Transfer genów dla ciężkiego złożonego niedoboru odporności sprzężonego z chromosomem X u nowo zdiagnozowanych niemowląt (LVXSCID-ND)

Komórki CD34+ szpiku kostnego zostaną pobrane na sali operacyjnej, transdukowane wektorem lentiwirusowym zawierającym normalną kopię genu γc i ponownie podane bez kondycjonowania mieloredukcyjnego. Uczestnicy będą monitorowani pod kątem regeneracji układu krwiotwórczego po busulfanie i ciężkich zdarzeń niepożądanych przez 42 dni po terapii genowej. Pierwszorzędowym punktem końcowym oceniającym skuteczność tego podejścia będzie rekonstytucja immunologiczna komórek T 52 tygodnie (± 4) tygodnie po przeszczepie. Przeprowadzona zostanie również ciągła i szczegółowa ocena wszystkich aspektów rekonstytucji immunologicznej, toksyczności związanej z protokołem i miejsc integracji retrowirusów. Badanie to oceni pierwsze zastosowanie wektora lentiwirusowego SIN do leczenia SCID-X1 i może doprowadzić do nowej formy terapii, którą można by zastosować u większości nowo zdiagnozowanych pacjentów.

CELE

Oceń bezpieczeństwo, wykonalność i skuteczność transferu genów lentiwirusowych u nowo zdiagnozowanych pacjentów z SCID-X1, którym przeszczepiono autologiczne komórki CD34+, które zostały transdukowane samoinaktywującym się wektorem lentiwirusowym (CL20-i4-EF1α-hγc-OPT) wykazującym ekspresję genu γc.

Główny cel 1: Ocena bezpieczeństwa i wykonalności infuzji co najmniej 1 miliona transdukowanych komórek CD34+ na kilogram masy ciała niemowlętom SCID-X1.

Główny cel 2: Ocena skuteczności lentiwirusowego transferu genów w indukowaniu znaczącej rekonstytucji komórek T 52 tygodnie (± 4 tygodnie) po przeszczepie. Znacząca rekonstytucja limfocytów T jest zdefiniowana jako obecność co najmniej 2 z 3 poniższych kryteriów:

• Rozwój odpowiedzi proliferacyjnych komórek T na fitohemaglutyninę (PHA), które są ≥ 50% wartości obserwowanej u normalnych kontroli
• ≥ 1000 autologicznych limfocytów T CD3+/μl we krwi obwodowej
• ≥ 500 autologicznych limfocytów T CD4+/μl we krwi obwodowej
• ≥ 200 autologicznych limfocytów T CD4+ CD45RA/μl we krwi obwodowej

INNE WCZEŚNIEJ OKREŚLONE CELE:

• Skoreluj farmakokinetykę busulfanu i jego metabolitu z toksycznością, skutecznością, wszczepieniem komórek stransdukowanych wektorem oraz przeżyciem wolnym od zdarzeń i całkowitym przeżyciem.
• Ocenić skuteczność ukierunkowania dawki busulfanu przy podawaniu busulfanu co 24 godziny łącznie dla 2 dawek w celu uzyskania skumulowanego pola pod krzywą busulfanu wynoszącego 22 mg*godz./l.
• Oceń funkcję limfocytów B podczas długoterminowej obserwacji pacjentów objętych protokołem. Ocena obejmie ekspresję γc w krążących komórkach B, pomiar stężenia IgG, IgA i IgM w surowicy, pomiar odpowiedzi przeciwciał na szczepienie, ocenę produkcji IgG po zaprzestaniu dożylnej terapii gamma globuliną u pacjentów ze wskazaniami klinicznymi do przerwania IVIG.
• Oceń liczbę komórek NK w długoterminowej obserwacji pacjentów objętych protokołem. Ocena będzie obejmować ocenę liczby komórek NK metodą cytometrii przepływowej.
• Określ liczbę kopii wektora i lokalizację miejsc integracji wektora w posortowanych krwinkach. Posortowane komórki T, komórki B, komórki NK, granulocyty i monocyty zostaną ocenione pod kątem liczby kopii wektora. Liczba kopii wektorów w sortowanych komórkach T zostanie oceniona jako potencjalny środek bezpieczeństwa i zostanie zgłoszona do FDA, jeśli liczba kopii wektorów jest większa niż 5 kopii na komórkę T u dowolnego pacjenta w dowolnym momencie. Badania nad sortowanymi komórkami będą również obejmować głębokie sekwencjonowanie za pomocą zautomatyzowanego sekwenatora w celu scharakteryzowania miejsc insercji oraz analizę macierzy ekspresji klonów komórek T w celu zbadania zmian ekspresji genów w obrębie 100 kb od miejsc insercji.
• Ocena ogólnego, długoterminowego bezpieczeństwa transferu genów lentiwirusowych. Obejmuje to pełną ocenę kliniczną wszelkich zdarzeń niepożądanych wynikających z procedury transferu genów. Jeśli zostanie zaobserwowane jakiekolwiek zdarzenie onkogenne, ocena ta będzie obejmować pełną charakterystykę molekularną klonu guza, w tym analizę miejsca insercji, analizę ekspresji genów i ocenę zmian genów LMO2, Cdkn2a, Notch1, cykliny D2.