Potencjalna rola SI00B i czynnika neurotroficznego pochodzenia mózgowego w przewidywaniu wyników stosowania pulsacyjnej częstotliwości radiowej w leczeniu pacjentów z wypadnięciem dysku lędźwiowego

METODY:

Wszyscy pacjenci zostaną poddani następującym zabiegom:

1) Ocena kliniczna:

1. Szczegółowy wywiad dotyczący: czasu trwania bólu, obecności bólu dyskogennego, bólu korzeniowego, odpowiedzi na leczenie, czy wcześniejszego interwencyjnego leczenia bólu
2. Badanie neurologiczne: badanie ruchowe i czuciowe

3. Ocena nasilenia objawów neurologicznych przed, 2 tygodnie, 1, 3 i 6 miesięcy po zabiegu interwencyjnym przez lekarza, który nie zna stanu pacjenta i rodzaju interwencji.

   Zmodyfikowany wynik Oswestry Back Disability Score (MODI): Składał się z kwestionariusza wskaźnika niesprawności kręgosłupa w odcinku lędźwiowo-krzyżowym dotyczącego intensywności bólu, higieny osobistej, podnoszenia ciężarów, stania, chodzenia, siedzenia, spania, życia towarzyskiego, podróżowania i zatrudnienia/prowadzenia domu. Tak więc łącznie 10 punktów; każdy miał zakres punktacji 0-5. Stąd łączny wynik mieścił się w przedziale 0-50. Wysoki wynik MODI wskazuje na cięższą niepełnosprawność funkcjonalną związaną z bólem.

   Numeryczna Skala Oceny (NRS-11): Jest to skala służąca do oceny natężenia bólu. Wynosiła ona od 0 do 10, gdzie 0 oznacza brak bólu, a 10 oznacza najgorszy ból.

4. Ocena satysfakcji pacjenta z przeprowadzonej interwencji po 2 tygodniach, 1, 3 i 6 miesiącach od zabiegu interwencyjnego przez lekarza, który nie zna stanu pacjenta i rodzaju interwencji.

Krótka ocena satysfakcji pacjenta (SAPS): składa się z siedmiu pozycji oceniających podstawowe domeny satysfakcji pacjenta, które obejmują zadowolenie z leczenia, wyjaśnienie wyników leczenia, opiekę lekarza, udział w podejmowaniu decyzji medycznych, szacunek ze strony lekarza, czas spędzony z lekarzem oraz zadowolenie z opieki szpitalnej/kliniki. Skale odpowiedzi są skalami 5-punktowymi. Wyniki SAPS można interpretować w następujący sposób: od 0 do 10 = bardzo niezadowolony, od 11 do 18 = niezadowolony, od 19 do 26 = zadowolony, od 27 do 28 = bardzo zadowolony.

2) Ocena radiologiczna:

Rezonans magnetyczny (MRI):

U wszystkich pacjentów włączonych do badania zostanie wykonany rezonans magnetyczny kręgosłupa lędźwiowo-krzyżowego.

Stosowane będą następujące protokoły:

1. Obrazy T1-ważone (osiowe, strzałkowe).
2. Obrazy T2-ważone (osiowe, czołowe).
3. Sekwencja odzyskiwania osłabionej inwersji płynów (FLAIR). 3) Impulsowa częstotliwość radiowa (PRF): PRF zwoju korzenia grzbietowego (DRG) zostanie przeprowadzona u wszystkich uczestników tego badania. Zabiegi będą wykonywane na sali operacyjnej pod kontrolą fluoroskopii z zachowaniem norm bezpieczeństwa radiologicznego. Celem będzie zwój korzenia grzbietowego korzeni lędźwiowo-krzyżowych. Pacjenci zostaną ułożeni na brzuchu. Lidokaina 1% zostanie nasączona w miejscu wejścia do skóry. Zostanie użyta igła o częstotliwości radiowej 10 cm, 22 G z zakrzywioną aktywną końcówką 5 mm. Wykonany zostanie radikulogram w celu potwierdzenia właściwego umieszczenia, a DRG zostanie pobudzony w celu potwierdzenia odpowiedniego zajętego korzenia nerwowego. Odległość igły od DRG zostanie określona przez odpowiednią stymulację czuciową o częstotliwości 50 Hz (0,4-0,6 V), a stymulacja ruchowa o częstotliwości 2 Hz zostanie wykorzystana do określenia progu 1,5-2,0 razy większa niż próg czucia, aby uniknąć umieszczenia w pobliżu przedniego korzenia nerwu. Pulsująca zmiana zostanie wygenerowana przez przyłożenie 45 V do DRG przez 6 minut w temperaturze 42°C.

