Precíziós orvoslás az LN-ben: Multicenter Proof-of-concept tanulmány a hisztopatológiai biomarkerek elemzéséhez vesebiopsziában

Mintanagyság Ebben a koncepcionális vizsgálatban mintegy 60 vesebiopsziás minta elemzése a célunk (a kapott eredmények szerint bővíthető).

Mód:

A következő általános változókat gyűjtjük össze:

• demográfiai adatok: életkor, nem, etnikai hovatartozás.
• Klinikai adatok az SLE-ről:
• diagnózis és kronológiai adatok: SLE diagnózis ideje, LN diagnózis ideje, SLE diagnózis időpontja LN-ig.
• 1997. évi ACR SLE besorolási kritériumok,
• tevékenység: különböző szervek és rendszerek SELENA-SLEDAI általi érintettsége a LN-diagnózis idején és a beteg utolsó értékelése (vagy adott esetben halála) idején.
• károsodás: tételenként és tartományonként a Systemic Lupus International Collaborating Clinics Damage Index (SDI) szerint a LN-diagnózis idején és a beteg utolsó értékelése (vagy adott esetben halála) időpontjában.
• komorbiditás: artériás magas vérnyomás, cukorbetegség, dyslipemia, dohányzási szokás, súlyos fertőzések, neoplazmák stb. a LN-diagnózis idején és a beteg utolsó értékelése (vagy adott esetben halála) idején.
• laboratóriumi adatok a LN-diagnózis idején és a beteg utolsó értékelése (vagy adott esetben halála) idején:
• vér (általános vizsgálatok): akut fázis reagensek (eritrocita ülepedés és C-reaktív fehérje), teljes vérkép, kreatinin, glomeruláris filtrációs ráta, vér karbamid nitrogén, májfunkciós tesztek, lipid profil.
• vér (szerológiai vizsgálatok): komplement (C3 és C4), anti-dsDNS antitestek szintje, antifoszfolipid antitestek: antikardiolipin (Ig M és Ig G), anti-beta2GP-1 (Ig M és Ig G), lupus antikoaguláns.
• vizelet: hematuria, piuria, proteinuria, gipsz.
• A vesebiopszia hisztopatológiai markerei:
• szövettani osztály a 2003-as ISN/RPS besorolás szerint.
• A National Institute of Health (NIH) aktivitási indexe: pontszám (maximum 24) és tételenként (endocapilláris hipercelluláris, neutrofilek/kariorrhexis, hialinlerakódások/huzalhurkok, fibrinoid nekrózis, sejtes vagy fibrocelluláris félhold, intersticiális gyulladás).
• A National Institute of Health (NIH) krónikussági indexe: pontszám (maximum 12) és tételenként (globális glomerulosclerosis, rostos félhold, tubuláris atrófia, intersticiális fibrózis).
• B-limfocitákkal kapcsolatos markerek, amelyek magukban foglalhatják, de nem kizárólagosan: CD19, CD20 és CD138.
• A BLyS-hez (B limfocita stimulátorhoz) kapcsolódó markerek és funkcionális következményei, amelyek magukban foglalhatják, de nem kizárólagosan a BLyS és receptorai expresszióját: BAFF-R, BCMA és TACI.
• más sejtvonalakhoz kapcsolódó markerek, amelyek magukban foglalhatják, de nem kizárólagosan: CD3 a T-sejtekhez és CD68 a makrofágokhoz.
• olyan markerek, amelyek vizeletben történő meghatározása hasznosnak bizonyult az LN diagnosztizálásában és nyomon követésében, beleértve, de nem kizárólagosan, a proinflammatorikus citokin Monocyte Chemoattractant Protein-1 (MCP-1) és a Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin (NGAL).
• SLE terápiás adatok (beleértve a kezelés időtartamát):
• SLE-kezelések az LN diagnózisa előtt: maláriaellenes szerek, glükokortikoidok (maximális dózis), immunszuppresszánsok: azatioprin (AZA), mofetil-mikofenolát (MMF), ciklofoszfamid (CYC); biológiai terápiák: belimumab, rituximab.
• LN kezelése: glükokortikoidok (maximális dózis), immunszuppresszánsok: AZA, MMF, CYC; biológiai terápiák: belimumab, rituximab.
• a társbetegségek terápiás adatai (beleértve a kezelés időtartamát is): vérnyomáscsökkentők, orális antidiabetikumok, inzulin, hipolipidémiás szerek.
• Az SLE evolúciója/prognózisa: SDI használatának halmozott károsodása (elemenként és tartományonként), társbetegségek felhalmozódása, súlyos fertőzések, szervi elégtelenség, halál.

