Nadwrażliwość na mleko krowie i jaja kurze u dorosłych

Tło

Alergie na jajka, mleko i zboża są najważniejszymi alergiami pokarmowymi u fińskich dzieci, częstość ich występowania w krajach zachodnich wynosi 1-4%. U niektórych osób alergia pokarmowa utrzymuje się do wieku dorosłego. Podstawą leczenia IgE-zależnej alergii na mleko i jaja jest dieta unikająca i noszenie zastrzyku epinefryny w przypadku wystąpienia reakcji alergicznej. Dieta unikająca jest bardzo trudna i ma negatywny wpływ na jakość życia. Przypadkowe spożycie mleka lub jajka może wywołać reakcje zagrażające życiu, a nawet doprowadzić do śmierci. Ostatnie badania sugerują, że specyficzna indukcja tolerancji doustnej (SOTI) zapewnia opcję leczenia u dzieci z utrzymującą się alergią z wysokim odsetkiem powodzenia.

Oczywiste jest, że immunoterapia doustna ma wpływ na swoiste odpowiedzi immunologiczne mleka i jaj, jednak mechanizmy tej terapii zostały zbadane w niewielkim stopniu, a jej wpływ na poziomie komórkowym i molekularnym jest praktycznie nieznany. Nie ma też żadnych badań laboratoryjnych, które monitorowałyby skuteczność lub przewidywały wynik z wyprzedzeniem lub na wczesnych etapach leczenia. Nie ma dostępnych danych badawczych dotyczących odpowiedzi humoralnej IgE, IgG4 i immunoglobuliny A (IgA) lub odpowiedzi komórkowej lub odpowiedzi cytokinowej indukowanej przez poszczególne główne składniki alergenów mleka krowiego i jaj podczas doustnej immunoterapii. Nie istnieją żadne narzędzia do prognozowania wyniku leczenia.

Celuje

Celem pracy jest indukcja swoistej tolerancji doustnej u osób dorosłych uczulonych na mleko krowie lub jajo kurze. Immunoterapia doustna polega na przyjmowaniu bardzo małych ilości alergenu i powolnym zwiększaniu ilości. Dzięki temu z diety eliminacyjnej można całkowicie lub częściowo zrezygnować bez obawy wystąpienia poważnych reakcji alergicznych. Kolejnym celem jest zbadanie zmian w odpowiedzi immunologicznej, w której pośredniczą przeciwciała i komórka, na poszczególne składniki mleka krowiego i alergenów jaja podczas indukcji tolerancji i porównanie ich z efektem leczenia.

Materiały i metody

Do badania zostanie włączonych 40 dorosłych pacjentów z alergią na mleko lub jajka. Kryteria kwalifikacji to: 1) osoby dorosłe powyżej 16 roku życia, 2) podwyższone stężenie swoistych IgE w surowicy (≥ 5 kU/l (kilojednostki na litr) mleka lub jaja) lub dodatni wynik testu skórnego (≥ 5 mm, mleko lub jajko) i 3) pozytywny wynik testu prowokacyjnego z mlekiem lub jajkiem. Zwerbowani pacjenci spełniający kryteria wstępne są losowo przydzielani do grupy z indukowaną tolerancją, otrzymującej mleko lub jaja (n = 20) lub do grupy kontrolnej, której należy przestrzegać na diecie unikającej (n = 20). Immunoterapia doustna polega na początkowym przyjęciu bardzo małej ilości alergenu i powolnym, stopniowym zwiększaniu dawki, aż do osiągnięcia dawki podtrzymującej. Zwiększanie dawki jest monitorowane w szpitalu. Następnie pacjent będzie kontynuował codzienne spożywanie mleka lub jajek w domu.

Przed rozpoczęciem badania, po osiągnięciu dawki podtrzymującej i po 12 miesiącach od rozpoczęcia badania wykonuje się punktowe testy skórne ze składnikami alergenowymi mleka lub jaj, wypełnia się kwestionariusz objawowy i pobiera próbki krwi. Wizyty pacjentów odbywają się w przychodni w ramach normalnego trybu pracy.

Badane są dostępne w handlu (Thermo Fisher Scientific Phadia) specyficzne składniki alergenów (IgE i IgG4), a także IgA, IgA1 i IgA2. Składnikami alergenów mleka krowiego są: alfa-laktoalbumina, beta-laktoglobulina, kazeina, laktoferyna i albumina surowicy bydlęcej, a składnikami alergenów jaja są: owomukoid, albumina jaja kurzego, konalbumina i lizozym.

Leukocyty jednojądrzaste są izolowane z próbek krwi i hodowane w inkubatorze o temperaturze 37°C 10^6 komórek na mililitr pożywki RPMI (Roswell Park Memorial Institute Medium) zawierającej 5% autologicznego osocza i składników alergenów mleka krowiego: alfa-laktalbumina, beta-laktoglobulina , albuminy surowicy bydlęcej, kazeiny i laktoferyny, czy składników alergenów jaja kurzego: owomukoidu, albuminy jaja kurzego, konalbuminy i lizozymu. Jako kontrolę pozytywną stosuje się mitogen, a jako kontrolę negatywną pożywkę bez stymulacji. Składniki alergenów mleka i jaj są czyszczone za pomocą kolumn Detoxi-Gel Endotoxin Removal Gel (Thermo Scientific Pierce Chemicals) w celu usunięcia skutków endotoksyn podczas stymulacji komórek. Limfoproliferację bada się przy użyciu trzech równoległych próbek, a ekspresję cytokin bada się przy użyciu dwóch równoległych próbek (Luminex/Lincoplex: interleukina-4 (IL-4), IL-5, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, IL-18, IL-22, IL-23, IL-27, interferon gamma (IFN-γ), czynnik martwicy nowotworów (TNF) i transformujący czynnik wzrostu beta (TGF-β)).

Względy etyczne

Badanie odbywa się zgodnie z instrukcjami i przepisami stosowanymi w badaniach biomedycznych. Komisja Etyki Uniwersytetu w Turku zatwierdziła badanie 15 lutego 2011 r. Każdy uczestnik wyrazi pisemną świadomą zgodę. Udział w badaniu jest dobrowolny i może zostać zawieszony bez podania przyczyny w każdym momencie trwania badania, a odmowa lub przerwanie badania nie wpływa na dalsze leczenie pacjenta. Próbki pacjentów i zebrane dane są przetwarzane i przechowywane zgodnie z instrukcjami i przepisami stosowanymi w badaniach biomedycznych.

Szacunek, harmonogram i wyniki

Wizyty pacjentów realizowane są w przychodniach w ramach normalnego przyjmowania pacjentów z alergią i nie wiążą się z dodatkowymi kosztami dla pacjentów. Wydatki związane z badaniami nad odpowiedzią immunologiczną za pośrednictwem przeciwciał i komórek są pokrywane z funduszy zewnętrznych. Badanie rozpocznie się jesienią 2014 r., a jego zakończenie planowane jest na wiosnę 2016 r. Wyniki zostaną opublikowane w międzynarodowych czasopismach naukowych.