Wpływ LiveSpo Navax w postaci aerozolu do nosa w leczeniu wirusa grypy u dzieci

Wirus grypy typu A i B jest powszechnym wirusem wywołującym ostre infekcje dróg oddechowych (ARTI) z wysokim ryzykiem zapalenia oskrzelików u małych dzieci i niemowląt. Objawy zakażenia grypą wahają się od łagodnej gorączki, kaszlu, kataru i świszczącego oddechu do ciężkich objawów, takich jak przyspieszony puls, przyspieszony oddech i niewydolność oddechowa. W systematycznym przeglądzie i metaanalizie globalnego obciążenia sezonowymi infekcjami dróg oddechowych u małych dzieci oszacowali, że 28 000 - 111 500 dzieci w wieku poniżej 5 lat zmarło w wyniku infekcji grypowych w 2008 r., z czego 99% tych zgonów wystąpił w krajach rozwijających się. Szczepienie przeciw grypie wymaga corocznych zastrzyków, co utrudnia skuteczne uodpornienie małych dzieci. Co więcej, przeciwwirusowe leki nukleotydowe, w tym Tamiflu (oseltamiwir), są niebezpieczne dla małych dzieci i są zalecane tylko pacjentom wysokiego ryzyka. W ostatnich latach probiotyki okazały się obiecującymi bezpiecznymi kandydatami do wspomagającego leczenia ARTI i zmniejszenia uzależnienia od antybiotyków. Jednak stosowanie doustnych probiotyków jako żywności funkcjonalnej jest skuteczne tylko w przypadku łagodnych objawów i nie ma zastosowania w przypadku ostrych zakażeń dróg oddechowych (ARTI). Tutaj badacze sugerują, że bezpośrednie rozpylanie probiotyków do nosa może być szybkim i skutecznym leczeniem objawowym ARTI.

Celem było zbadanie objawowego działania leczniczego produktu probiotycznego LiveSpo Navax, w postaci płynnej zawiesiny zawierającej spory Bacillus bezpiecznych szczepów B. subtilis ANA4 i B. clausii ANA39, u dzieci z ostrymi chorobami układu oddechowego wywołanymi wirusem grypy, ocena badaczy poprawy skuteczności i skrócenia czasu leczenia preparatem LiveSpo Navax u dzieci zakażonych grypą; oraz pomiar zmian miana wirusa grypy, stężeń bakterii współzakaźnych i głównych wskaźników cytokin w próbkach z jamy nosowo-gardłowej przed i po 2 dniach przy użyciu LiveSpo Navax.

Metody: Przeprowadzono randomizowane, ślepe i kontrolowane badanie kliniczne. Rodzice pacjentki są zobowiązani do podania następujących informacji o swoich dzieciach: imię i nazwisko, płeć, wiek, historia położnicza, historia szczepień, historia stosowania antybiotyków… Po uzyskaniu świadomej zgody 70 pacjentów z ARTI wywołanymi wirusem grypy zostanie losowo przydzielonych do 2 grup (n = 35/grupa): grupa kontrolna (zwana grupą „kontrolną”) używa soli fizjologicznej 0,9% NaCl, a grupa eksperymentalna (nazywana grupą „Navax”) stosuje probiotyki LiveSpo Navax. Pacjent otrzymuje zakodowany spray w postaci ślepej próbki, aby zapewnić obiektywność badania. Obserwacja kliniczna potrwa 5 dni, próbki z jamy nosowo-gardłowej zostaną pobrane w dniu 0 i dniu 2 w celu oceny potencjalnego zmniejszenia miana wirusa i bakterii koinfekcji, a także modulacji uwalniania nadmiernie reagujących cytokin i obecności przetrwalników probiotycznych w błona śluzowa nosa pacjenta.

