A foszfatidsav izomanabolikus tulajdonságainak meghatározása. (PA-AGE)

A kutatók 16 egészséges (nem elhízott, nem cukorbeteg, nemdohányzó) idős, 65-80 év közötti férfit vesznek fel egy kettős-vak, párhuzamosan tervezett vizsgálat elvégzésére, amelyben véletlenszerűen beosztják őket egy foszfatidsavba (N). = 8; PA) vagy placebóval (N=8; PL) kezelt csoport, amely szorosan illeszkedik az antropometriai jellemzőkre. A résztvevők szabadidős tevékenységet folytatnak, de nem vesznek részt strukturált edzéseken. Minden vizsgálati eljárást egyértelműen el kell magyarázni, és írásos beleegyezést kell szerezni a vizsgálatban való részvétel előtt.

Előzetes értékelések A vizsgálat magyarázatát és a beleegyezés megszerzését követően a résztvevők 08:00-kor jelentkeznek laboratóriumunkban, egy éjszakán át éhezett állapotban, és több mint 24 órán keresztül tartózkodnak a megerőltető fizikai tevékenységtől. A résztvevőket digitális mérlegen mérik 0,1 kg-os pontossággal, könnyű ruházatban. Kettős röntgenabszorpciós (DXA) vizsgálatot végeznek a testösszetétel (zsír és zsírmentes tömeg) meghatározására. A DXA szkennelést követően egylábú, egy ismétléses maximális erőt (1RM) határoznak meg a térdnyújtó és lábnyomó edzőgépeknél. A gyakorolni kívánt végtag kiválasztása (domináns vagy nem domináns) véletlenszerűen történik.

Kísérleti vizsgálatok Az előzetes értékelések után 4 és 14 nappal a résztvevők egy éjszakai koplalást követően ~07:00-kor jelentkeznek a laboratóriumban, miután korábban 72 órán keresztül tartózkodtak a megerőltető fizikai tevékenységtől. Mindkét kar alkarvénájába katétert helyeznek be a gyakori vérmintavételhez (összesen kb. 80 ml), valamint egy stabil izotóp aminosav nyomjelző (L-[gyűrű] 13C6 fenilalanin) folyamatos infúziójához. A résztvevők hanyatt fekve maradnak a próba alatt, kivéve az edzést. 150 perces steady-state nyomjelző infúzió után izombiopsziát veszünk egy véletlenszerűen kiválasztott láb vastus lateralis quadriceps izomzatából helyi érzéstelenítésben (1% lidokain) a Bergström biopsziás tű technikával. Ezt követően a résztvevők egylábú ellenállási gyakorlatot hajtanak végre az ellenkező lábon. A gyakorlat 6 sorozat térdnyújtási ellenállás gyakorlatból áll az előre meghatározott 1RM 75%-ával; egy protokoll, amelyet úgy terveztek, hogy sorozatonként 8-12 ismétlést váltson ki az akaratlagos fáradtság megjelenése előtt. Közvetlenül az edzés után a résztvevők 750 mg PA-t vagy placebót (mindkettőt nem azonosítható kapszula formájában) vízzel és további 750 mg PA-t vagy placebót vesznek be az edzés után 60 perccel. Ezt követően a résztvevők hanyatt fekszenek a próba hátralévő részében. Az a személy, aki nem vesz részt közvetlenül a vizsgálatban, kettős vak módszerrel adja be a kezeléseket. Az adatelemzés befejeztével a nyomozók nem lesznek elvakítva a kezelési karokkal kapcsolatban. A kezelés után 150 és 300 perccel mindkét lábból izombiopsziát veszünk. Így összesen 5 invazív izombiopsziát vesznek majd a vizsgálat során, ami kizárja a crossover tervezés alkalmazását idősebb egyéneknél. Minden biopsziát egy külön bemetszésből veszünk, amelyek egymástól ~3 cm-re vannak egymástól. Ez a vizsgálati modell lehetővé teszi számunkra, hogy meghatározzuk az izomfehérje szintézis sebességét posztabszorptív állapotban, valamint a korai (0-2,5 óra), késői (2,5-5 óra) és aggregált (0-5 óra) időtávon.

Adatelemzések Az izomfehérje szintézis kiszámításához a kutatók kifinomult tömegspektrometriás technikákat alkalmaznak a biopsziával izolált izomfehérjék és plazma izotópnyomjelző dúsításának meghatározására. Az intramuszkuláris "anabolikus jelek" (a rapamicin útvonal mechanisztikus célpontjában, a sejtméret kulcsfontosságú szabályozójában) Western Blot (specifikus foszfofehérjék tartalmának kimutatására szolgáló technika) segítségével határozhatók meg. A plazma inzulinkoncentrációját immunoassay-vel, a plazma lipidprofiljait pedig gázkromatográfiás tömegspektrometriával mérjük.