Diagnóstico e Monitoramento da Esofagite Eosinofílica Utilizando a Citoesponja

Visão geral do desenho do estudo (todos os objetivos) Este será um estudo de coorte prospectivo, com inscrição de pacientes realizada na UNC e Mayo Clinic com análise de amostra realizada pela Universidade de Cambridge. No Objetivo 1, os pacientes com EoE serão inscritos, o tecido será obtido tanto da Cytosponge quanto da endoscopia, e os métodos serão comparados para um único ponto de tempo para determinar a precisão da Cytosponge para quantificar as contagens de eosinófilos esofágicos. Para todos os pacientes, a segurança será monitorada e os participantes preencherão uma pesquisa sobre a aceitabilidade do Cytosponge (objetivo 2).

Protocolo de citoesponja:

Após a explicação do estudo e o consentimento informado do paciente, a Cytosponge será administrada antes da endoscopia por uma equipe de pesquisa treinada sob a supervisão de um médico. Se os indivíduos optarem por receber um anestésico local, eles receberão um gargarejo de lidocaína a 2% antes da administração da Cytosponge. A Cytosponge será administrada de acordo com suas instruções de uso. Após a retirada, o fio é cortado e a esponja (que contém o espécime de tecido) é colocada em um recipiente, imerso em fixador e armazenado em geladeira a 4°C. O fixador é então girado em uma centrífuga e as células peletizadas são incorporadas em um bloco de parafina usando técnicas padrão.

Endoscopia alta e biópsia:

Após a remoção da Cytosponge, o paciente será submetido a endoscopia digestiva alta e biópsia padrão (cuidados de rotina), conforme indicado clinicamente. Durante este exame, a equipe de pesquisa registrará todas as características endoscópicas da EoE, incluindo anéis, sulcos, placas brancas, diminuição da vascularização e estenoses. A gravidade dos achados da endoscopia será medida usando o sistema de pontuação de referência endoscópica validado recentemente (EREFS). Quatro biópsias esofágicas serão feitas tanto do esôfago distal (5 cm acima da junção gastroesofágica) quanto proximal (15 cm acima da junção gastroesofágica). Este número de biópsias demonstrou maximizar a sensibilidade diagnóstica para EEo.

Histologia e contagem de eosinófilos:

Todas as amostras de tecido da Cytosponge e da endoscopia serão codificadas com o número de identificação de um indivíduo, mas serão mascaradas para todos os dados clínicos, incluindo atividade EoE, sintomas, características do paciente e tratamentos prescritos. Usando os blocos de parafina, as lâminas de patologia serão cortadas e o tecido processado com coloração H&E de rotina. As lâminas serão digitalizadas e, usando o Aperio ImageScope (Aperio Technologies, Vista, CA), a densidade máxima de eosinófilos (eosinófilos/mm2 [eos/mm2]) será determinada usando nosso protocolo previamente validado. Para fins de comparação com estudos anteriores, a densidade de eosinófilos será então convertida em contagens de eosinófilos (eos/hpf) para um tamanho de hpf assumido de 0,24 mm2, o tamanho de um campo médio conforme relatado na literatura. Os patologistas do estudo da UNC e da Mayo Clinic revisarão as amostras de seus locais, e a patologia do estudo de Cambridge fornecerá uma segunda revisão de todas as amostras para garantir a quantificação mais precisa possível das contagens de eosinófilos.

Além disso, os investigadores planejam realizar coloração especial e análise da biópsia existente e amostras de esponja com o objetivo de determinar se a precisão do diagnóstico deste teste pode ser melhorada. Em particular, os investigadores examinarão marcadores de função, ativação e inflamação de eosinófilos, como eosinófilo peroxidase (EPX), uma proteína granular que identifica claramente eosinófilos intactos, bem como deposição extracelular de EPX sugestiva de degranulação. Isso pode ser detectado com imuno-histoquímica. Isso seria feito na clínica Mayo com nossos colaboradores atuais que atualmente possuem as amostras codificadas.

Avaliações de segurança e acessibilidade:

Os pacientes serão avaliados em vários pontos para determinar a segurança do Cytosponge em EoE. Os investigadores avaliarão quaisquer sintomas ou eventos assim que a cápsula da esponja for engolida, bem como imediatamente após a remoção da esponja expandida. Os participantes serão contatados 1 e 7 dias após a endoscopia para avaliação de eventos adversos. Para o Objetivo 2, os participantes receberão a pesquisa de aceitabilidade no ponto de acompanhamento de 7 dias, para que os pacientes tenham tempo adequado para refletir sobre suas experiências com ambas as abordagens de coleta de tecidos. Em particular, esta pesquisa registrará a experiência do paciente ao engolir a Cytosponge, se ele faria isso novamente e se prefere a Cytosponge ou a endoscopia para diagnóstico e monitoramento de EEo.