Transmisja małpiego wirusa pienistego na ludzi

TŁO [0002] Duża część, około 75% czynników wirusowych, które pojawiły się ostatnio u ludzi, pochodzi od innych zwierząt. Po pierwszym kontakcie, który doprowadził do transmisji międzygatunkowej, wirusy te często ewoluowały i rozprzestrzeniały się w populacji ludzkiej; zaangażowane są różne mechanizmy, ale zrozumienie początkowych etapów pojawiania się wirusów i związanych z nimi chorób jest w wielu przypadkach nadal ograniczone.

Monitoring mikrobiologiczny w populacjach zagrożonych transmisją jest wymagany w celu identyfikacji i udokumentowania inicjacji i wczesnych stadiów procesu wschodów.

Naczelne inne niż ludzie (NPH), które mają wiele podobieństw genetycznych, fizjologicznych i mikrobiologicznych z ludźmi, są potencjalnym źródłem wielu czynników zakaźnych.

Zostało to wyraźnie wykazane w przypadku kilku małpich retrowirusów: uważa się, że HIV-1 i 2 pochodzą odpowiednio z wirusów szympansów i mangabów w Afryce Środkowej i Zachodniej. Rozmieszczenie różnych podtypów molekularnych onkogennego retrowirusa HTLV-1 w Afryce jest głównie wynikiem wzorca przenoszenia międzygatunkowego STLV-1 z różnych gatunków NHP w odległej przeszłości.

Wirusy pieniste należą do rodziny retrovidae i rodzaju spumavirus. Są to złożone retrowirusy egzogenne i są bardzo powszechne u wielu gatunków zwierząt, w tym naczelnych, kotów, bydła i koni, u których powodują uporczywe infekcje.

Wirusy pieniste są na ogół niepatogenne, nawet u zwierząt zakażonych eksperymentalnie. Wydaje się, że nie powodują choroby u nielicznych ludzi, którzy zostali przypadkowo zarażeni i byli poddawani długoterminowej obserwacji klinicznej i biologicznej (do tej pory obserwowano mniej niż 15 osób i były one pierwotnie zdrowe, tak że istnieje błąd selekcji). Brak patogenności in vivo kontrastuje z silnymi efektami cytopatogennymi wirusów pienistych in vitro, które powodują syncytię w hodowlach komórkowych.

W przeciwieństwie do lentiwirusów (HIV-SIV), wirusy pieniste są niezwykle stabilne genetycznie in vivo. Analiza filogenetyczna wykazała zmienność genetyczną w zależności od zakażonego gatunku zwierzęcia. Wskazuje to na długą koewolucję tych retrowirusów z ich naturalnymi gospodarzami. Switzer i in. wykazali, że wirusy pieniste współewoluowały z naczelnymi starego świata przez co najmniej 30 milionów lat (Switzer i in. 2005). Dane te mogą wyjaśniać widoczny brak patogenności in vivo pomimo przewlekłej infekcji.

Charakterystyka molekularna wirusów pienistych była szeroko badana in vitro, ale obecnie niewiele wiadomo o charakterystyce tych wirusów in vivo, aw szczególności o epidemiologicznych determinantach infekcji. Rzeczywiście, sposoby zanieczyszczenia i charakterystyka pierwotnej infekcji u ludzi w warunkach naturalnych są nadal słabo poznane.

Opublikowane rzadkie dane epidemiologiczne dotyczą głównie populacji naczelnych naczelnych trzymanych w niewoli: seroprewalencja wirusów pienistych może sięgać 75% lub więcej u dorosłych w tych populacjach. Kilka badań wykazało, że ślina zakażonych zwierząt ma wysokie miana wirusa, co sugeruje sposób przenoszenia. Błona śluzowa jamy ustnej i gardła jest ważnym miejscem replikacji u zielonych małp, a niedawny artykuł donosi o wysokim poziomie wirusowego RNA w ślinie i próbkach jamy ustnej i gardła makaków. Obserwacje te sugerują, że ukąszenia lub kontakt z błoną śluzową jamy ustnej i śliną mogą być mechanizmami transmisji, przynajmniej w niektórych przypadkach. Inne badania w koloniach trzymanych w niewoli pawianów sugerują, że przenoszenie może być drogą płciową i/lub z matki na dziecko poprzez powtarzający się kontakt ze śliną.

