af BLyS og dets receptorer er forhøjet i serum- og nyrebiopsier af patienter med LN og er forbundet med sygdomsprogression og sværhedsgrad.

På den anden side, fordi BLyS inducerer B-celleoverlevelse, vil vi analysere ekspressionsniveauerne af forskellige B-cellemarkører, såsom CD19 og CD20 blandt andre. Til sidst vil vi analysere plasmacellemarkøren CD138, da plasmacelleinfiltration er forbundet med øget sværhedsgrad af lupus nefritis. Vi vil analysere ekspressionsniveauerne af markører for andre cellelinjer, såsom CD3 for T-celler og CD68 for makrofager.

Vi vil også analysere mindst 2 biomarkører, hvis urinniveauer hos patienter med LN har været forbundet med en dårligere prognose for LN: kemokinet MCP-1 (monocyt kemoattraktant protein-1) og enzymet NGAL (neutrofil gelatinase-associeret lipocalin).

Ekspressionen af ​​disse markører vil initialt blive bestemt ved immunhistokemisk farvning af nyrebiopsier, som er konserveret i formaldehyd. Prøverne vil blive farvet og analyseret hovedsageligt i den anatomiske patologitjeneste i "Complejo Hospitalario Universitario de Vigo" og i laboratorierne i "Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur" (IISGS), selvom de forskellige deltagende centre vil deltage i dette arbejde i det omfang det er muligt og omkostningseffektivt for projektet. Forskellige metoder til kvantificering vil blive brugt i funktion af pletterne på de forskellige markører.

STATISTISK ANALYSE I den deskriptive undersøgelse vil numeriske variable blive udtrykt som middel ± standardafvigelse (SD) eller median og interkvartil område (IQR), afhængig af om fordelingen er normal eller ej. Vi vil etablere 2 grupper af patienter, i henhold til responsen på behandlingen og den kliniske udvikling af patienten med LN (dvs. fuldstændig remission ja/nej). For at etablere forskelle mellem patienter i disse 2 grupper vil vi bruge χ2-testen for kategoriske variable eller Fishers eksakte test, når de forventede frekvenser er små, t-Student-testen for normale kontinuerte variable og Mann-Whitney U-testen for variabler med ikke-normal fordeling.

Der vil blive brugt forskellige metoder til at analysere og/eller afhjælpe problemet med manglende data.

Procentdelen af ​​positive celler og farvningsintensitet vil være korreleret med de forskellige mønstre af respons på behandling og udvikling af LN.

Univariate og multivariate lineære logistiske regressionsanalyser vil blive udført for at udforske sammenhængen mellem de forskellige undersøgte variable (klinisk, histopatologisk, terapeutisk...) og tilstedeværelsen af ​​de forskellige nyreudfald (afhængig variabel). Værdier af p <0,05 vil blive betragtet som signifikante.

Vi vil udføre andre forskellige statistiske metoder i henhold til de resultater, vi observerer fra vores indledende analyse.

Statistiske analyser vil blive udført af IRIDIS-gruppens statistiske specialist.

TIDSLINJER Udvikling af den endelige protokol: måned 1. Indsendelse og godkendelse af etisk komité: måned 1-3. Identifikation og klargøring af nyreprøver: 4-5 måneder. Underskrifter af informeret samtykke: 4-6 måneder. Forsendelse af nyreprøver: måneder 4-6. Anatomopatologiske og laboratorieundersøgelser: 7-12 måneder. Gennemgang af kliniske diagrammer: måneder 7-12. Overvågning af databasen: måned 13-15. Statistisk analyse: måned 16. Udarbejdelse af den endelige rapport: måned 17-18.

FORSKNINGSTEAM Hovedforsker: Dr. José Mª Pego Reigosa, reumatologisk specialist, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo. IRIDIS-VIGO Group (Undersøgelse i reumatologi og immunmedierede sygdomme), Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur (IISGS).

Forskere i det koordinerende center: Dr. Irene Altabás González (reumatolog, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, IRIDIS-VIGO Group), Dr. Noemí Martínez López de Castro (hospitalfarmaceut, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, IRIDIS-VIGO Group), Dr. Carmen Fachal Bermúdez (nefropatolog, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo) og Dr. Samuel García Pérez (molekylærbiolog, seniorforsker, IRIDIS-VIGO Group).

Samarbejdscentre (reumatologi, nefrologi, patologisk anantomitjenester): Hospital 12 de octubre (Madrid, Spanien), Hospital Araba (Vitoria, Spanien), Hospital Germans Trias i Pujol (Barcelona, ​​Spanien), Hospital del Mar (Barcelona, ​​Spanien) og Hospital Dr. Negrín (Gran Canaria, Spanien).