LN における精密医療: 腎生検における組織病理学的バイオマーカー分析のための多施設共同概念実証研究

サンプルサイズ この概念実証研究の目的は、約 60 個の腎生検サンプルを分析することです (得られた結果に応じて拡張可能)。

方法:

次の一般変数が収集されます。

• 人口統計データ: 年齢、性別、民族。
• SLE に関する臨床データ:
• 診断と時系列データ: SLE 診断の時間、LN 診断の時間、SLE 診断から LN までの時間。
• 1997 年の ACR SLE 分類基準、
• 活動：LN診断時および患者（該当する場合は死亡）の最終評価時におけるSELENA-SLEDAIによるさまざまな臓器およびシステムの関与。
• 損傷：LN診断時および患者（該当する場合は死亡）の最終評価時における全身性狼瘡国際協力クリニック損傷指数（SDI）に基づく項目別および領域別。
• 併存疾患：LN診断時および患者（該当する場合は死亡）の最終評価時における動脈性高血圧、糖尿病、脂質異常症、喫煙習慣、重度の感染症、新生物など。
• LN診断時および患者（該当する場合は死亡）の最終評価時の検査データ：
• 血液（一般検査）：急性期反応物（赤血球沈降速度およびC反応性タンパク質）、全血球数、クレアチニン、糸球体濾過速度、血中尿素窒素、肝機能検査、脂質プロファイル。
• 血液（血清学的検査）：補体（C3およびC4）、抗dsDNA抗体のレベル、抗リン脂質抗体：抗カルジオリピン（Ig MおよびIg G）、抗β2GP-1（Ig MおよびIg G）、ループス抗凝固剤。
• 尿：血尿、尿尿、タンパク尿、円柱。
• 腎生検の組織病理学的マーカー:
• 2003 ISN/RPS 分類に基づく組織学的クラス。
• 国立衛生研究所 (NIH) の活動指数: スコア (最大 24) および項目別 (内毛細管細胞過多、好中球/核破壊、ヒアリン沈着/ワイヤー ループ、フィブリノイド壊死、細胞または線維細胞三日月、間質性炎症)。
• 国立衛生研究所 (NIH) の慢性化指数: スコア (最大 12) および項目別 (全体的糸球体硬化症、線維性三日月、尿細管萎縮、間質性線維症)。
• B リンパ球に関連するマーカーには、CD19、CD20、および CD138 が含まれますが、これらに限定されません。
• BLyS (B リンパ球刺激因子) とその機能的影響に関連するマーカー。これには、BLyS とその受容体の発現 (BAFF-R、BCMA、TACI) が含まれますが、これらに限定されません。
• 他の細胞系統に関連するマーカーには、T 細胞の CD3 およびマクロファージの CD68 が含まれますが、これらに限定されません。
• 尿中の測定が LN の診断と追跡に有用であることが証明されているマーカーには、炎症誘発性サイトカインである単球化学誘引タンパク質-1 (MCP-1) および好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン (NGAL) が含まれますが、これらに限定されません。
• SLE の治療データ (治療期間を含む):
• LN診断前のSLE治療：抗マラリア薬、グルココルチコイド（最大用量）、免疫抑制薬：アザチオプリン（AZA）、ミコフェノール酸モフェチル（MMF）、シクロホスファミド（CYC）。生物学的療法：ベリムマブ、リツキシマブ。
• LNの治療：グルココルチコイド（最大用量）、免疫抑制剤：AZA、MMF、CYC。生物学的療法：ベリムマブ、リツキシマブ。
• 併存疾患の治療データ（治療期間を含む）：降圧剤、経口糖尿病薬、インスリン、高脂血症薬。
• SLE の進展/予後: SDI の使用による損傷の蓄積 (項目別およびドメイン別)、併存疾患の発生、重度の感染症、臓器不全、死亡。

治療に対する反応と LN の進行のさまざまなパターンを確立するために変数が収集されます。

1. EULAR/ERA-EDTA 推奨に従って定義される完全な腎反応 (13): タンパク尿が 0.5 g/24 時間未満、および推定 GFR が (ほぼ) 正常。
2. EULAR/ERA-EDTA 推奨に従って定義された部分腎反応：タンパク尿がネフローゼ下レベルまで 50% 以上減少し、eGFR が（ほぼ）正常
3. 応答なし: 他のすべての場合。
4. 12か月の治療におけるタンパク尿レベル、
5. 腎再発は、ベースライン値が 0.2 g 未満の場合は uPCR が 1 g を超え、ベースライン値が 0.2 g と 1 g の間の場合は 2 g を超え、ベースライン値が 0.2 g と 1 g の間の場合はベースライン値の 2 倍を超える再現可能な増加として定義されます。 >1gであり、かつ/または、タンパク尿(>1g)を伴う、GFRの>20%の再現可能な減少、および/またはRBCおよび/またはWBC細胞円柱(はい/いいえおよび再燃の数)、e)初回までの時間フレア、f) 慢性腎不全、
6. 透析および/または腎移植を必要とする末期腎疾患。 データ収集は、研究に含まれる患者の病歴に基づいて行われます。

