Tekutá biopsie a rakovina pankreatu: Detekce AXL(+) CTC (CTC-AXL-PANC) (CTC-AXL-PANC)

U solidních nádorů se po vzniku a růstu primárního nádoru z něj některé agresivnější nádorové buňky aktivně oddělují a poté putují cirkulujícím kompartmentem, aby dosáhly vzdálených orgánů (kostní dřeň - játra - plíce - mozek…) a vytvořily nová ložiska resp. mikrometastázy. Tyto cirkulující nádorové buňky (CTC), které se staly diseminovanými nádorovými buňkami (DTC), vzkvétají ve svém novém prostředí a mohou zůstat nečinné po mnoho let po kompletní resekci primárního nádoru. Kvůli událostem, které nejsou plně objasněny, se DTC mohou vyvinout na místě, což vede ke vzniku makroskopických metastáz, ale také se znovu připojit k cirkulujícímu kompartmentu ve formě CTC, rojit se, kolonizovat další orgány a způsobit sekundární metastázy.

Detekce CTC v krvi je velmi důležitá pro hodnocení progrese nádoru, ale také slibná z hlediska prognózy nádorového onemocnění a terapeutického sledování. Tento nový přístup, který byl poprvé publikován v roce 2010 pod pojmem tekutá biopsie, je proto definován jako neinvazivní krevní test, extrémně citlivý, dosažitelný v reálném čase a umožňující analýzu CTC.

V současné době se výběr cílených terapií pro daného pacienta provádí po analýze primárního nádoru na expresi a/nebo genomický stav specifických molekulárních cílů.

Mnoho studií ukazuje, že metastatické buňky mají fenotypové a genotypové charakteristiky odlišné od charakteristik většiny primárních nádorů. To lze vysvětlit buď tím, že metastatické buňky v průběhu času získávají nové genomické dovednosti, nebo protože v primárním nádoru již existuje podskupina metastatických subklonů, ale unikla detekci standardními technikami tkáňové biopsie.

Přímá analýza CTC by mohla poskytnout důležité dodatečné informace, které by pacientům zabránily v nevhodné, nákladné léčbě a škodlivým vedlejším účinkům.

Po několik let se protein AXL, tyrosinkinázový receptor, ukázal jako nový strategický cíl v onkologii. Nadměrná exprese AXL byla často identifikována u pacientů s adenokarcinomem pankreatu. AXL je členem rodiny Tyro3-Axl-Mer, stejně jako jeho ligandový protein Gas-6 (specifický pro zástavu růstu). Aktivace signální dráhy Gas6/AXL vede k aktivaci několika efektorových drah, jako je RAS/RAF/MEK/ERK nebo PI3K/AKT a je spojena mimo jiné s růstem a přežíváním nádorových buněk, tvorbou a šířením metastáz, Epiteliální-mezenchymální přechod (EMT) nebo rezistence na léky. Klinicky bylo prokázáno, že protein AXL je faktorem špatné prognózy a rezistence vůči referenční léčbě (radioterapie, chemoterapie nebo cílená léčba). Bylo tedy navrženo a vyvinuto mnoho terapeutických strategií pro inhibici dráhy AXL, počínaje chemickými molekulami, blokujícími její kinázovou aktivitu a tedy základní signální dráhy, až po nukleotidové aptamery, fúzní proteiny AXL a monoklonální protilátky.

Pankreatický adenokarcinom, čtvrtý v pořadí úmrtí souvisejících s rakovinou, zůstává mezi rakovinami s velmi špatnou prognózou, a proto představuje hlavní terapeutickou výzvu. Medián celkového přežití je 11,1 měsíce po optimální léčbě (FOLFIRINOX). Klinický význam a onkogenní potenciál AXL v progresi různých typů nádorů byly z velké části prokázány. 50 % až 75 % vzorků adenokarcinomu pankreatu má nadměrnou expresi AXL a úroveň exprese AXL koreluje s klinickými parametry indikujícími agresivitu nádoru a špatnou prognózu, jako je frekvence vzdálených metastáz nebo přežití.

V této souvislosti laboratoř LCCRH, která se již 20 let specializuje na detekci a analýzu CTC, vyvinula detekční test CTC-AXL pomocí systému CellSearch®. Systém CellSearch® je jedinou metodou schválenou Food and Drug Administration (FDA) pro detekci CTC u kolorektálního karcinomu, karcinomu prsu a metastatického karcinomu prostaty. Kromě toho je LCCRH držitelem patentu na další technologii pro detekci a charakterizaci živých a funkčních CTC, nazvanou EPIDROP. Implementace výzkumu AXL je již provedena pro značení AXL na CTC v EPIDROPU a také vizualizaci štěpení AXL pomocí živého CTC.

Díky tomuto jedinečnému funkčnímu testu CTC si lze snadno představit nabízení onkologického „onkogramu“ testováním účinnosti léků na CTC a personalizované medicíny pacientům v reálném čase.

Tento návrh tekuté biopsie v reálném čase na funkčních CTC je v onkologii zcela inovativní.

Dosud neexistují žádné studie o studiu funkčních CTC souvisejících s AXL.

Primární cíl:

- Vyhodnoťte shodu měření CTC-AXL (včetně) inovativní technikou EPIDROP a technikou CellSearch®

Sekundární cíle:

• Vyhodnoťte přesnost měření CTC-AXL (včetně) mezi EPIDROP a CellSearch®
• Posuďte míru shody mezi měřením CTC-AXL (včetně) pomocí EPIDROP a CellSearch®
• Vyhodnoťte celkové přežití pacientů s metastatickým karcinomem pankreatu na základě počtu cirkulujících nádorových buněk nesoucích marker AXL měřeného pomocí EPIDROP nebo CellSearch® při zařazení
• Vyhodnoťte přežití bez progrese pacientů s metastatickým karcinomem pankreatu na základě počtu cirkulujících nádorových buněk nesoucích marker AXL měřeného pomocí EPIDROP nebo CellSearch® při zařazení
• Kultivace CTC ze vzorku krve (EDTA 10 ml)

• Vytvoření jediné biobanky tekuté biopsie pro rakovinu slinivky zahrnující pouze skladování plazmy

  • Studujte expresi PD-L1 (při zařazení) a detekujte CTC podskupinu exprimující PD-L1 pomocí technik EPIDROP a CellSearch®;
  • Studujte cirkulující imunitní systém v této kohortě pacientů s metastatickým karcinomem pankreatu provedením imunologické analýzy krevních mononukleárních buněk;
  • Určete, zda existuje významná korelace mezi detekcí CTC a CTC-PD-L1 a cirkulujícím imunitním systémem (T buňky, NK buňky, B buňky, makrofágy, imunitní kontrolní body, krevní destičky);
  • Posoudit korelaci mezi CTC, CTC-PD-L1 a imunitními buňkami a klinickými výsledky (přežití bez progrese, celkové přežití) těchto pacientů s metastatickým karcinomem pankreatu.