Médecine de précision dans le LN : une étude de preuve de concept multicentrique pour l'analyse de biomarqueurs histopathologiques dans la biopsie rénale

Taille de l'échantillon Pour cette étude de preuve de concept, notre objectif est d'analyser environ 60 échantillons de biopsie rénale (extensible en fonction des résultats obtenus).

Méthodes :

Les variables générales suivantes seront collectées :

• données démographiques : âge, sexe, origine ethnique.
• données cliniques sur le LED :
• diagnostic et données chronologiques : heure du diagnostic de LED, heure du diagnostic de LN, heure du diagnostic de LED à LN.
• Critères de classification ACR SLE de 1997,
• activité : atteinte de différents organes et systèmes par SELENA-SLEDAI au moment du diagnostic de LN et au moment de la dernière évaluation du patient (ou du décès, le cas échéant).
• dommages : par élément et par domaine selon le Systemic Lupus International Collaborating Clinics Damage Index (SDI) au moment du diagnostic de LN et au moment de la dernière évaluation du patient (ou du décès, le cas échéant).
• comorbidité : hypertension artérielle, diabète, dyslipémie, tabagisme, infections graves, néoplasmes, etc. au moment du diagnostic de LN et au moment de la dernière évaluation du patient (ou du décès, le cas échéant).
• données de laboratoire au moment du diagnostic de LN et au moment de la dernière évaluation du patient (ou du décès, le cas échéant) :
• sang (tests généraux) : réactifs de la phase aiguë (vitesse de sédimentation des érythrocytes et protéine C-réactive), formule sanguine complète, créatinine, taux de filtration glomérulaire, azote uréique du sang, tests de la fonction hépatique, profil lipidique.
• sang (tests sérologiques) : complément (C3 et C4), taux d'anticorps anti-dsDNA, anticorps antiphospholipides : anticardiolipine (Ig M et Ig G), anti-beta2GP-1 (Ig M et Ig G), anticoagulant lupique.
• urine : hématurie, piurie, protéinurie, cylindres.
• marqueurs histopathologiques de la biopsie rénale :
• classe histologique selon la classification ISN/RPS 2003.
• Indice d'activité des National Institutes of Health (NIH) : score (maximum 24) et par item (hypercellularité endocapillaire, neutrophiles/caryiorrhexis, dépôts hyalins/boucles métalliques, nécrose fibrinoïde, croissants cellulaires ou fibrocellulaires, inflammation interstitielle).
• Indice de chronicité des National Institutes of Health (NIH) : score (maximum 12) et par item (glomérulosclérose globale, croissants fibreux, atrophie tubulaire, fibrose interstitielle).
• marqueurs liés aux lymphocytes B qui peuvent inclure, mais sans s'y limiter : CD19, CD20 et CD138.
• les marqueurs liés au BLyS (stimulateur des lymphocytes B) et ses conséquences fonctionnelles qui peuvent inclure, mais sans s'y limiter, l'expression du BLyS et de ses récepteurs : BAFF-R, BCMA et TACI.
• des marqueurs liés à d'autres lignées cellulaires qui peuvent inclure, mais sans s'y limiter : CD3 pour les lymphocytes T et CD68 pour les macrophages.
• les marqueurs dont la détermination dans l'urine s'est avérée utile dans le diagnostic et le suivi de la LN qui peuvent inclure, mais sans s'y limiter, la cytokine pro-inflammatoire Monocyte Chemoattractant Protein-1 (MCP-1) et la Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin (NGAL).
• Données thérapeutiques du LES (dont durée du traitement) :
• traitements du LES avant le diagnostic de LN : antipaludéens, glucocorticoïdes (dose maximale), immunosuppresseurs : azathioprine (AZA), mycophénolate de mophétil (MMF), cyclophosphamide (CYC) ; thérapeutiques biologiques : belimumab, rituximab.
• traitement des LN : glucocorticoïdes (dose maximale), immunosuppresseurs : AZA, MMF, CYC ; thérapeutiques biologiques : belimumab, rituximab.
• données thérapeutiques des comorbidités (dont durée du traitement) : antihypertenseurs, antidiabétiques oraux, insuline, hypolipidémiants.
• Évolution/pronostic du LES : dommages cumulés en utilisant l'IDS (par item et par domaine), cumul des comorbidités, infections sévères, défaillance d'organe, décès.

Des variables seront collectées pour établir différents modèles de réponse au traitement et d'évolution de la LN :

1. réponse rénale complète, définie selon les recommandations EULAR/ERA-EDTA (13) : protéinurie < 0,5 g/24 heures et DFG estimé (quasi) normal.
2. réponse rénale partielle, définie selon les recommandations EULAR/ERA-EDTA : réduction ≥ 50 % de la protéinurie à des niveaux sous-néphrotiques et un eGFR (presque) normal
3. pas de réponse : tous les autres cas.
4. taux de protéinurie à 12 mois de traitement,
5. rechute rénale définie comme une augmentation reproductible de la uPCR à > 1 g si la valeur initiale était <0,2 g, à >2 g si la valeur initiale était comprise entre 0,2 g et 1 g, ou plus du double de la valeur initiale si la valeur initiale était > 1 g ET/OU diminution reproductible du DFG de > 20 %, accompagnée d'une protéinurie (> 1 g) et/ou de cylindres cellulaires érythrocytaires et/ou leucocytaires (oui/non et nombre de poussées), e) délai avant la première poussée, f) insuffisance rénale chronique,
6. insuffisance rénale terminale nécessitant une dialyse et/ou une transplantation rénale. La collecte de données sera basée sur les antécédents cliniques des patients inclus dans l'étude.

