Diagnóstico y seguimiento de la esofagitis eosinofílica mediante la citoesponja

Descripción general del diseño del estudio (todos los objetivos) Este será un estudio de cohorte prospectivo, con la inscripción de pacientes realizada en UNC y Mayo Clinic con análisis de muestra realizado por la Universidad de Cambridge. En el Objetivo 1, se inscribirán pacientes con EoE, se obtendrá tejido tanto de la citoesponja como de la endoscopia, y los métodos se compararán en un único momento para determinar la precisión de la citoesponja para cuantificar los recuentos de eosinófilos esofágicos. Para todos los pacientes, se controlará la seguridad y los sujetos completarán una encuesta sobre la aceptabilidad de Cytosponge (Objetivo 2).

Protocolo de citoesponja:

Después de que se haya explicado el estudio y el paciente dé su consentimiento informado, el personal de investigación capacitado, bajo la supervisión de un médico, administrará la citoesponja antes de la endoscopia. Si los sujetos optan por recibir un anestésico local, se les hará gárgaras con lidocaína al 2 % antes de la administración de la citoesponja. La citoesponja se administrará de acuerdo con sus instrucciones de uso. Después de la recuperación, se corta el hilo y la esponja (que contiene la muestra de tejido) se coloca en un recipiente, se sumerge en fijador y se guarda en un refrigerador a 4 °C. A continuación, el fijador se hace girar en una centrífuga y las células sedimentadas se incluyen en un bloque de parafina utilizando técnicas estándar.

Endoscopia superior y biopsia:

Una vez que se haya extraído la citoesponja, el paciente se someterá a una endoscopia digestiva alta estándar (atención de rutina) y una biopsia, según lo indicado clínicamente. Durante este examen, el personal de investigación registrará todas las características endoscópicas de la EoE, incluidos anillos, surcos, placas blancas, disminución de la vascularización y estenosis. La gravedad de los hallazgos de la endoscopia se medirá utilizando el sistema de puntuación de puntuación de referencia endoscópica (EREFS) recientemente validado. Se tomarán cuatro biopsias esofágicas del esófago distal (5 cm por encima de la unión gastroesofágica) y proximal (15 cm por encima de la unión gastroesofágica). Se ha demostrado que este número de biopsias maximiza la sensibilidad diagnóstica de EoE.

Histología y recuentos de eosinófilos:

Todas las muestras de tejido de la citoesponja y la endoscopia se codificarán con un número de identificación del sujeto, pero de lo contrario se ocultarán todos los datos clínicos, incluida la actividad de EoE, los síntomas, las características del paciente y los tratamientos prescritos. Usando los bloques de parafina, se cortarán portaobjetos de patología y el tejido se procesará con tinción H&E de rutina. A continuación, se digitalizarán los portaobjetos y, mediante Aperio ImageScope (Aperio Technologies, Vista, CA), se determinará la densidad máxima de eosinófilos (eosinófilos/mm2 [eos/mm2]) mediante nuestro protocolo previamente validado. A efectos de comparación con estudios anteriores, la densidad de eosinófilos se convertirá luego en recuentos de eosinófilos (eos/hpf) para un tamaño supuesto de hpf de 0,24 mm2, el tamaño de un campo promedio según se informa en la literatura. Los patólogos del estudio de la UNC y Mayo Clinic revisarán las muestras de sus sitios, y el estudio patológico de Cambridge proporcionará una segunda revisión de todas las muestras para garantizar la cuantificación más precisa posible de los recuentos de eosinófilos.

Además, los investigadores planean realizar tinciones y análisis especiales de las muestras de esponja y biopsia existentes con el objetivo de determinar si se puede mejorar la precisión diagnóstica de esta prueba. En particular, los investigadores examinarán los marcadores de la función, la activación y la inflamación de los eosinófilos, como la peroxidasa de eosinófilos (EPX), una proteína granular que identifica claramente los eosinófilos intactos, así como la deposición extracelular de EPX que sugiere desgranulación. Esto se puede detectar con inmunohistoquímica. Esto se haría en la clínica Mayo con nuestros colaboradores actuales que actualmente tienen los especímenes codificados.

Evaluaciones de seguridad y accesibilidad:

Los pacientes serán evaluados en varios puntos para determinar la seguridad de la citoesponja en la EoE. Los investigadores evaluarán cualquier síntoma o evento tan pronto como se trague la cápsula de la esponja, así como inmediatamente después de retirar la esponja expandida. Se contactará a los participantes 1 y 7 días después de la endoscopia para evaluar los eventos adversos. Para el Objetivo 2, a los participantes se les administrará la encuesta de aceptabilidad en el punto de seguimiento de 7 días, de modo que los pacientes tengan tiempo suficiente para reflexionar sobre sus experiencias con ambos enfoques de recolección de tejidos. En particular, esta encuesta registrará la experiencia del paciente con la deglución de la citoesponja, si lo volvería a hacer y si prefiere la citoesponja o la endoscopia para el diagnóstico y seguimiento de la EoE.