Płynna biopsja i rak trzustki: Wykrywanie AXL(+) CTC (CTC-AXL-PANC) (CTC-AXL-PANC)

W nowotworach litych, po powstaniu i wzroście guza pierwotnego, niektóre bardziej agresywne komórki nowotworowe aktywnie odłączają się od niego, a następnie przemieszczają się przez przedział krążący, docierając do odległych narządów (szpik kostny – wątroba – płuco – mózg…) i tworząc nowe ogniska lub mikroprzerzuty. Te krążące komórki nowotworowe (CTC), które stały się rozsianymi komórkami nowotworowymi (DTC), rozwijają się w nowych środowiskach i mogą pozostawać w stanie uśpienia przez wiele lat po całkowitej resekcji guza pierwotnego. Ze względu na nie do końca wyjaśnione zdarzenia, DTC mogą rozwijać się na miejscu, dając makroskopowe przerzuty, ale także ponownie dołączać do kompartmentu krążącego w postaci CTC, roić się, kolonizować inne narządy i powodować wtórne przerzuty.

Wykrywanie CTC we krwi jest bardzo istotne dla oceny progresji nowotworu, ale także obiecujące pod względem rokowania choroby nowotworowej i obserwacji terapeutycznej. To nowe podejście, opublikowane po raz pierwszy w 2010 roku pod nazwą biopsja płynna, jest zatem definiowane jako nieinwazyjne badanie krwi, niezwykle czułe, osiągalne w czasie rzeczywistym i umożliwiające analizę CTC.

Obecnie wybór terapii celowanych dla danego pacjenta dokonywany jest po analizie guza pierwotnego pod kątem ekspresji i/lub statusu genomowego określonych celów molekularnych.

Wiele badań pokazuje, że komórki przerzutowe mają cechy fenotypowe i genotypowe odmienne od cech większości guza pierwotnego. Można to wytłumaczyć albo tym, że komórki przerzutowe nabywają z czasem nowe umiejętności genomiczne, albo dlatego, że podzbiór subklonów przerzutowych istnieje wcześniej w guzie pierwotnym, ale uniknął wykrycia za pomocą standardowych technik biopsji tkanek.

Bezpośrednia analiza CTC może dostarczyć ważnych dodatkowych informacji, aby zapobiec niewłaściwym, kosztownym terapiom i szkodliwym skutkom ubocznym u pacjentów.

Od kilku lat białko AXL, receptor kinazy tyrozynowej, stało się nowym celem strategicznym w onkologii. Nadekspresję AXL często stwierdzano u pacjentów z gruczolakorakiem trzustki. AXL jest członkiem rodziny Tyro3-Axl-Mer, podobnie jak jego białko ligandowe Gas-6 (specyficzne dla zatrzymania wzrostu). Aktywacja szlaku sygnałowego Gas6/AXL skutkuje aktywacją kilku szlaków efektorowych, takich jak RAS/RAF/MEK/ERK lub PI3K/AKT i jest związana między innymi ze wzrostem i przeżyciem komórek nowotworowych, powstawaniem i rozsiewem przerzutów, Przejście nabłonkowo-mezenchymalne (EMT) lub lekooporność. Klinicznie wykazano, że białko AXL jest czynnikiem złego rokowania i oporności na leczenie referencyjne (radioterapię, chemioterapię czy terapię celowaną). W związku z tym zaproponowano i opracowano wiele strategii terapeutycznych mających na celu hamowanie szlaku AXL, począwszy od cząsteczek chemicznych, blokujących jego aktywność kinazy, a zatem leżące u jego podstaw szlaki sygnałowe, po aptamery nukleotydowe, białka fuzyjne AXL i przeciwciała monoklonalne.