4) Ocena laboratorium

A. Ocena poziomu neurotroficznego czynnika pochodzenia mózgowego (BDNF) w surowicy:

Próbki krwi żylnej zostaną pobrane od wszystkich włączonych pacjentów przed zabiegiem interwencyjnym i przechowywane przez 30 minut w celu uzyskania skrzepu, a następnie odwirowane przy 2000-3000 obr./min przez 20 minut. Następnie surowica zostanie oddzielona i przechowywana w temperaturze poniżej -80 C. Poziomy BDNF będą oceniane przy użyciu komercyjnych zestawów kanapkowych ELISA. Płytka Microelisastripplate zostanie wstępnie pokryta przeciwciałem swoistym dla BDNF. Próbki zostaną dodane do odpowiednich studzienek płytki Microelisastrip i połączone ze specyficznym przeciwciałem. Następnie do każdej studzienki „Microelisastripplate” dodaje się przeciwciało skoniugowane z peroksydazą chrzanową (HRP) swoiste dla BDNF i inkubuje. Wolne składniki zostaną wypłukane. Roztwór substratu TMB zostanie dodany do każdego dołka. Tylko te studzienki, które zawierają przeciwciała BDNF skoniugowane z BDNF i HRP, pojawią się na niebiesko, a następnie zmienią kolor na żółty po dodaniu roztworu zatrzymującego. Gęstość optyczna (OD) będzie mierzona spektrofotometrycznie przy długości fali 450 nm.

B. Ocena poziomu S100B w surowicy:

Wszyscy uczestnicy zostaną poddani ilościowej ocenie surowicy S100B przed zabiegiem interwencyjnym, stosując technikę kanapkowego testu immunoenzymatycznego (ELISA). Testy zostaną przeprowadzone na oddziale patologii klinicznej i chemicznej szpitala uniwersyteckiego Beni-suef na zautomatyzowanej platformie ELISA. Od wszystkich włączonych pacjentów zostanie pobranych pięć ml pełnej krwi i umieszczonych w sterylnej zwykłej probówce. Próbki krwi będą wirowane przez dwadzieścia minut z prędkością 2000-3000 obrotów na minutę. Surowica supernatantu zostanie zebrana i przechowywana w temperaturze -20°C do czasu analizy. Standard S100B będzie dostarczany jako 120 mikrolitrów zawierających 4000 ng/l S100B rozcieńczonych standardowymi rozcieńczalnikami w celu uzyskania zakresu rozcieńczenia od 0 do 2000 ng/l. Do studzienek zostanie dodanych 50 μl standardu, będą one inkubowane przez godzinę w temperaturze pokojowej. Studzienki przemywa się trzykrotnie roztworem płuczącym (sól fizjologiczna buforowana fosforanami, pH od 7,0 do 7,2). Do każdej studzienki zostanie dodane 100 µl koniugatu. Każda studzienka zostanie ponownie przemyta roztworem płuczącym pięć razy. Pięćdziesiąt µl substratu A (koniugat S100B z peroksydazą chrzanową (HRP)) zostanie dodane do każdego dołka, następnie zostanie dodane 50 µl substratu B (substrat dla enzymu HRP zawierający niewielką ilość 3,3,5,5-tetrametylobenzydyny), a następnie do dołków zostaną przykryte i pozostawione w temperaturze pokojowej na dziesięć minut. Na koniec do każdej studzienki zostanie dodane pięćdziesiąt µl roztworu zatrzymującego reakcję (kwas siarkowy). Gęstość optyczna zostanie odczytana przy 450 nm. Krzywa wzorcowa zostanie skonstruowana przy użyciu oprogramowania statystycznego.