Określanie właściwości anabolicznych mięśni kwasu fosfatydowego. (PA-AGE)

Badacze zrekrutują 16 zdrowych (nieotyłych, nie cierpiących na cukrzycę, niepalących) starszych mężczyzn w wieku 65-80 lat, aby ukończyli równolegle zaprojektowane badanie z podwójnie ślepą próbą, w którym zostaną losowo przydzieleni do grupy otrzymującej kwas fosfatydowy (N = 8; PA) lub grupa leczona placebo (N=8; PL), ściśle dopasowana pod względem cech antropometrycznych. Uczestnicy będą aktywni rekreacyjnie, ale nie będą brali udziału w zorganizowanym treningu fizycznym. Wszystkie procedury badania zostaną jasno wyjaśnione, a przed wzięciem udziału w badaniu uzyskana zostanie pisemna zgoda.

Ocena wstępna Po wyjaśnieniu badania i uzyskaniu świadomej zgody, uczestnicy zgłoszą się do naszego laboratorium o godzinie 8:00 na czczo i po powstrzymaniu się od forsownej aktywności fizycznej przez ponad 24 godziny. Uczestnicy zostaną zważeni na wadze cyfrowej z dokładnością do 0,1 kg w lekkim ubraniu. Zostanie przeprowadzone podwójne badanie absorpcjometrii rentgenowskiej (DXA) w celu określenia składu ciała (masa tłuszczowa i beztłuszczowa). Po skanowaniu DXA zostanie określona maksymalna siła pojedynczego powtórzenia jednej nogi (1RM) dla urządzeń do ćwiczeń prostowania kolan i wyciskania nóg. Wybór kończyny do ćwiczenia (dominującej lub niedominującej) będzie losowy.

Próby eksperymentalne Pomiędzy 4 a 14 dniem po wstępnej ocenie, uczestnicy zgłoszą się do laboratorium około godziny 7:00 po całonocnym poście, powstrzymując się od forsownej aktywności fizycznej przez 72 godziny wcześniej. Cewnik zostanie wprowadzony do żyły przedramienia obu ramion w celu częstego pobierania krwi (w sumie około 80 ml) i ciągłego wlewu znacznika stabilnego izotopu aminokwasu (L-[pierścień] 13C6 fenyloalaniny). Uczestnicy pozostaną w pozycji leżącej przez cały czas trwania próby, z wyjątkiem ćwiczeń. Po 150 minutach infuzji znacznika w stanie stacjonarnym zostanie pobrana biopsja mięśnia obszernego bocznego mięśnia czworogłowego uda w znieczuleniu miejscowym (1% lidokaina) z użyciem igły biopsyjnej Bergström. Następnie uczestnicy wykonują serię ćwiczeń oporowych na jednej nodze na przeciwnej nodze. Ćwiczenie będzie składać się z 6 zestawów ćwiczeń z oporem prostowania kolana przy 75% wcześniej ustalonego 1RM; protokół mający na celu wywołanie 8-12 powtórzeń na serię przed wystąpieniem wolicjonalnego zmęczenia. Bezpośrednio po ćwiczeniach uczestnicy przyjmą 750 mg PA lub placebo (oba w niemożliwej do zidentyfikowania formie kapsułek) z wodą i kolejne 750 mg PA lub placebo 60 minut po zakończeniu ćwiczeń. Następnie uczestnicy będą leżeć w pozycji leżącej przez pozostałą część próby. Osoba bez bezpośredniego udziału w badaniu będzie podawać leczenie w sposób podwójnie ślepy. Po zakończeniu analizy danych badacze zostaną odblokowani w odniesieniu do grup terapeutycznych. W 150 i 300 minucie po spożyciu zabiegu zostaną pobrane biopsje mięśni z obu nóg. Tak więc podczas badania zostanie uzyskanych łącznie 5 inwazyjnych biopsji mięśni, co wyklucza stosowanie projektu krzyżowego u osób starszych. Każda biopsja zostanie uzyskana z oddzielnego nacięcia oddalonego od siebie o około 3 cm. Ten model projektu badania pozwoli nam określić tempo syntezy białek mięśniowych w stanie poabsorpcyjnym oraz w czasie wczesny (0-2,5 h), późny (2,5-5 h) i agregatowy (0-5 h).

Analizy danych Aby obliczyć syntezę białek mięśniowych, badacze zastosują wyrafinowane techniki spektrometrii masowej w celu określenia wzbogacenia izotopowego znacznika w białka mięśniowe i osocze wyizolowane w wyniku biopsji. Domięśniowe „sygnały anaboliczne” (w mechanistycznym celu szlaku rapamycyny, kluczowym regulatorze wielkości komórek) zostaną określone za pomocą Western Blot (technika wykrywania zawartości określonych fosfoprotein). Stężenia insuliny w osoczu będą mierzone za pomocą testu immunologicznego, a profile lipidów w osoczu za pomocą spektrometrii mas metodą chromatografii gazowej.