Diagnostika a monitorování eozinofilní ezofagitidy pomocí cytospongy

Přehled návrhu studie (všechny cíle) Toto bude prospektivní kohortová studie, do níž budou pacienti zařazováni na UNC a Mayo Clinic s analýzou vzorků provedenou Univerzitou v Cambridge. V cíli 1 budou zařazeni pacienti s EoE, tkáň bude získána jak z cytospongy, tak z endoskopie, a metody budou porovnány pro jeden časový bod, aby se určila přesnost Cytosponge pro kvantifikaci počtu eozinofilů v jícnu. U všech pacientů bude monitorována bezpečnost a subjekty vyplní průzkum o přijatelnosti Cytosponge (cíl 2).

Protokol cytohouby:

Poté, co byla studie vysvětlena a pacient poskytne informovaný souhlas, bude Cytosponge podána před endoskopií vyškoleným výzkumným personálem pod dohledem lékaře. Pokud se subjekty rozhodnou pro lokální anestetikum, pak jim bude před podáním cytohouby poskytnuto 2% lidokainové kloktadlo. Cytosponge bude podávána podle návodu k použití. Po odebrání se provázek odstřihne a houba (která obsahuje vzorek tkáně) se umístí do nádoby, ponoří se do fixativu a uloží se do chladničky při teplotě 4 °C. Fixační prostředek se poté odstředí v centrifuze a peletované buňky se zapouzdří do parafinového bloku za použití standardních technik.

Horní endoskopie a biopsie:

Poté, co byla cytosponge odstraněna, pacient podstoupí standardní péči (rutinní péče) horní endoskopii a biopsii, jak je klinicky indikováno. Během tohoto vyšetření výzkumný personál zaznamená všechny endoskopické rysy EoE, včetně prstenců, rýh, bílých plaků, snížené vaskularity a striktur. Závažnost endoskopických nálezů bude měřena pomocí nedávno ověřeného skórovacího systému endoskopického referenčního skóre (EREFS). Budou odebrány čtyři biopsie jícnu jak z distálního (5 cm nad gastroezofageální junkcí), tak z proximálního (15 cm nad gastroezofageální junkcí) jícnu. Ukázalo se, že tento počet biopsií maximalizuje diagnostickou senzitivitu pro EoE.

Histologie a počty eozinofilů:

Všechny vzorky tkáně z cytohouby a endoskopie budou kódovány identifikačním číslem subjektu, ale jinak budou maskovány pro všechna klinická data, včetně aktivity EoE, symptomů, charakteristik pacienta a předepsané léčby. Pomocí parafínových bloků budou řezána patologická sklíčka a tkáň zpracována rutinním barvením H&E. Sklíčka budou poté digitalizována a pomocí Aperio ImageScope (Aperio Technologies, Vista, CA) bude stanovena maximální hustota eozinofilů (eozinofily/mm2 [eos/mm2]) pomocí našeho dříve ověřeného protokolu. Pro účely srovnání s předchozími studiemi bude poté hustota eozinofilů převedena na počty eozinofilů (eos/hpf) pro předpokládanou velikost hpf 0,24 mm2, což je velikost průměrného pole, jak je uvedeno v literatuře. Patologové studie z UNC a Mayo Clinic posoudí vzorky ze svých pracovišť a patologie studie z Cambridge poskytne druhou kontrolu všech vzorků, aby byla zajištěna co nejpřesnější kvantifikace počtu eozinofilů.

Kromě toho vyšetřovatelé plánují provést speciální barvení a analýzu stávajících vzorků biopsie a houby s cílem určit, zda lze zlepšit diagnostickou přesnost tohoto testu. Vyšetřovatelé budou zkoumat zejména markery funkce, aktivace a zánětu eozinofilů, jako je eozinofilní peroxidáza (EPX), granulovaný protein, který jasně identifikuje intaktní eozinofily, stejně jako extracelulární ukládání EPX svědčící pro degranulaci. To lze zjistit pomocí imunohistochemie. To by bylo provedeno na klinice Mayo s našimi současnými spolupracovníky, kteří v současné době mají kódované vzorky.

Hodnocení bezpečnosti a přístupnosti:

Pacienti budou hodnoceni ve více bodech, aby se určila bezpečnost cytospongy v EoE. Vyšetřovatelé vyhodnotí jakékoli příznaky nebo události, jakmile je kapsle s houbou spolknuta, a také ihned po odstranění expandované houby. Účastníci budou kontaktováni 1 a 7 dní po endoskopii za účelem posouzení nežádoucích účinků. Pro Cíl 2 bude účastníkům proveden průzkum přijatelnosti v 7denním kontrolním bodě, takže pacienti mají dostatek času na reflexi svých zkušeností s oběma přístupy k odběru tkání. Tento průzkum zaznamená zejména pacientovu zkušenost s polykáním cytohouby, zda by to udělal znovu a zda by pro diagnostiku a monitorování EoE preferoval cytohoubu nebo endoskopii.