Efeitos do spray nasal LiveSpo Navax no tratamento do vírus da gripe em crianças

Os vírus influenza tipos A e B são os vírus comuns que causam Infecções Agudas do Trato Respiratório (ARTIs) com alto risco de bronquiolite em crianças pequenas e bebês. Os sintomas da infecção por influenza variam de febre leve, tosse, corrimento nasal e respiração ofegante a sintomas graves, como pulso acelerado, respiração rápida e insuficiência respiratória. Em uma revisão sistemática e meta-análise da carga global de infecções respiratórias por influenza sazonal em crianças pequenas, eles estimaram que 28.000 - 111.500 crianças menores de 5 anos morreram como resultado de infecções por influenza em 2008, das quais 99% dessas mortes ocorreu em países em desenvolvimento. A vacinação contra a gripe requer injeções anuais, o que torna difícil para as crianças serem imunizadas de forma eficaz. Além disso, drogas antivirais de nucleotídeos, incluindo Tamiflu (oseltamivir), não são seguras para crianças pequenas e são recomendadas apenas para pacientes de alto risco. Os probióticos surgiram como candidatos seguros promissores para o tratamento de suporte de ARTIs e redução da dependência de antibióticos nos últimos anos. No entanto, o uso de probióticos de administração oral como alimentos funcionais é eficaz apenas para sintomas leves e não aplicável para ITRs agudas (ARTIs). Aqui, os investigadores propõem que a pulverização direta de probióticos no nariz pode ser um tratamento sintomático rápido e eficaz para ARTIs.

O objetivo foi investigar os efeitos do tratamento sintomático do produto probiótico LiveSpo Navax, como uma forma de suspensão líquida contendo esporos de Bacillus das cepas seguras de B. subtilis ANA4 e B. clausii ANA39, em crianças com doenças respiratórias agudas causadas pelo vírus influenza, avaliação dos investigadores de maior eficácia e redução do tempo de tratamento de LiveSpo Navax em crianças infectadas por influenza; e medição de mudanças na carga viral da influenza, concentrações bacterianas co-infecciosas e principais indicadores de citocinas nas amostras nasofaríngeas antes e depois de 2 dias usando LiveSpo Navax.

Métodos: É realizado um ensaio clínico randomizado, cego e controlado. Os pais do paciente são obrigados a fornecer as seguintes informações sobre seus filhos: nome completo, sexo, idade, histórico obstétrico, histórico de vacinação e histórico de uso de antibióticos... Após consentimento informado, 70 pacientes com ARTIs devido ao vírus influenza serão randomizados em 2 grupos (n = 35/grupo): o grupo controle (denominado grupo "Controle") utiliza solução salina fisiológica NaCl 0,9% e um grupo experimental (denominado grupo "Navax") utiliza os probióticos LiveSpo Navax. O paciente recebe um spray codificado na forma de uma amostra cega para garantir a objetividade do estudo. O acompanhamento clínico será de 5 dias, amostras de nasofaringe serão coletadas no dia 0 e no dia 2 para avaliar possíveis reduções na carga viral e bactérias da co-infecção, bem como modulação da liberação exagerada de citocinas e presença de esporos probióticos no mucosa nasal do paciente.

PCR em tempo real para detecção de microrganismo em amostras nasofaríngeas: ensaios semiquantitativos para medir alterações na carga viral da influenza e concentrações bacterianas de co-infecção são conduzidos pelo protocolo de rotina RT-PCR/PCR em tempo real, padronizado pela ISO 15189 :critérios de 2012 e usados ​​no Vietnam National Children's Hospital. A detecção de B. subtilis ANA4 e B. clausii ANA39 também é realizada por PCR em tempo real SYBR Green que foi padronizado sob o padrão ISO 17025: 2017 e rotineiramente no Laboratório Chave de Tecnologia de Enzimas e Proteínas, VNU University of Science.

Ensaios ELISA para níveis de citocinas: os níveis de citocinas pró-inflamatórias (pg/mL) incluindo interleucina (IL-6, IL-8) e TNF-alfa são quantificados usando um kit de ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA) de acordo com as instruções do fabricante.

Durante o tratamento, os pacientes são monitorados diariamente quanto a sintomas clínicos típicos de infecções do trato respiratório induzidas pela gripe, incluindo coriza, febre, estertores secos, estertores úmidos, temperatura corporal (oC), oximetria (SpO2) (%), pulso (batidas/min ) e respiração (batidas/min) até a alta. As condições de saúde dos pacientes são observadas por médicos e enfermeiras, e suas informações são registradas em prontuários. Durante este estudo, os pacientes dos pais são solicitados a abster-se de consumir outros probióticos para seus filhos, seja por spray nasal ou administração oral, e de limpar o nariz de seus filhos com outros borrifadores de solução salina fisiológica de NaCl a 0,9%.

Coleta de dados e análise estatística: são coletados os prontuários individuais e as informações do paciente são reunidas e sistematizadas em um banco de dados. A eficácia de LiveSpo Navax é avaliada e comparada com solução salina fisiológica de NaCl a 0,9% com base nos seguintes critérios clínicos e subclínicos obtidos nos grupos Navax e Controle: (i) o dia de alívio sintomático; (ii) os níveis de redução (2^△Ct) da carga viral da influenza e as concentrações de bactérias da co-infecção. △Ct para genes-alvo é calculado como Ct (ciclo limiar) no dia 2 - Ct no dia 0 enquanto o Ct do controle interno é ajustado para ser igual entre todas as amostras; (iii) os níveis de redução das citocinas IL-6, IL-8 e TNF-alfa. A análise tabular é realizada em variáveis ​​dicotômicas usando o teste χ2 ou o teste exato de Fisher quando o valor esperado de qualquer célula é inferior a cinco. As variáveis ​​contínuas são comparadas usando o teste de Wilcoxon, teste t ou o teste de Mann-Whitney quando os dados não são normalmente distribuídos. As correlações entre as variáveis ​​são avaliadas pela análise de correlação de Spearman. As análises estatísticas e gráficas são realizadas no software GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, EUA). O nível de significância de todas as análises é definido em p < 0,05. Valores P.

Resultados esperados: (i) LiveSpo Navax alivia os sintomas de infecção por influenza com cerca de 30% mais eficácia, conforme indicado por 90% dos pacientes que usam LiveSpo Navax (grupo Navax) sem sintomas no dia 2-5 da intervenção, dependendo dos sintomas, em comparação com 60% dos pacientes do grupo Controle; (ii) Os pacientes do grupo Navax apresentam reduções mais significativas na carga viral da influenza (>10 vezes) do que os pacientes do grupo Controle no dia 2 da intervenção.