鼻喷LiveSpo Navax治疗小儿流感病毒的疗效观察

A 型和 B 型流感病毒是引起急性呼吸道感染 (ARTI) 的常见病毒，幼儿和婴儿患毛细支气管炎的风险很高。 流感感染的症状范围从轻度发烧、咳嗽、流鼻涕和喘息到严重的症状，例如脉搏加快、呼吸急促和呼吸衰竭。 在对幼儿季节性流感呼吸道感染的全球负担进行的系统回顾和荟萃分析中，他们估计 2008 年有 28,000 - 111,500 名 5 岁以下儿童死于流感感染，其中 99% 的死亡人数发生在发展中国家。 流感疫苗需要每年注射一次，这使得幼儿难以获得有效免疫。 此外，包括达菲（奥司他韦）在内的抗病毒核苷酸药物对幼儿不安全，仅建议高危患者使用。 近年来，益生菌已成为支持治疗 ARTI 和减少抗生素依赖的有前途的安全候选物。 然而，使用口服益生菌作为功能性食品仅对轻度症状有效，不适用于急性 RTIs (ARTIs)。 在这里，研究人员提出，将益生菌直接喷入鼻子可以成为 ARTI 的一种快速有效的对症治疗方法。

研究人员评估，目的是研究益生菌产品 LiveSpo Navax 的对症治疗效果，LiveSpo Navax 是一种含有安全枯草芽孢杆菌 ANA4 和克劳氏芽孢杆菌 ANA39 菌株芽孢杆菌孢子的液体悬浮液，对患有流感病毒引起的急性呼吸道疾病的儿童的症状治疗效果LiveSpo Navax 对流感感染儿童的疗效提高和治疗时间缩短；使用 LiveSpo Navax 测量 2 天前后鼻咽样本中流感病毒载量、共感染细菌浓度和主要细胞因子指标的变化。

方法：进行随机、盲法和对照临床试验。 要求患者父母提供以下子女信息：全名、性别、年龄、产史、疫苗接种史、抗生素使用史……经知情同意后，70名因流感病毒感染ARTIs的患者将随机分为2组(n = 35/组)：对照组（命名为“Control”组）使用 0.9% NaCl 生理盐水，实验组（命名为“Navax”组）使用益生菌 LiveSpo Navax。 以盲样的形式向患者提供编码喷雾，以确保研究的客观性。 临床随访将持续 5 天，将在第 0 天和第 2 天收集鼻咽样本，以评估病毒载量和合并感染细菌的潜在减少，以及过度反应细胞因子释放的调节和益生菌孢子在鼻腔中的存在。患者的鼻粘膜。

用于检测鼻咽样本中微生物的实时 PCR：用于测量流感病毒载量和合并感染细菌浓度变化的半定量测定是通过实时 RT-PCR/PCR 常规方案进行的，该方案已根据 ISO 15189 进行了标准化:2012标准并在越南国家儿童医院使用。 B. subtilis ANA4 和 B. clausii ANA39 的检测也是通过实时 PCR SYBR Green 进行的，该 PCR SYBR Green 已根据 ISO 17025：2017 标准进行标准化，并在 VNU 科学大学酶与蛋白质技术重点实验室常规进行。

细胞因子水平的 ELISA 测定：根据制造商的说明，使用酶联免疫吸附测定试剂盒 (ELISA) 量化促炎细胞因子水平 (pg/mL)，包括白介素（IL-6、IL-8）和 TNF-α。

在治疗期间，每天监测患者流感引起的呼吸道感染的典型临床症状，包括流鼻涕、发烧、干罗音、湿罗音、体温 (oC)、血氧饱和度 (SpO2) (%)、脉搏 (次/分钟), 呼吸 (次/分钟) 直到出院。 病人的健康状况由医生和护士观察，并将他们的信息填写到病历中。 在这项研究中，父母的患者被要求停止为他们的孩子使用其他益生菌，无论是通过喷鼻剂还是口服给药，并且避免使用其他 0.9% NaCl 生理盐水喷雾器为他们的孩子清洁鼻子。

数据收集和统计分析：收集个人医疗记录，然后收集患者的信息并在数据集中系统化。 根据在 Navax 和对照组中获得的以下临床和亚临床标准，评估 LiveSpo Navax 的功效并与 0.9% NaCl 生理盐水进行比较：(i) 症状缓解日； (ii) 流感病毒载量和合并感染细菌浓度的降低水平(2^△Ct)。 △目标基因的Ct计算为第2天的Ct（阈值循环）-第0天的Ct，同时将内部对照的Ct调整为所有样本之间相等； (iii) IL-6、IL-8 和 TNF-α 细胞因子的降低水平。 当任何单元格的预期值低于 5 时，使用 χ2 检验或 Fisher 精确检验对二分变量进行表格分析。 当数据不是正态分布时，使用 Wilcoxon 检验、t 检验或 Mann-Whitney 检验比较连续变量。 变量之间的相关性通过 Spearman 的相关性分析进行评估。 在 GraphPad Prism v8.4.3 软件（GraphPad Software，CA，USA）上进行统计和图形分析。 所有分析的显着性水平设置为 p < 0.05。 P值。

预期结果：(i) LiveSpo Navax 减轻流感感染症状的效率提高了约 30%，正如 90% 使用 LiveSpo Navax 的患者（Navax 组）在干预的第 2-5 天没有症状所表明的那样，这取决于症状，与对照组60%的患者； (ii) 在干预的第 2 天，Navax 组患者的流感病毒载量降低（>10 倍）比对照组患者更显着。