Diagnostyka i monitorowanie eozynofilowego zapalenia przełyku za pomocą cytogąbki

Omówienie projektu badania (wszystkie cele) Będzie to prospektywne badanie kohortowe z rekrutacją pacjentów w UNC i Mayo Clinic, z analizą próbek przeprowadzoną przez University of Cambridge. W Celu 1 zostaną włączeni pacjenci z EoE, tkanka zostanie pobrana zarówno z Cytosponge, jak i endoskopii, a metody zostaną porównane dla pojedynczego punktu czasowego w celu określenia dokładności Cytosponge do ilościowego określenia liczby eozynofili w przełyku. Bezpieczeństwo wszystkich pacjentów będzie monitorowane, a badani wypełnią ankietę na temat dopuszczalności Cytosponge (Cel 2).

Protokół cytogąbkowy:

Po wyjaśnieniu badania i wyrażeniu przez pacjenta świadomej zgody, Cytosponge zostanie podane przed endoskopią przez przeszkolony personel badawczy pod nadzorem lekarza. Jeśli pacjenci zdecydują się na znieczulenie miejscowe, przed podaniem Cytosponge otrzymają 2% płyn do płukania gardła z lidokainą. Cytogąbka będzie podawana zgodnie z instrukcją użycia. Po wydobyciu nitkę przecina się, a gąbkę (zawierającą próbkę tkanki) umieszcza się w pojemniku, zanurza w utrwalaczu i przechowuje w lodówce w temperaturze 4°C. Utrwalacz jest następnie wirowany w wirówce, a osadzone komórki są zatapiane w bloku parafinowym przy użyciu standardowych technik.

Górna endoskopia i biopsja:

Po usunięciu gąbki Cytosponge pacjent zostanie poddany standardowej (rutynowej opiece) endoskopii górnego odcinka i biopsji, zgodnie ze wskazaniami klinicznymi. Podczas tego badania personel naukowy zarejestruje wszystkie endoskopowe cechy EoE, w tym pierścienie, bruzdy, białe blaszki, zmniejszone unaczynienie i zwężenia. Nasilenie wyników badań endoskopowych będzie mierzone przy użyciu niedawno zatwierdzonego systemu punktacji referencyjnej endoskopii (EREFS). Zostaną pobrane cztery biopsje przełyku zarówno z dystalnego (5 cm powyżej połączenia żołądkowo-przełykowego), jak i proksymalnego (15 cm powyżej połączenia żołądkowo-przełykowego) przełyku. Wykazano, że taka liczba biopsji maksymalizuje czułość diagnostyczną EoE.

Histologia i liczba eozynofili:

Wszystkie próbki tkanek z cytogąbki i endoskopii zostaną zakodowane za pomocą numeru identyfikacyjnego pacjenta, ale poza tym zostaną zamaskowane dla wszystkich danych klinicznych, w tym aktywności EoE, objawów, charakterystyki pacjenta i przepisanych metod leczenia. Za pomocą bloczków parafinowych zostaną pocięte szkiełka patologiczne, a tkanka poddana rutynowemu barwieniu H&E. Szkiełka zostaną następnie zdigitalizowane i przy użyciu Aperio ImageScope (Aperio Technologies, Vista, CA) zostanie określona maksymalna gęstość eozynofili (eozynofile/mm2 [eos/mm2]) przy użyciu naszego wcześniej zatwierdzonego protokołu. Dla celów porównania z poprzednimi badaniami, gęstość eozynofili zostanie następnie przeliczona na liczbę eozynofili (eos/hpf) dla zakładanej wielkości hpf 0,24 mm2, wielkości przeciętnego pola, jak podano w literaturze. Patolodzy prowadzący badania z UNC i Mayo Clinic dokonają przeglądu próbek ze swoich ośrodków, a dział patologii z Cambridge przeprowadzi drugi przegląd wszystkich próbek, aby zapewnić jak najdokładniejsze ilościowe określenie liczby eozynofili.

Ponadto badacze planują przeprowadzić specjalne barwienie i analizę istniejących próbek z biopsji i gąbki w celu ustalenia, czy można poprawić dokładność diagnostyczną tego testu. W szczególności badacze zbadają markery funkcji, aktywacji i stanu zapalnego eozynofili, takie jak peroksydaza eozynofilowa (EPX), białko ziarniste, które wyraźnie identyfikuje nienaruszone eozynofile, a także zewnątrzkomórkowe odkładanie EPX sugerujące degranulację. Można to wykryć za pomocą immunohistochemii. Zostałoby to zrobione w klinice Mayo z naszymi obecnymi współpracownikami, którzy obecnie mają zakodowane próbki.

Oceny bezpieczeństwa i dostępności:

Pacjenci będą oceniani w wielu punktach w celu określenia bezpieczeństwa gąbki Cytosponge w EoE. Badacze ocenią wszelkie objawy lub zdarzenia, gdy tylko kapsułka z gąbką zostanie połknięta, a także natychmiast po usunięciu rozszerzonej gąbki. Z uczestnikami skontaktujemy się 1 i 7 dni po endoskopii w celu oceny zdarzeń niepożądanych. W przypadku Celu 2 uczestnicy otrzymają ankietę akceptowalności w 7-dniowym punkcie kontrolnym, aby pacjenci mieli wystarczająco dużo czasu na zastanowienie się nad swoimi doświadczeniami z obydwoma podejściami do pobierania tkanek. W szczególności w tej ankiecie zostaną odnotowane doświadczenia pacjentów z połykaniem Cytogąbki, czy zrobiliby to ponownie i czy wolą Cytogąbkę czy endoskopię do diagnozowania i monitorowania EoE.