Gruczolakorak trzustki, czwarty pod względem liczby zgonów związanych z nowotworami, pozostaje jednym z nowotworów o bardzo złym rokowaniu i tym samym stanowi duże wyzwanie terapeutyczne. Mediana przeżycia całkowitego po leczeniu optymalnym (FOLFIRINOX) wynosi 11,1 miesiąca. Znaczenie kliniczne i potencjał onkogenny AXL w progresji różnych typów nowotworów zostały w dużej mierze udowodnione. Rzeczywiście, 50% do 75% próbek gruczolakoraka trzustki ma nadekspresję AXL, a poziom ekspresji AXL jest skorelowany z parametrami klinicznymi wskazującymi na agresywność nowotworu i złe rokowanie, takie jak częstość odległych przerzutów lub przeżycie.

W tym kontekście laboratorium LCCRH, które od 20 lat specjalizuje się w wykrywaniu i analizie CTC, opracowało test wykrywający CTC-AXL z wykorzystaniem systemu CellSearch®. System CellSearch® jest jedyną metodą zatwierdzoną przez Food and Drug Administration (FDA) do wykrywania CTC w raku jelita grubego, piersi i przerzutowym raku prostaty. Ponadto LCCRH posiada patent na inną technologię wykrywania i charakteryzowania żywych i funkcjonalnych CTC, zwaną EPIDROP. Wdrożenie badań AXL zostało już przeprowadzone dla znakowania AXL na CTC w EPIDROP, jak również wizualizacji rozszczepienia AXL przez żywe CTC.

Dzięki temu unikalnemu testowi funkcjonalnemu CTC łatwo sobie wyobrazić oferowanie pacjentom „onkogramu” onkologicznego poprzez testowanie w czasie rzeczywistym skuteczności leków na CTC i medycyny spersonalizowanej.

Ta propozycja płynnej biopsji w czasie rzeczywistym funkcjonalnych CTC jest dość innowacyjna w onkologii.

Do tej pory nie ma badań nad badaniem funkcjonalnych CTC związanych z AXL.

Podstawowy cel:

- Ocena zgodności pomiaru CTC-AXL (włącznie) za pomocą innowacyjnej techniki EPIDROP i techniki CellSearch®

Cele drugorzędne:

• Oceń dokładność pomiaru CTC-AXL (włącznie) pomiędzy EPIDROP i CellSearch®
• Oceń stopień zgodności między pomiarem CTC-AXL (włącznie) przez EPIDROP i CellSearch®
• Ocena całkowitego przeżycia pacjentów z rakiem trzustki z przerzutami na podstawie liczby krążących komórek nowotworowych niosących marker AXL mierzonych za pomocą EPIDROP lub CellSearch® w chwili włączenia
• Oceń przeżycie wolne od progresji u pacjentów z przerzutowym rakiem trzustki na podstawie liczby krążących komórek nowotworowych niosących marker AXL mierzonych za pomocą EPIDROP lub CellSearch® w chwili włączenia
• Hodowla CTC z próbki krwi (EDTA 10mL)

• Stworzenie jednego biobanku płynnej biopsji raka trzustki obejmującego jedynie przechowywanie osocza

  • Zbadanie ekspresji PD-L1 (przy włączeniu) i wykrycie podgrupy CTC wykazującej ekspresję PD-L1 przy użyciu technik EPIDROP i CellSearch®;
  • Zbadanie krążącego układu odpornościowego w tej kohorcie pacjentów z rakiem trzustki z przerzutami poprzez wykonanie analizy immunologicznej na komórkach jednojądrzastych krwi;
  • określić, czy istnieje istotna korelacja między wykryciem CTC i CTC-PD-L1 a krążącym układem odpornościowym (limfocyty T, komórki NK, limfocyty B, makrofagi, punkty kontrolne układu odpornościowego, płytki krwi);
  • Ocena korelacji między CTC, CTC-PD-L1 i komórkami odpornościowymi a wynikami klinicznymi (przeżycie wolne od progresji, przeżycie całkowite) tych pacjentów z przerzutowym rakiem trzustki.