Hyposenzibilizace kravského mléka a slepičích vajec u dospělých

Pozadí

Alergie na vejce, mléko a obiloviny jsou nejvýznamnější potravinové alergie u finských dětí, prevalence v západních zemích je 1–4 %. U některých jedinců přetrvává potravinová alergie až do dospělosti. Základem léčby alergie na mléko a vejce zprostředkované IgE je vyhýbací se dietě a nošení epinefrinového injektoru pro případ alergické reakce. Vyhýbavá dieta je velmi obtížná a má negativní vliv na kvalitu života. Náhodná konzumace mléka nebo vajec může způsobit život ohrožující reakce, dokonce i smrt. Nedávné studie naznačují, že specifická indukce orální tolerance (SOTI) poskytuje možnost léčby u dětí s pokračující alergií s vysokou mírou úspěšnosti.

Je zřejmé, že perorální imunoterapie má vliv na specifickou imunitní odpověď mléka a vajec, ale mechanismy této léčby jsou zatím jen málo studovány a její účinky na buněčnou a molekulární úroveň jsou prakticky neznámé. Neexistují ani žádné laboratorní studie, které by monitorovaly účinnost nebo předpovídaly výsledek předem nebo v počátečních fázích léčby. Nejsou k dispozici žádné výzkumné údaje o humorálních IgE, IgG4 a imunoglobulinových A (IgA) odpovědích nebo buňkách zprostředkovaných či cytokinových odpovědích vyvolaných jednotlivými hlavními složkami alergenu kravského mléka a vajec během perorální imunoterapie. Neexistují žádné nástroje pro předpovídání výsledku léčby.

Cíle

Studie se zaměřuje na specifickou indukci orální tolerance u dospělých alergických na kravské mléko nebo slepičí vejce. Orální imunoterapie zahrnuje užívání velmi malých množství alergenu a pomalé zvyšování množství. V důsledku toho může být eliminační dieta zcela nebo částečně zrušena bez obav ze závažných alergických reakcí. Dalším cílem je prozkoumat změny v protilátkami a buňkami zprostředkované imunitní odpovědi na jednotlivé složky alergenů kravského mléka a vajec během navození tolerance a porovnat je s efektem léčby.

Materiály a metody

Studie zahrne 40 dospělých pacientů s alergií na mléko nebo vejce. Kritéria způsobilosti jsou: 1) dospělí starší 16 let, 2) zvýšené sérové ​​hladiny specifického IgE (≥ 5 kU/l, (kilojednotky na litr) mléka nebo vajec) nebo pozitivní kožní prick test (≥ 5 mm, mléko nebo vejce) a 3) pozitivní výzva na mléko nebo vejce. Rekrutovaní jedinci splňující vstupní kritéria jsou randomizováni do skupiny s navozením tolerance přijímající mléko nebo vejce (n = 20) nebo do kontrolní skupiny, která bude dodržována na vyhýbací dietě (n = 20). Orální imunoterapie spočívá v počátečním podání velmi malého množství alergenu a jeho pomalém postupném zvyšování, dokud není dosaženo udržovací dávky. Zvýšení dávky je sledováno v nemocnici. Poté bude pacient pokračovat v každodenním používání mléka nebo vajec doma.

Před zahájením studie, po dosažení udržovací dávky a po 12 měsících od zahájení studie, se provádějí kožní prick-testy s alergenovými složkami specifickými pro mléko nebo vejce, vyplní se symptomový dotazník a odeberou se vzorky krve. Návštěvy pacientů probíhají v ambulanci jako součást běžné rutiny.

Vyšetřují se komerčně dostupné (Thermo Fisher Scientific Phadia) specifické složky alergenu (IgE a IgG4), stejně jako IgA, IgA1 a IgA2. Složky alergenu kravského mléka jsou: alfa-laktalbumin, beta-laktoglobulin, kasein, laktoferin a hovězí sérový albumin a složkami alergenu vajec jsou: ovomukoid, ovalbumin, konalbumin a lysozym.

Ze vzorků krve se izolují mononukleární leukocyty a kultivují se v inkubátoru při 37 °C 10^6 buněk na mililitr média RPMI (Roswell Park Memorial Institute Medium) obsahující 5 % autologní plazmy a složky alergenu kravského mléka: alfa-laktalbumin, beta-laktoglobulin , hovězí sérový albumin, kasein a laktoferin nebo složky vaječného alergenu: ovomukoid, ovalbumin, konalbumin a lysozym. Mitogen se používá jako pozitivní kontrola a médium bez stimulace jako negativní kontrola. Alergenové složky mléka a vajec jsou vyčištěny pomocí kolon Detoxi-Gel Endotoxin Removal Gel (Thermo Scientific Pierce Chemicals), aby se odstranily účinky endotoxinů během buněčné stimulace. Lymfoproliferace je studována pomocí tří paralelních vzorků a exprese cytokinů je studována pomocí dvou paralelních vzorků (Luminex/Lincoplex: interleukin-4 (IL-4), IL-5, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, IL-18, IL-22, IL-23, IL-27, interferon gama (IFN-y), tumor nekrotizující faktor (TNF) a transformující růstový faktor beta (TGF-p)).

Etické úvahy

Studium se řídí pokyny a předpisy používanými v biomedicínském výzkumu. Etická komise univerzity v Turku schválila studii 15. února 2011. Každý účastník udělí písemný informovaný souhlas. Účast na výzkumu je dobrovolná a může být kdykoli během studie bez jakéhokoli důvodu pozastavena a odmítnutí nebo ukončení neovlivní další léčbu pacienta. Vzorky pacientů a shromážděná data se zpracovávají a ukládají podle pokynů a předpisů používaných v biomedicínském výzkumu.

Odhad, plán a výsledky

Návštěvy pacientů jsou prováděny v ambulancích v rámci běžného příjmu alergiků a neznamenají pro pacienty další náklady. Náklady související se studiemi imunitní odpovědi zprostředkované protilátkami a buňkami jsou hrazeny z externího financování. Studie bude zahájena na podzim 2014 a má být dokončena na jaře 2016. Výsledky budou publikovány v mezinárodních vědeckých časopisech.