Determinazione delle proprietà anaboliche muscolari dell'acido fosfatidico. (PA-AGE)

Gli investigatori recluteranno 16 uomini anziani sani (non obesi, non diabetici, non fumatori) di età compresa tra 65 e 80 anni per completare uno studio in doppio cieco, progettato in parallelo, in cui verranno assegnati in modo casuale a un acido fosfatidico (N = 8; PA) o gruppo di trattamento placebo (N=8; PL), strettamente abbinato per caratteristiche antropometriche. I partecipanti saranno attivi in ​​modo ricreativo, ma non coinvolti in allenamenti strutturati. Tutte le procedure dello studio saranno chiaramente spiegate e il consenso scritto ottenuto prima della partecipazione allo studio.

Valutazioni preliminari Dopo la spiegazione dello studio e l'acquisizione del consenso informato, i partecipanti si riferiranno al nostro laboratorio alle 08:00 in uno stato di digiuno notturno e dopo essersi astenuti da un'attività fisica intensa per> 24 ore. I partecipanti verranno pesati su una bilancia digitale con l'approssimazione di 0,1 kg in indumenti leggeri. Verrà condotta una doppia scansione di assorbimetria a raggi X (DXA) per determinare la composizione corporea (massa grassa e massa magra). Dopo la scansione DXA, verrà determinata la forza massima di una ripetizione (1RM) su una gamba sola per le macchine per esercizi di estensione del ginocchio e leg press. La selezione dell'arto da esercitare (dominante o non dominante) sarà randomizzata.

Prove sperimentali Tra 4 e 14 giorni dopo le valutazioni preliminari, i partecipanti si riferiranno al laboratorio alle 07:00 circa dopo un digiuno notturno, dopo essersi astenuti da un'attività fisica faticosa per 72 ore prima. Un catetere verrà inserito in una vena dell'avambraccio di entrambe le braccia per frequenti prelievi di sangue (~ 80 ml in totale) e un'infusione continua di un tracciante di aminoacidi isotopi stabili (L- [anello] 13C6 fenilalanina). I partecipanti rimarranno in posizione supina per tutta la prova ad eccezione dell'esercizio. Dopo 150 minuti di infusione di tracciante allo stato stazionario, verrà prelevata una biopsia muscolare dal muscolo vasto laterale del quadricipite di una gamba selezionata a caso in anestesia locale (lidocaina all'1%) utilizzando la tecnica dell'ago per biopsia di Bergström. Successivamente, i partecipanti eseguiranno un esercizio di resistenza su una gamba sola sulla gamba opposta. L'esercizio consisterà in 6 serie di esercizi di resistenza all'estensione del ginocchio al 75% dell'1RM predeterminato; un protocollo progettato per suscitare 8-12 ripetizioni per serie prima dell'inizio della fatica volontaria. Immediatamente dopo l'esercizio, i partecipanti ingeriranno 750 mg di PA o un placebo (entrambi in forma di capsule non identificabili) con acqua e altri 750 mg di PA o placebo a 60 minuti dopo l'esercizio. Successivamente, i partecipanti giacciono in posizione supina per il resto del processo. Un individuo senza coinvolgimento diretto nello studio somministrerà i trattamenti in doppio cieco. Gli investigatori saranno aperti ai bracci di trattamento al termine dell'analisi dei dati. A 150 e 300 min dopo il consumo di trattamento verranno prelevate biopsie muscolari da entrambe le gambe. Pertanto, durante lo studio si otterranno un totale di 5 biopsie muscolari invasive, il che preclude l'uso di un disegno crossover negli individui più anziani. Ogni biopsia sarà ottenuta da un'incisione separata distanziata di circa 3 cm l'una dall'altra. Questo modello di disegno dello studio ci consentirà di determinare i tassi di sintesi proteica muscolare nello stato post-assorbimento e nel corso del tempo iniziale (0-2,5 h), tardivo (2,5-5 h) e aggregato (0-5 h).

Analisi dei dati Per calcolare la sintesi proteica muscolare, i ricercatori adotteranno sofisticate tecniche di spettrometria di massa per determinare l'arricchimento del tracciante isotopico nelle proteine ​​muscolari e nel plasma isolati dalla biopsia. I "segnali anabolici" intramuscolari (nel target meccanicistico della via della rapamicina, un regolatore chiave della dimensione cellulare) saranno determinati tramite Western Blot (una tecnica per rilevare il contenuto di specifiche fosfo-proteine). Le concentrazioni plasmatiche di insulina saranno misurate mediante immunodosaggio e profili lipidici plasmatici mediante spettrometria di massa gascromatografica.