Változókat gyűjtenek a kezelésre adott válaszok különböző mintáinak és az LN evolúciójának megállapításához:

1. teljes veseválasz, az EULAR/ERA-EDTA ajánlásai szerint (13): proteinuria <0,5 g/24 óra és (közel) normál becsült GFR.
2. részleges veseválasz, az EULAR/ERA-EDTA ajánlások szerint: a proteinuria ≥50%-os csökkenése szubnefrotikus szintre és (közel) normál eGFR-re
3. nincs válasz: az összes többi eset.
4. proteinuria szintje 12 hónapos kezelés után,
5. vese-relapszus meghatározása szerint az uPCR reprodukálható növekedése >1 g-ra, ha a kiindulási érték <0,2 g volt, >2 g-ra, ha a kiindulási érték 0,2 g és 1 g között volt, vagy több mint kétszerese a kiindulási értéknek, ha a kiindulási érték >1 g volt ÉS/VAGY reprodukálható GFR 20% feletti csökkenés, amit proteinuria (>1 g) és/vagy vörösvértestek és/vagy fehérvérsejt-lerakódások kísértek (igen/nem és a fellángolások száma), e) az első időpontig eltelt idő fellángolása, f) krónikus veseelégtelenség,
6. végstádiumú vesebetegség, amely dialízist és/vagy veseátültetést igényel. Az adatgyűjtés a vizsgálatban részt vevő betegek klinikai anamnézisén alapul.

A titoktartást az RD 1720/2007 és az adatvédelmi törvényeknek megfelelően tiszteletben tartják. A jóváhagyást a Galíciai Klinikai Kutatási Etikai Bizottságtól (CEIC), valamint az egyes központok CEIC-étől kell kérni, ha szükséges.

KÍSÉRLETI STRATÉGIA ÉS INDOKOLÁS Ebben a projektben LN-ben szenvedő betegek vesebiopsziáit használjuk fel. Ezek a 10%-os formaldehidben konzervált és a megfelelő anatómiai patológiai szolgálatok által paraffin blokkokba ágyazott minták olyan LN-ben szenvedő betegeknek felelnek meg, akiknél a projektben részt vevő központokban vesebiopszián estek át.

A BLyS (B limfocita stimulátor) kulcsszerepet játszik az LN patofiziológiájában. Ezért ebben a tanulmányban a BLyS-hez és annak funkcionális következményeihez kapcsolódó markerekre fogunk összpontosítani. Egyrészt elemezzük többek között a BLyS és receptorai (BAFF-R, BCMA és TACI) expressziós szintjét, mivel a BLyS és receptorai expressziós szintje emelkedett LN-ben szenvedő betegek szérum- és vesebiopsziájában, és összefüggésbe hozható a betegség progressziójával és súlyosságával.

Másrészt, mivel a BLyS indukálja a B-sejtek túlélését, elemezzük a különböző B-sejt-markerek, például a CD19 és a CD20 expressziós szintjét. Végül a CD138 plazmasejt markert elemezzük, mivel a plazmasejtes infiltráció a lupus nephritis fokozott súlyosságával jár. Elemezzük más sejtvonalak markereinek expressziós szintjét, mint például a CD3 a T-sejtek és a CD68 a makrofágok esetében.

Elemezni fogunk legalább két olyan biomarkert is, amelyek vizeletszintje LN-ben szenvedő betegeknél rosszabb prognózissal járt: a kemokin MCP-1 (monocita kemoattraktáns protein-1) és az NGAL enzim (neutrofil zselatinázzal asszociált lipocalin).