Zakażenie ludzi wirusami pienistymi zostało zgłoszone: 1 do 4% osób zawodowo narażonych na NHP (takich jak lekarze weterynarii i personel pracujący w zwierzętarniach, ogrodach zoologicznych i laboratoriach primatologicznych) w Ameryce Północnej i rzadziej w Europie może być zakażonych zainfekowany.

Grupa amerykańska wykazała zakażenie wirusami pienistymi, pochodzącymi od goryli i mandryli, u niektórych myśliwych mieszkających w Kamerunie (Wolfe i in. 2004). Niektóre przypadki infekcji wykazano u ludzi w Azji Południowo-Wschodniej, którzy mieli kontakt z małpami (zwłaszcza makakami): osób pracujących w świątyniach, zwłaszcza w Indonezji, lub zaangażowanych w polowania lub inne czynności, które narażają ich na bliski kontakt z małpami. Modele matematyczne oszacowały, że około sześciu na 1000 odwiedzających świątynię na Bali w Indonezji, gdzie występuje wiele makaków, zostało zarażonych małpim wirusem pienistym (Engel i in. 2006).

Długoterminowa współpraca między badaczami, Centrum Pasteura w Kamerunie, IRD i Uniwersytetem w Yaounde I, przy użyciu technik serologicznych i molekularnych (PCR), wykazała wirusy pieniste w dzikich populacjach goryli, szympansów, mandryli i musztardy w Kamerunie. Dorosłe populacje naczelnych w tych regionach są silnie zakażone wirusami pienistymi, z wirusem specyficznym dla każdego gatunku (Calattini i in. 2004, Calattini i in. 2006b).

Zgodnie z cytowanym powyżej badaniem amerykańskim, badacze wykazali infekcję myśliwych wirusami pienistymi występującymi u goryli, szympansów i mandryli po kontakcie z tymi naczelnymi (Calattini i in. 2007).

Jednostka EPVO w Institut Pasteur od ponad 15 lat ściśle współpracuje z Centrum Pasteura w Kamerunie i IRD nad licznymi badaniami epidemiologicznymi w dziedzinie ludzkich retrowirusów HTLV-1 (Mahieux i in. 2000b, Mauclere i in. 1997), HTLV-2 (Gessain i wsp. 1995, Mauclere i wsp. 1995), małpie retrowirusy STLV-1 i STLV-3 (Mahieux i wsp. 2000a, Meertens i wsp. 2002, Meertens i wsp. 2001, Meertens i wsp. 2003, Nerrienet i wsp. 2004, Nerrienet i wsp. 2001) oraz HTLV-3 (Calattini i wsp. 2009, Calattini i wsp. 2006a, Calattini i wsp. 2005).

Badane populacje ludzkie znajdują się głównie w południowym Kamerunie. Badacze będą nadal koncentrować się na kilku populacjach południowego Kamerunu, aby zebrać dalsze informacje na temat czynników ryzyka nabycia retrowirusów pienistych po kontakcie z naczelnymi.

Populacje te żyją w pobliżu lub na obszarach gęstych lasów deszczowych. Są one szczególnie zagrożone ze względu na dużą różnorodność biologiczną naczelnych w tych regionach. Największe ryzyko wiąże się ze stosunkowo częstym kontaktem z naczelnymi podczas polowań, zarówno w celu spożycia, jak i sprzedaży mięsa z buszu.

CELE Przedstawiony projekt składa się z czterech etapów. Te fazy mogą być przeprowadzane jednocześnie.

Cel główny (fazy 1 i 2) Celem pracy jest przeprowadzenie badania serologicznego i molekularnego w celu oceny częstości występowania zakażenia wirusem piankowatym u osób narażonych na kontakt z małpami oraz scharakteryzowanie czynników ryzyka transmisji międzygatunkowej.

Projekt ten odpowiada monitoringowi mikrobiologicznemu, aw szczególności badaniu pierwszych etapów powstawania wirusów.

