Diagnose und Überwachung der eosinophilen Ösophagitis mit dem Cytosponge

Überblick über das Studiendesign (alle Ziele) Dies wird eine prospektive Kohortenstudie sein, bei der die Patientenrekrutierung an der UNC und der Mayo Clinic durchgeführt wird und die Probenanalyse von der University of Cambridge durchgeführt wird. In Ziel 1 werden Patienten mit EoE aufgenommen, Gewebe wird sowohl aus dem Cytosponge als auch aus der Endoskopie entnommen, und die Methoden werden für einen einzigen Zeitpunkt verglichen, um die Genauigkeit von Cytosponge zur Quantifizierung der Eosinophilenzahlen der Speiseröhre zu bestimmen. Bei allen Patienten wird die Sicherheit überwacht und die Probanden werden eine Umfrage zur Akzeptanz von Cytosponge ausfüllen (Ziel 2).

Cytosponge-Protokoll:

Nachdem die Studie erklärt wurde und ein Patient seine Einwilligung nach Aufklärung erteilt hat, wird der Cytosponge vor der Endoskopie von geschultem Forschungspersonal unter ärztlicher Aufsicht verabreicht. Wenn sich die Probanden für eine Lokalanästhesie entscheiden, werden sie vor der Verabreichung des Cytosponge mit einer 2%igen Lidocaingurgellösung versorgt. Der Cytosponge wird gemäß seiner Gebrauchsanweisung verabreicht. Nach der Entnahme wird die Schnur durchtrennt und der Schwamm (der die Gewebeprobe enthält) in einen Behälter gegeben, in Fixiermittel getaucht und bei 4°C im Kühlschrank gelagert. Das Fixiermittel wird dann in einer Zentrifuge zentrifugiert und die pelletierten Zellen werden unter Verwendung von Standardtechniken in einen Paraffinblock eingebettet.

Obere Endoskopie und Biopsie:

Nachdem der Cytosponge entfernt wurde, wird der Patient je nach klinischer Indikation einer standardmäßigen (Routinebehandlung) oberen Endoskopie und Biopsie unterzogen. Während dieser Untersuchung zeichnet das Forschungspersonal alle endoskopischen Merkmale von EoE auf, einschließlich Ringe, Furchen, weiße Plaques, verminderte Vaskularität und Strikturen. Der Schweregrad der Endoskopiebefunde wird mit dem kürzlich validierten endoskopischen Referenzscore (EREFS)-Scoring-System gemessen. Vier Ösophagusbiopsien werden sowohl von der distalen (5 cm über dem gastroösophagealen Übergang) als auch von der proximalen (15 cm über dem gastroösophagealen Übergang) Ösophagus entnommen. Es hat sich gezeigt, dass diese Anzahl von Biopsien die diagnostische Sensitivität für EoE maximiert.

Histologie und Eosinophilenzahlen:

Alle Gewebeproben aus dem Cytosponge und der Endoskopie werden mit der Identifikationsnummer eines Probanden kodiert, ansonsten aber für alle klinischen Daten maskiert, einschließlich EoE-Aktivität, Symptome, Patientenmerkmale und verschriebene Behandlungen. Unter Verwendung der Paraffinblöcke werden Pathologie-Objektträger geschnitten und das Gewebe mit routinemäßiger H&E-Färbung verarbeitet. Die Objektträger werden dann digitalisiert und unter Verwendung des Aperio ImageScope (Aperio Technologies, Vista, CA) wird die maximale Eosinophilendichte (Eosinophile/mm2 [eos/mm2]) unter Verwendung unseres zuvor validierten Protokolls bestimmt. Zum Vergleich mit früheren Studien wird die Eosinophilendichte dann in Eosinophilenzahlen (eos/hpf) für eine angenommene hpf-Größe von 0,24 mm2 umgerechnet, die Größe eines durchschnittlichen Feldes, wie in der Literatur angegeben. Die Studienpathologen von UNC und Mayo Clinic werden die Proben von ihren Standorten überprüfen, und die Studienpathologie von Cambridge wird eine zweite Überprüfung aller Proben vornehmen, um eine möglichst genaue Quantifizierung der Eosinophilenzahlen sicherzustellen.

Darüber hinaus planen die Forscher, spezielle Färbungen und Analysen der vorhandenen Biopsie- und Schwammproben durchzuführen, um festzustellen, ob die diagnostische Genauigkeit dieses Tests verbessert werden kann. Insbesondere werden die Forscher Marker für die Funktion, Aktivierung und Entzündung von Eosinophilen untersuchen, wie z. B. Eosinophilenperoxidase (EPX), ein Körnerprotein, das intakte Eosinophile eindeutig identifiziert, sowie extrazelluläre EPX-Ablagerungen, die auf eine Degranulation hindeuten. Dies kann immunhistochemisch nachgewiesen werden. Dies würde in der Mayo-Klinik mit unseren derzeitigen Mitarbeitern erfolgen, die derzeit über die codierten Proben verfügen.

Sicherheits- und Zugänglichkeitsbewertungen:

Die Patienten werden an mehreren Stellen untersucht, um die Sicherheit des Cytosponge bei EoE zu bestimmen. Die Ermittler werden sofort nach dem Verschlucken der Schwammkapsel sowie unmittelbar nach dem Entfernen des expandierten Schwamms auf Symptome oder Ereignisse untersuchen. Die Teilnehmer werden 1 und 7 Tage nach der Endoskopie kontaktiert, um sie auf unerwünschte Ereignisse zu untersuchen. Für Ziel 2 erhalten die Teilnehmer die Akzeptanzumfrage am 7-tägigen Nachsorgepunkt, sodass die Patienten ausreichend Zeit haben, über ihre Erfahrungen mit beiden Ansätzen zur Gewebeentnahme nachzudenken. Insbesondere wird diese Umfrage die Erfahrung des Patienten mit dem Schlucken des Cytosponge aufzeichnen, ob er es wieder tun würde und ob er den Cytosponge oder die Endoskopie für die Diagnose und Überwachung von EoE bevorzugt.