Ezen markerek expresszióját kezdetben a formaldehidben megőrzött vesebiopsziák immunhisztokémiai festésével határozzák meg. A mintákat főként a "Complejo Hospitalario Universitario de Vigo" Anatómiai Patológiai Szolgálatán és az "Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur" (IISGS) laboratóriumaiban festik és elemzik, bár a különböző résztvevő központok részt vesznek ebben a munkában. a projekt szempontjából lehetséges és költséghatékony mértékben. A különböző markerek foltjainak függvényében különböző mennyiségi meghatározási módszereket alkalmazunk.

STATISZTIKAI ELEMZÉS A leíró tanulmányban a numerikus változókat átlag ± szórás (SD) vagy medián és interkvartilis tartomány (IQR) formájában fejezzük ki, attól függően, hogy az eloszlás normális-e vagy sem. 2 betegcsoportot hozunk létre a kezelésre adott válasz és az LN-ben szenvedő beteg klinikai evolúciója (azaz teljes remisszió igen/nem) alapján. A 2 csoportban lévő betegek közötti különbségek megállapításához a χ2 tesztet használjuk a kategorikus változókra vagy a Fisher-féle egzakt tesztet, ha a várható gyakoriságok kicsik, a t-Student tesztet a normál folytonos változókra és a Mann-Whitney U tesztet a változókra. nem normál eloszlás.

A hiányzó adatprobléma elemzésére és/vagy enyhítésére különböző módszereket fognak alkalmazni.

A pozitív sejtek százalékos aránya és a festődés intenzitása összefügg a kezelésre adott válasz különböző mintáival és az LN evolúciójával.

Egyváltozós és többváltozós lineáris logisztikus regressziós elemzéseket végzünk a különböző vizsgált változók (klinikai, hisztopatológiai, terápiás...) és a különböző veseeredmények (függő változó) közötti összefüggések feltárására. A p <0,05 értékeket szignifikánsnak tekintjük.

A kezdeti elemzés során megfigyelt eredményeknek megfelelően további különböző statisztikai módszereket fogunk végrehajtani.

A statisztikai elemzéseket az IRIDIS Csoport statisztikai szakértője végzi.

IDŐPONTOK A végleges jegyzőkönyv kidolgozása: 1. hónap. Előterjesztés és Etikai Bizottság általi jóváhagyás: 1-3. hónap. Veseminták azonosítása és előkészítése: 4-5. hónap. Tájékozott beleegyező aláírások: hónap 4-6. Veseminták kiszállítása: hónap 4-6. Anatómiai-patológiai és laboratóriumi vizsgálatok: 7-12. hónap. Klinikai diagramok áttekintése: 7-12. hónap. Az adatbázis monitorozása: hó 13-15. Statisztikai elemzés: 16. hó. A zárójelentés kidolgozása: hó 17-18.

KUTATÓCSAPAT Vezető kutató: Dr. José Mª Pego Reigosa, reumatológiai szakorvos, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo. IRIDIS-VIGO Csoport (Reumatológiai és Immunmediált Betegségek Vizsgálata), Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur (IISGS).

A koordináló központ kutatói: Dr. Irene Altabás González (Reumatológus, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, IRIDIS-VIGO Csoport), Dr. Noemí Martínez López de Castro (Kórházi gyógyszerész, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, IRIDIS-VIGO Csoport), Dr. Carmen Fachal Bermúdez (Nephropathologist, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo) és Dr. Samuel García Pérez (molekuláris biológus, vezető kutató, IRIDIS-VIGO Csoport).

Együttműködő központok (reumatológiai, nefrológiai, patológiai anatómiai szolgáltatások): Hospital 12 de octubre (Madrid, Spanyolország), Hospital Araba (Vitoria, Spanyolország), Hospital Germans Trias i Pujol (Barcelona, ​​Spanyolország), Hospital del Mar (Barcelona, ​​Spanyolország) és Kórház Dr. Negrín (Gran Canaria, Spanyolország).