PCR w czasie rzeczywistym do wykrywania mikroorganizmów w próbkach nosogardzieli: półilościowe testy do pomiaru zmian miana wirusa grypy i stężeń bakterii koinfekcji są przeprowadzane zgodnie z rutynowym protokołem RT-PCR/PCR w czasie rzeczywistym, który został znormalizowany zgodnie z normą ISO 15189 : kryteria 2012 i stosowane w Wietnamskim Narodowym Szpitalu Dziecięcym. Wykrywanie B. subtilis ANA4 i B. clausii ANA39 jest również przeprowadzane za pomocą PCR w czasie rzeczywistym SYBR Green, który został znormalizowany zgodnie z normą ISO 17025: 2017 i rutynowo w Key Laboratory of Enzyme and Protein Technology VNU University of Science.

Testy ELISA dla poziomów cytokin: poziomy cytokin prozapalnych (pg/ml), w tym interleukiny (IL-6, IL-8) i TNF-alfa, oznacza się ilościowo przy użyciu zestawu do testu immunoenzymatycznego (ELISA) zgodnie z instrukcjami producenta.

Podczas leczenia pacjenci są codziennie monitorowani pod kątem typowych objawów klinicznych infekcji dróg oddechowych wywołanych grypą, w tym kataru, gorączki, suchych i wilgotnych rzężeń, temperatury ciała (oC), oksymetrii (SpO2) (%), tętna (uderzeń/min) ) i oddech (uderzenia/min) aż do rozładowania. Stan zdrowia pacjentów jest obserwowany przez lekarzy i pielęgniarki, a ich informacje są wprowadzane do dokumentacji medycznej. Podczas tego badania pacjenci rodziców są proszeni o powstrzymanie się od spożywania przez ich dzieci innych probiotyków, zarówno w postaci aerozolu do nosa, jak i podawania doustnego, oraz powstrzymania się od czyszczenia nosa ich dzieci za pomocą innych rozpylaczy soli fizjologicznej 0,9% NaCl.

Zbieranie danych i analiza statystyczna: gromadzona jest indywidualna dokumentacja medyczna, a następnie gromadzone są informacje o pacjencie i systematyzowane w zbiorze danych. Skuteczność preparatu LiveSpo Navax ocenia się i porównuje z solą fizjologiczną o stężeniu 0,9% NaCl na podstawie następujących kryteriów klinicznych i subklinicznych uzyskanych w grupie Navax i grupie kontrolnej: (i) dzień ustąpienia objawów; (ii) poziomy redukcji (2^△Ct) miana wirusa grypy i stężeń bakterii powodujących koinfekcję. △Ct dla genów docelowych oblicza się jako Ct (cykl progowy) w dniu 2 – Ct w dniu 0, podczas gdy Ct kontroli wewnętrznej jest dostosowywane tak, aby było równe dla wszystkich próbek; (iii) poziomy redukcji cytokin IL-6, IL-8 i TNF-alfa. Analizę tabelaryczną przeprowadza się na zmiennych dychotomicznych za pomocą testu χ2 lub dokładnego testu Fishera, gdy wartość oczekiwana dowolnej komórki jest mniejsza niż pięć. Zmienne ciągłe są porównywane przy użyciu testu Wilcoxona, testu t lub testu Manna-Whitneya, gdy dane nie mają rozkładu normalnego. Korelacje między zmiennymi ocenia się za pomocą analizy korelacji Spearmana. Analizy statystyczne i graficzne przeprowadzono na oprogramowaniu GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, USA). Poziom istotności wszystkich analiz ustalono na p < 0,05. Wartości P.

Oczekiwane wyniki: (i) LiveSpo Navax łagodzi objawy infekcji grypowej o około 30% skuteczniej, na co wskazuje 90% pacjentów stosujących LiveSpo Navax (grupa Navax) nie ma objawów w 2-5 dniu interwencji w zależności od objawów, w porównaniu z 60% pacjentów w grupie kontrolnej; (ii) Pacjenci z grupy Navax mają bardziej znaczące zmniejszenie miana wirusa grypy (>10-krotnie) niż pacjenci z grupy kontrolnej w 2. dniu interwencji.