機密保持は、RD 1720/2007 およびデータ保護法に従って尊重されます。 承認は、必要に応じてガリシア臨床研究倫理委員会 (CEIC) および各センターの CEIC に求められます。

実験戦略と理論的根拠 このプロジェクトでは、LN 患者からの腎生検を使用します。 これらのサンプルは、対応する解剖病理学サービスによって 10% ホルムアルデヒドで保存され、パラフィン ブロックに包埋されており、プロジェクトに参加しているセンターで腎生検を受けた LN 患者に相当します。

BLyS (B リンパ球刺激因子) は、LN の病態生理において重要な役割を果たします。 したがって、この研究では、BLyS とその機能的影響に関連するマーカーに焦点を当てます。 一方で、BLyS とその受容体の発現レベルは LN 患者の血清および腎生検で上昇しており、特に BLyS とその受容体 (BAFF-R、BCMA、および TACI) の発現レベルを分析します。病気の進行と重症度に関連します。

一方、BLyS は B 細胞の生存を誘導するため、CD19 や CD20 などのさまざまな B 細胞マーカーの発現レベルを分析します。 最後に、形質細胞浸潤はループス腎炎の重症度の増加と関連しているため、形質細胞マーカー CD138 を分析します。 T 細胞の CD3 やマクロファージの CD68 など、他の細胞系統のマーカーの発現レベルを分析します。

また、LN患者の尿中レベルがLNの予後不良と関連している少なくとも2つのバイオマーカー、ケモカインMCP-1（単球化学誘引物質タンパク質-1）と酵素NGAL（好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン）についても分析する予定である。

これらのマーカーの発現は、ホルムアルデヒドで保存された腎生検の免疫組織化学的染色によって最初に決定されます。 サンプルは主に「Complejo Hospitalario Universitario de Vigo」の解剖病理学サービスと「Instituto de Investigación Sanitaria Galicia Sur」（IISGS）の研究室で染色および分析されますが、この研究にはさまざまな参加センターが参加します。プロジェクトにとって可能な限り費用対効果の高い範囲で。 異なるマーカーの染色に応じて、異なる定量化方法が使用されます。

統計分析 記述的研究では、数値変数は、分布が正規分布であるかどうかに応じて、それぞれ平均±標準偏差 (SD) または中央値と四分位範囲 (IQR) として表されます。 治療に対する反応と LN 患者の臨床的進展（つまり、完全寛解の有無）に応じて、患者を 2 つのグループに分けます。 これら 2 つのグループの患者間の差異を確立するために、カテゴリ変数には χ2 検定を使用するか、期待頻度が小さい場合にはフィッシャーの直接確率検定を、正規連続変数には t-Student 検定を、次の変数には Mann-Whitney U 検定を使用します。非正規分布。

データ欠落の問題を分析および/または軽減するために、さまざまな方法が使用されます。

陽性細胞の割合と染色強度は、治療に対する反応のさまざまなパターンと LN の進化と相関します。

単変量および多変量の線形ロジスティック回帰分析は、研究対象のさまざまな変数 (臨床、組織病理学、治療など) とさまざまな腎転帰の存在 (従属変数) との間の関係を調査するために実行されます。 p <0.05 の値は有意であるとみなされます。

初期分析で観察された結果に応じて、他のさまざまな統計手法を実行します。

統計分析はIRIDISグループの統計専門家が実施します。

スケジュール 最終的なプロトコールの作成: 1 か月。倫理委員会による提出と承認: 1 ～ 3 か月。 腎臓サンプルの特定と準備: 4 ～ 5 か月。 インフォームド・コンセントの署名: 4 ～ 6 か月。 腎臓サンプルの発送: 4 ～ 6 か月。 解剖病理学的研究および臨床検査: 7 ～ 12 か月。 臨床カルテのレビュー: 7 ～ 12 か月目。 データベースのモニタリング: 13 ～ 15 か月。 統計分析: 16 か月目。 最終報告書の詳細: 17 ～ 18 か月目。

研究チームの主任研究者: ホセ・M・ペゴ・レイゴサ博士、Complexo Hospitalario Universitario de Vigo、リウマチ専門医。 IRIDIS-VIGO グループ (リウマチおよび免疫介在性疾患の研究)、ガリシア州衛生研究所 (IISGS)。

調整センターの研究者: Irene Altabás González 博士 (リウマチ専門医、Complexo Hospitalario Universitario de Vigo、IRIDIS-VIGO グループ)、Noemí Martínez López de Castro 博士 (Complexo Hospitalario Universitario de Vigo、IRIDIS-VIGO グループ、病院薬剤師)、Dr. Carmen Fachal Bermúdez (腎臓病理学者、Complexo Hospitalario Universitario de Vigo) と Samuel García Pérez 博士 (分子生物学者、IRIDIS-VIGO グループの上級研究員)。

協力センター（リウマチ科、腎臓科、病理解剖学サービス）： 12月12日病院（スペイン、マドリード）、アラバ病院（スペイン、ビトリア）、ジャーマンズ・トリアス・イ・プジョル病院（スペイン、バルセロナ）、デル・マル病院（スペイン、バルセロナ）、ネグリン病院（スペイン、グランカナリア島）。