Diagnosi e monitoraggio dell'esofagite eosinofila utilizzando la citospugna

Panoramica del disegno dello studio (tutti gli obiettivi) Questo sarà uno studio prospettico di coorte, con l'arruolamento dei pazienti condotto presso UNC e Mayo Clinic con analisi del campione eseguita dall'Università di Cambridge. Nell'obiettivo 1, verranno arruolati pazienti con EoE, il tessuto sarà ottenuto sia dalla Cytosponge che dall'endoscopia e i metodi saranno confrontati per un singolo punto temporale per determinare l'accuratezza della Cytosponge per quantificare la conta degli eosinofili esofagei. Per tutti i pazienti, la sicurezza sarà monitorata e i soggetti completeranno un sondaggio sull'accettabilità di Cytosponge (Obiettivo 2).

Protocollo citospugna:

Dopo che lo studio è stato spiegato e un paziente ha fornito il consenso informato, la Cytosponge verrà somministrata prima dell'endoscopia da personale di ricerca addestrato sotto la supervisione di un medico. Se i soggetti scelgono di ricevere un anestetico locale, verranno forniti gargarismi con lidocaina al 2% prima della somministrazione di Cytosponge. La Cytosponge sarà somministrata secondo le sue istruzioni per l'uso. Dopo il prelievo, il filo viene tagliato e la spugna (che contiene il campione di tessuto) viene posta in un contenitore, immersa nel fissativo, e conservata in frigorifero a 4°C. Il fissativo viene quindi centrifugato in una centrifuga e le cellule pellettate vengono incorporate in un blocco di paraffina utilizzando tecniche standard.

Endoscopia superiore e biopsia:

Dopo che la Cytosponge è stata rimossa, il paziente verrà sottoposto a endoscopia superiore e biopsia standard di cura (cura di routine), come clinicamente indicato. Durante questo esame, il personale di ricerca registrerà tutte le caratteristiche endoscopiche di EoE, inclusi anelli, solchi, placche bianche, ridotta vascolarizzazione e stenosi. La gravità dei risultati dell'endoscopia sarà misurata utilizzando il sistema di punteggio di riferimento endoscopico recentemente convalidato (EREFS). Verranno prelevate quattro biopsie esofagee sia dall'esofago distale (5 cm sopra la giunzione gastro-esofagea) che prossimale (15 cm sopra la giunzione gastro-esofagea). È stato dimostrato che questo numero di biopsie massimizza la sensibilità diagnostica per EoE.

Istologia e conta degli eosinofili:

Tutti i campioni di tessuto dalla Cytosponge e dall'endoscopia saranno codificati con il numero di identificazione di un soggetto, ma saranno altrimenti mascherati per tutti i dati clinici, inclusa l'attività EoE, i sintomi, le caratteristiche del paziente e i trattamenti prescritti. Utilizzando i blocchi di paraffina, i vetrini patologici verranno tagliati e il tessuto processato con la colorazione H&E di routine. I vetrini verranno quindi digitalizzati e, utilizzando Aperio ImageScope (Aperio Technologies, Vista, CA), verrà determinata la densità massima di eosinofili (eosinofili/mm2 [eos/mm2]) utilizzando il nostro protocollo precedentemente convalidato. A scopo di confronto con studi precedenti, la densità degli eosinofili sarà quindi convertita in conte di eosinofili (eos/hpf) per una dimensione hpf presunta di 0,24 mm2, la dimensione di un campo medio come riportato in letteratura. I patologi dello studio dell'UNC e della Mayo Clinic esamineranno i campioni dai loro siti e la patologia dello studio di Cambridge fornirà una seconda revisione di tutti i campioni per garantire la quantificazione più accurata possibile della conta degli eosinofili.

Inoltre, i ricercatori hanno in programma di eseguire colorazioni e analisi speciali della biopsia esistente e dei campioni di spugna con l'obiettivo di determinare se l'accuratezza diagnostica di questo test può essere migliorata. In particolare, i ricercatori esamineranno i marcatori della funzione, dell'attivazione e dell'infiammazione degli eosinofili, come la perossidasi eosinofila (EPX), una proteina granulare che identifica chiaramente gli eosinofili intatti, nonché la deposizione extracellulare di EPX suggestiva di degranulazione. Questo può essere rilevato con l'immunoistochimica. Questo verrebbe fatto alla clinica Mayo con i nostri attuali collaboratori che attualmente hanno i campioni codificati.

Valutazioni di sicurezza e accessibilità:

I pazienti saranno valutati in più punti per determinare la sicurezza del Cytosponge in EoE. Gli investigatori valuteranno eventuali sintomi o eventi non appena la capsula di spugna viene ingerita, nonché immediatamente dopo la rimozione della spugna espansa. I partecipanti verranno contattati 1 e 7 giorni dopo l'endoscopia per valutare gli eventi avversi. Per l'obiettivo 2, ai partecipanti verrà somministrato il sondaggio di accettabilità al punto di follow-up di 7 giorni, in modo che i pazienti abbiano tempo adeguato per riflettere sulle loro esperienze con entrambi gli approcci di raccolta dei tessuti. In particolare, questo sondaggio registrerà l'esperienza del paziente con la deglutizione della Cytosponge, se lo farebbe di nuovo e se preferisce la Cytosponge o l'endoscopia per la diagnosi e il monitoraggio dell'EoE.