La confidentialité sera respectée conformément au RD 1720/2007 et aux lois sur la protection des données. L'approbation sera demandée au Comité galicien d'éthique de la recherche clinique (CEIC) ainsi qu'au CEIC de chaque centre, si nécessaire.

STRATÉGIE EXPÉRIMENTALE ET JUSTIFICATION Dans ce projet, nous utiliserons des biopsies rénales de patients atteints de LN. Ces échantillons, conservés dans du formaldéhyde à 10 % et inclus dans des blocs de paraffine par les services d'anatomopathologie correspondants, correspondent à des patients atteints de LN ayant subi une biopsie rénale dans les centres participant au projet.

Le BLyS (stimulateur des lymphocytes B) joue un rôle clé dans la physiopathologie du LN. Par conséquent, dans cette étude, nous nous concentrerons sur les marqueurs liés à BLyS et ses conséquences fonctionnelles. D'une part, nous analyserons entre autres les niveaux d'expression de BLyS et de ses récepteurs (BAFF-R, BCMA et TACI), puisque les niveaux d'expression de BLyS et de ses récepteurs sont élevés dans les biopsies sériques et rénales de patients atteints de LN et sont associée à la progression et à la gravité de la maladie.

D'autre part, parce que BLyS induit la survie des cellules B, nous analyserons les niveaux d'expression de différents marqueurs de cellules B tels que CD19 et CD20 entre autres. Enfin, nous analyserons le marqueur plasmocytaire CD138, puisque l'infiltration des plasmocytes est associée à une sévérité accrue de la néphrite lupique. Nous analyserons les niveaux d'expression de marqueurs d'autres lignées cellulaires telles que CD3 pour les lymphocytes T et CD68 pour les macrophages.

Nous analyserons également au moins 2 biomarqueurs dont les niveaux urinaires chez les patients atteints de LN ont été associés à un plus mauvais pronostic de LN : la chimiokine MCP-1 (monocyte chemoattractant protein-1) et l'enzyme NGAL (neutrophil gelatinase-associated lipocalin).

L'expression de ces marqueurs sera déterminée dans un premier temps par coloration immunohistochimique de biopsies rénales, qui sont conservées dans du formaldéhyde. Les échantillons seront colorés et analysés principalement dans le service d'anatomopathologie du "Complejo Hospitalario Universitario de Vigo" et dans les laboratoires de l'"Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur" (IISGS), bien que les différents centres participants participeront à ce travail. dans la mesure du possible et rentable pour le projet. Différentes méthodes de quantification seront utilisées en fonction des colorations des différents marqueurs.

ANALYSE STATISTIQUE Dans l'étude descriptive, les variables numériques seront exprimées en moyenne ± écart-type (ET) ou en médiane et écart interquartile (IQR), selon que la distribution est normale ou non, respectivement. Nous établirons 2 groupes de patients, selon la réponse au traitement et l'évolution clinique du patient atteint de LN (c'est-à-dire, rémission complète oui/non). Pour établir les différences entre les patients de ces 2 groupes, nous utiliserons le test χ2 pour les variables catégorielles ou le test exact de Fisher lorsque les fréquences attendues sont faibles, le test t-Student pour les variables continues normales et le test U de Mann-Whitney pour les variables avec distribution non normale.

Différentes méthodes pour analyser et/ou atténuer le problème des données manquantes seront utilisées.

Le pourcentage de cellules positives et l'intensité de la coloration seront corrélés aux différents modèles de réponse au traitement et à l'évolution de la LN.

Des analyses de régression logistique linéaire univariées et multivariées seront réalisées pour explorer les relations entre les différentes variables étudiées (cliniques, histopathologiques, thérapeutiques...) et la présence des différents résultats rénaux (variable dépendante). Les valeurs de p <0,05 seront considérées comme significatives.

Nous effectuerons d'autres méthodes statistiques différentes en fonction des résultats que nous observerons à partir de notre analyse initiale.

Les analyses statistiques seront réalisées par le Spécialiste Statistique du Groupe IRIDIS.

CALENDRIER Élaboration du protocole définitif : mois 1. Soumission et approbation par le comité d'éthique : mois 1-3. Identification et préparation des échantillons rénaux : mois 4-5. Signatures de consentement éclairé : mois 4-6. Envoi des prélèvements rénaux : mois 4-6. Études anatomo-pathologiques et de laboratoire : mois 7-12. Examen des dossiers cliniques : mois 7-12. Suivi de la base de données : mois 13-15. Analyse statistique : mois 16. Elaboration du rapport final : mois 17-18.

ÉQUIPE DE RECHERCHE Chercheur principal : Dr José Mª Pego Reigosa, spécialiste en rhumatologie, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo. Groupe IRIDIS-VIGO (Investigation in Rheumatology and Immune-Mediated Diseases), Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur (IISGS).

Chercheurs du centre de coordination : Dr Irene Altabás González (Rhumatologue, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, Groupe IRIDIS-VIGO), Dr Noemí Martínez López de Castro (Pharmacien Hospitalier, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, Groupe IRIDIS-VIGO), Dr Carmen Fachal Bermúdez (néphropathologiste, Complexo Hospitalario Universitario de Vigo) et le Dr Samuel García Pérez (biologiste moléculaire, chercheur principal, groupe IRIDIS-VIGO).

Centres collaborateurs (services de rhumatologie, de néphrologie, d'anatomie pathologique) : Hospital 12 de octubre (Madrid, Espagne), Hospital Araba (Vitoria, Espagne), Hospital Germans Trias i Pujol (Barcelone, Espagne), Hospital del Mar (Barcelone, Espagne) et Hôpital Dr. Negrín (Gran Canaria, Espagne).