Диагностика и мониторинг эозинофильного эзофагита с помощью цитогубки

Обзор дизайна исследования (все цели) Это будет проспективное когортное исследование, в котором набор пациентов будет проводиться в UNC и клинике Mayo, а анализ образцов будет проведен Кембриджским университетом. В цели 1 будут зарегистрированы пациенты с ЭоЭ, ткань будет получена как с помощью Cytosponge, так и с помощью эндоскопии, и методы будут сравниваться для одного момента времени, чтобы определить точность Cytosponge для количественного определения количества эозинофилов в пищеводе. Для всех пациентов будет контролироваться безопасность, и субъекты будут заполнять опрос о приемлемости Cytosponge (Цель 2).

Цитогубка протокол:

После того, как исследование было объяснено и пациент дал информированное согласие, Cytosponge будет введена перед эндоскопией обученным исследовательским персоналом под наблюдением врача. Если субъекты решат получить местный анестетик, им будет предоставлено полоскание 2% лидокаином перед введением цитоспонжа. Cytosponge будет вводиться в соответствии с инструкциями по применению. После извлечения нить обрезают, а губку (содержащую образец ткани) помещают в контейнер, погружают в фиксатор и хранят в холодильнике при температуре 4°C. Затем фиксатор центрифугируют, а осажденные клетки заливают в парафиновый блок стандартными методами.

Верхняя эндоскопия и биопсия:

После удаления Cytosponge пациенту будет проведена стандартная (обычная) эндоскопия верхних отделов и биопсия в соответствии с клиническими показаниями. Во время этого исследования исследовательский персонал будет записывать все эндоскопические признаки ЭоЭ, включая кольца, борозды, белые бляшки, снижение васкуляризации и стриктуры. Тяжесть результатов эндоскопии будет измеряться с использованием недавно утвержденной системы оценки эндоскопических эталонных баллов (EREFS). Берут четыре биопсии пищевода как из дистального (на 5 см выше желудочно-пищеводного перехода), так и из проксимального (15 см выше желудочно-пищеводного перехода) пищевода. Было показано, что такое количество биопсий максимизирует диагностическую чувствительность для EoE.

Гистология и количество эозинофилов:

Все образцы тканей из Cytosponge и эндоскопа будут кодироваться идентификационным номером субъекта, но в остальном они будут замаскированы для всех клинических данных, включая активность EoE, симптомы, характеристики пациента и назначенное лечение. С помощью парафиновых блоков будут вырезаны предметные стекла патологии, а ткань обработана обычным окрашиванием гематоксилин-эозином. Затем слайды будут оцифрованы, и с помощью Aperio ImageScope (Aperio Technologies, Vista, CA) будет определена максимальная плотность эозинофилов (эозинофилов/мм2 [эоз/мм2]) с использованием нашего ранее утвержденного протокола. Для целей сравнения с предыдущими исследованиями плотность эозинофилов затем будет преобразована в количество эозинофилов (eos/hpf) для предполагаемого размера hpf 0,24 мм2, размера среднего поля, как указано в литературе. Патологи-исследователи из Университета Северной Каролины и клиники Майо рассмотрят образцы со своих участков, а отдел патологии из Кембриджа предоставит второй обзор всех образцов, чтобы обеспечить максимально точную количественную оценку количества эозинофилов.

Кроме того, исследователи планируют провести специальное окрашивание и анализ существующих образцов биопсии и губки, чтобы определить, можно ли повысить диагностическую точность этого теста. В частности, исследователи изучат маркеры функции, активации и воспаления эозинофилов, такие как пероксидаза эозинофилов (EPX), белок гранул, который четко идентифицирует интактные эозинофилы, а также внеклеточное отложение EPX, свидетельствующее о дегрануляции. Это можно обнаружить с помощью иммуногистохимии. Это будет сделано в клинике Мэйо с нашими нынешними сотрудниками, у которых в настоящее время есть закодированные образцы.

Оценки безопасности и доступности:

Пациенты будут оцениваться в нескольких точках, чтобы определить безопасность Cytosponge в EoE. Исследователи будут оценивать любые симптомы или события, как только капсула с губкой будет проглочена, а также сразу после удаления расширенной губки. С участниками свяжутся через 1 и 7 дней после эндоскопии для оценки побочных эффектов. Для Цели 2 участникам будет проведен опрос о приемлемости на 7-й день наблюдения, чтобы у пациентов было достаточно времени, чтобы обдумать свой опыт использования обоих подходов к сбору тканей. В частности, в этом опросе будет записан опыт пациента при проглатывании Cytosponge, будут ли они делать это снова, и предпочтут ли они Cytosponge или эндоскопию для диагностики и мониторинга EoE.