Cele drugorzędne (fazy 3 i 4)

1. Zbadaj możliwe wewnątrzrodzinne przenoszenie pienistych wirusów z przypadków indeksowych, które wszystkie zaraziły się wirusem przez ugryzienie przez małpę człekokształtną.
2. Zbadaj możliwe nieprawidłowości biologiczne (zwłaszcza immunowirusowe) i kliniczne u zakażonych osób poprzez badanie kliniczno-kontrolne. Będzie to wymagało co najmniej 30 przypadków indeksu i od 30 do 60 kontroli, jeśli to możliwe.

ORGANIZACJA BADANIA Wartość i znaczenie tej pracy nad pojawianiem się wirusów zostaną przedstawione władzom lokalnym zarówno administracyjnym, jak i tradycyjnym (wójtowi). Śledczy będą pracować w trzech regionach południowego Kamerunu: regionie przybrzeżnym (Bipindi/Lolodorf/Campo), bardziej centralnym regionie (Djoum/Oveng/Mintom/Akonolinga/Somolamo) oraz na wschodzie w regionie Abong-Mang, Lomié i Messok.

Na tych zalesionych obszarach badacze pracują w wioskach Bantu (Ngoumba, Fang, Mvae, Zimé itp.) oraz z dwiema różnymi populacjami Pigmejów, Bakolas na zachodzie i Bakas na wschodzie.

Informacje są przekazywane każdej osobie, a pisemna zgoda wszystkich uczestników zbierana jest przez lekarzy.

W fazie 1 projektu badanie jest proponowane wszystkim dorosłym. Nie ma wyboru. Przeprowadza się badanie fizykalne i pobiera krew do probówki 5/10 ml z EDTA.

W fazie 2 badacze będą szukać w szczególności osób dorosłych, które miały kontakt z NHP w ciągu swojego życia. Kontakty te mogą obejmować ugryzienia, zadrapania lub inne urazy podczas polowania lub przypadkowe spotkania z naczelnymi. Przeprowadza się badanie i pobieranie krwi do probówki 5/10 ml z EDTA. Dane epidemiologiczne dotyczące czynników ryzyka zbierane są za pomocą krótkiego kwestionariusza.

W fazie 3 badacze przeprowadzą drugą wizytę, aby rozszerzyć badanie na rodzinę nuklearną zakażonych osób (małżonka i dzieci). Wykonuje się badanie i pobiera krew do probówki 5/10 ml z EDTA (tab. 1).

Podczas fazy 4 zostaną przeprowadzone dodatkowe badania kliniczne i biologiczne zakażonych osób w Centrum Pasteura w Kamerunie w Yaoundé (faza 4). Podczas tej wizyty pobierana jest ślina. Próbki z jamy ustnej zostaną pobrane poprzez potarcie wacikiem wewnętrznej strony policzka, a następnie przepłukanie jamy ustnej i zebranie płynu płuczącego do sterylnej butelki. Zostanie pobrana krew do dalszych badań. Zakwaterowanie w Jaunde, transport i wyżywienie uczestników pokrywa EPVO.

Badanie rodzinne w celu wykrycia możliwej transmisji wirusa oraz kliniczne i biologiczne badanie kliniczno-kontrolne zostaną przeprowadzone w drugiej fazie, jeśli podczas pierwszego badania seroepidemiologicznego i wirusologicznego zostanie wykryta wystarczająca liczba zakażonych osób.

Jednostka EPVO w Institut Pasteur jest w pełni odpowiedzialna za organizację i wykonanie prac terenowych przy wsparciu logistycznym ze strony IRD (wynajem pojazdu z kierowcą) oraz CPC (recepcja w laboratorium wirusologicznym). Prof. Antoine Gessain koordynuje projekt w Paryżu i Kamerunie, a dr Edouard Betsem organizuje pracę w Kamerunie.

Próbki są dzielone na porcje. Dwie porcje osocza i preparat kożuszka krwi obwodowej zamraża się w Centrum Pasteura w Kamerunie. W niektórych przypadkach jednojądrzaste komórki krwi obwodowej zostaną uzyskane na Ficoll, a następnie hodowane.

Próbki te są następnie przesyłane drogą lotniczą do Instytutu Pasteura w Paryżu, zgodnie z obowiązującymi normami transportowymi.

Po powrocie do Paryża testy biologiczne i analizy statystyczne przeprowadzają członkowie jednostki EPVO.