Účinky nosního spreje LiveSpo Navax při léčbě viru chřipky u dětí

Virus chřipky typu A a B je běžný virus, který způsobuje akutní infekce dýchacích cest (ARTI) s vysokým rizikem bronchiolitidy u malých dětí a kojenců. Příznaky chřipkové infekce se pohybují od mírné horečky, kašle, rýmy a sípání až po závažné příznaky, jako je zrychlený puls, zrychlené dýchání a respirační selhání. V systematickém přehledu a metaanalýze globální zátěže sezónních chřipkových respiračních infekcí u malých dětí odhadli, že v roce 2008 umírá v důsledku chřipkových infekcí 28 000 - 111 500 dětí mladších 5 let, z nichž 99 % z těchto úmrtí došlo v rozvojových zemích. Očkování proti chřipce vyžaduje každoroční injekce, což malým dětem znesnadnilo účinnou imunizaci. Navíc antivirová nukleotidová léčiva včetně Tamiflu (oseltamivir) nejsou bezpečná pro malé děti a doporučují se pouze pro vysoce rizikové pacienty. Probiotika se v posledních letech ukázala jako slibní bezpeční kandidáti pro podpůrnou léčbu ARTI a snížení závislosti na antibiotikách. Nicméně použití perorálně podávaných probiotik jako funkčních potravin je účinné pouze u mírných příznaků a není použitelné pro akutní RTI (ARTI). Zde výzkumníci navrhují, že přímé stříkání probiotik do nosu může být rychlou a účinnou symptomatickou léčbou ARTI.

Cílem bylo prozkoumat symptomatické léčebné účinky probiotického produktu LiveSpo Navax, jako tekuté suspenzní formy obsahující spory Bacillus bezpečných kmenů B. subtilis ANA4 a B. clausii ANA39, u dětí s akutním respiračním onemocněním způsobeným virem chřipky, hodnocení výzkumníků zlepšení účinnosti a zkrácení doby léčby LiveSpo Navax u dětí infikovaných chřipkou; a měření změn virové nálože chřipky, koncentrací koinfekčních bakterií a hlavních indikátorů cytokinů ve vzorcích z nosohltanu před a po 2 dnech pomocí LiveSpo Navax.

Metody: Provádí se randomizovaná, slepá a kontrolovaná klinická studie. Rodiče pacienta jsou povinni poskytnout následující informace o svých dětech: celé jméno, pohlaví, věk, porodní anamnézu, historii očkování a historii užívání antibiotik… Po informovaném souhlasu bude 70 pacientů s ARTI kvůli viru chřipky randomizováno do 2 skupin (n = 35/skupina): kontrolní skupina (nazvaná "Kontrolní" skupina) používá 0,9% NaCl fyziologický roztok a experimentální skupina (pojmenovaná skupina "Navax") používá probiotika LiveSpo Navax. Pacientovi je podán kódovaný sprej ve formě slepého vzorku, aby byla zajištěna objektivita studie. Klinické sledování bude 5 dní, vzorky z nosohltanu budou odebírány v den 0 a den 2, aby se vyhodnotilo potenciální snížení virové zátěže a koinfekce bakterií, stejně jako modulace nadměrného uvolňování cytokinů a přítomnost probiotických spor v nosní sliznice pacienta.

PCR v reálném čase pro detekci mikroorganismů ve vzorcích nosohltanu: semikvantitativní testy pro měření změn virové nálože chřipky a koncentrací koinfekce bakterií se provádějí pomocí rutinního protokolu RT-PCR/PCR v reálném čase, který byl standardizován podle ISO 15189 :2012 kritéria a používá se ve Vietnamské národní dětské nemocnici. Detekce B. subtilis ANA4 a B. clausii ANA39 se také provádí pomocí PCR v reálném čase SYBR Green, která byla standardizována podle normy ISO 17025: 2017 a rutinně v Key Laboratory of Enzyme and Protein Technology, VNU University of Science.

Testy ELISA na hladiny cytokinů: hladiny prozánětlivých cytokinů (pg/ml) včetně interleukinu (IL-6, IL-8) a TNF-alfa se kvantifikují pomocí soupravy pro imunosorbentní test s enzymatickým spojením (ELISA) podle pokynů výrobce.

Během léčby jsou pacienti denně sledováni kvůli typickým klinickým příznakům infekcí dýchacích cest vyvolaných chřipkou, včetně rýmy, horečky, suchého chroptění, vlhkého chroptění, tělesné teploty (oC), oxymetrie (SpO2) (%), pulzu (údery/min. ) a dech (údery/min) až do vybití. Zdravotní stav pacientů sledují lékaři a sestry a jejich údaje jsou vyplněny do zdravotnické dokumentace. Během této studie jsou pacienti rodičů požádáni, aby se zdrželi konzumace jiných probiotik pro své děti, ať už prostřednictvím nosního spreje nebo perorálního podávání, a aby svým dětem nečistili nos jinými spreji s fyziologickým roztokem 0,9% NaCl.

Sběr dat a statistická analýza: shromažďují se jednotlivé lékařské záznamy a poté se shromažďují a systematizují informace o pacientovi do souboru dat. Účinnost LiveSpo Navax se hodnotí a porovnává s 0,9% fyziologickým roztokem NaCl na základě následujících klinických a subklinických kritérií získaných ve skupinách Navax a kontrolních skupinách: (i) den zmírňující příznaky; (ii) úrovně snížení (2^△Ct) virové nálože chřipky a koncentrací koinfekčních bakterií. △Ct pro cílové geny se vypočítá jako Ct (prahový cyklus) v den 2 - Ct v den 0, zatímco Ct vnitřní kontroly je upraveno tak, aby bylo stejné pro všechny vzorky; (iii) úrovně snížení IL-6, IL-8 a TNF-alfa cytokinů. Tabulková analýza se provádí na dichotomických proměnných pomocí χ2 testu nebo Fisherova exaktního testu, když je očekávaná hodnota kterékoli buňky nižší než pět. Spojité proměnné se porovnávají buď pomocí Wilcoxonova testu, t-testu nebo Mann-Whitneyho testu, pokud data nejsou normálně distribuována. Korelace mezi proměnnými jsou hodnoceny Spearmanovou korelační analýzou. Statistické a grafické analýzy se provádějí na softwaru GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, USA). Hladina významnosti všech analýz je nastavena na p < 0,05. P-hodnoty.

Očekávané výsledky: (i) LiveSpo Navax zmírňuje symptomy chřipkové infekce asi o 30 % účinněji, jak uvádí 90 % pacientů používajících LiveSpo Navax (skupina Navax) bez symptomů v den 2-5 v závislosti na symptomech, ve srovnání s 60 % pacientů v kontrolní skupině; (ii) Pacienti ve skupině Navax mají významnější snížení virové nálože chřipky (>10krát) než pacienti v kontrolní skupině v den 2 intervence.