Efectos de la pulverización nasal LiveSpo Navax en el tratamiento del virus de la influenza en niños

El virus de la influenza tipo A y B es el virus común que causa infecciones agudas de las vías respiratorias (ARTI, por sus siglas en inglés) con un alto riesgo de bronquiolitis en niños pequeños y bebés. Los síntomas de la infección por influenza varían desde fiebre leve, tos, secreción nasal y sibilancias hasta síntomas graves como pulso acelerado, respiración acelerada e insuficiencia respiratoria. En una revisión sistemática y un metanálisis de la carga global de infecciones respiratorias de influenza estacional en niños pequeños, estimaron que entre 28 000 y 111 500 niños menores de 5 años murieron como resultado de infecciones de influenza en 2008, de los cuales el 99 % de estas muertes ocurrió en los países en desarrollo. La vacunación contra la influenza requiere inyecciones anuales, lo que dificulta que los niños pequeños se inmunicen de manera efectiva. Además, los medicamentos antivirales con nucleótidos, incluido Tamiflu (oseltamivir), no son seguros para los niños pequeños y se recomiendan solo para pacientes de alto riesgo. Los probióticos han surgido como candidatos seguros y prometedores para el tratamiento de apoyo de las ARTI y la reducción de la dependencia de los antibióticos en los últimos años. Sin embargo, el uso de probióticos administrados por vía oral como alimentos funcionales es efectivo solo para los síntomas leves y no aplicable para las ITR agudas (IRA). Aquí, los investigadores proponen que la pulverización directa de probióticos en la nariz puede ser un tratamiento sintomático rápido y eficaz para las ARTI.

El objetivo fue investigar los efectos del tratamiento sintomático del producto probiótico LiveSpo Navax, en forma de suspensión líquida que contiene esporas de Bacillus de cepas seguras B. subtilis ANA4 y B. clausii ANA39, en niños con enfermedades respiratorias agudas causadas por el virus de la influenza, evaluación de los investigadores. de eficacia mejorada y tiempo de tratamiento reducido de LiveSpo Navax en niños infectados con influenza; y la medición de los cambios en la carga viral de influenza, las concentraciones de bacterias co-infecciosas y los principales indicadores de citoquinas en las muestras nasofaríngeas antes y después de 2 días usando LiveSpo Navax.

Métodos: Se realiza un ensayo clínico aleatorizado, ciego y controlado. Los padres del paciente deben proporcionar la siguiente información sobre sus hijos: nombre completo, sexo, edad, historial obstétrico, historial de vacunación e historial de uso de antibióticos... Después del consentimiento informado, 70 pacientes con ARTI debido al virus de la influenza se distribuirán aleatoriamente en 2 grupos. (n = 35/grupo): el grupo de control (denominado grupo "Control") utiliza solución salina fisiológica NaCl al 0,9 % y un grupo experimental (denominado grupo "Navax") utiliza los probióticos LiveSpo Navax. El paciente recibe un spray codificado en forma de muestra ciega para garantizar la objetividad del estudio. El seguimiento clínico será de 5 días, se recogerán muestras nasofaríngeas el día 0 y el día 2 para evaluar posibles reducciones de la carga viral y bacterias de coinfección, así como la modulación de la liberación de citocinas sobrerreaccionadas y la presencia de esporas probióticas en el mucosa nasal del paciente.

PCR en tiempo real para la detección de microorganismos en muestras nasofaríngeas: los ensayos semicuantitativos para medir los cambios en la carga viral de influenza y las concentraciones bacterianas de coinfección se realizan mediante el protocolo de rutina RT-PCR/PCR en tiempo real que se ha estandarizado según la norma ISO 15189 : Criterios de 2012 y utilizado en el Hospital Nacional de Niños de Vietnam. La detección de B. subtilis ANA4 y B. clausii ANA39 también se realiza mediante PCR en tiempo real SYBR Green que se ha estandarizado según la norma ISO 17025: 2017 y de forma rutinaria en el Laboratorio clave de tecnología de enzimas y proteínas de la Universidad de Ciencias VNU.

Ensayos ELISA para los niveles de citocinas: los niveles de citocinas proinflamatorias (pg/mL), incluida la interleucina (IL-6, IL-8) y TNF-alfa, se cuantifican utilizando un kit de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Durante el tratamiento, los pacientes son monitoreados diariamente para detectar los síntomas clínicos típicos de las infecciones del tracto respiratorio inducidas por la influenza, que incluyen secreción nasal, fiebre, estertores secos, estertores húmedos, temperatura corporal (oC), oximetría (SpO2) (%), pulso (latidos/min). ), y la respiración (latidos/min) hasta que se descarga. Las condiciones de salud de los pacientes son observadas por médicos y enfermeras, y sus datos se ingresan en los registros médicos. Durante este estudio, se pide a los padres de los pacientes que se abstengan de consumir otros probióticos para sus hijos, ya sea mediante aerosol nasal u administración oral, y que se abstengan de limpiar la nariz de sus hijos con otros rociadores de solución salina fisiológica con NaCl al 0,9 %.

Recopilación de datos y análisis estadístico: se recopilan las historias clínicas individuales y luego se recopila la información del paciente y se sistematiza en un conjunto de datos. La eficacia de LiveSpo Navax se evalúa y compara con la solución salina fisiológica de NaCl al 0,9 % en función de los siguientes criterios clínicos y subclínicos obtenidos en los grupos Navax y Control: (i) el día de alivio de los síntomas; (ii) los niveles de reducción (2^△Ct) de la carga viral de influenza y las concentraciones de bacterias de coinfección. △Ct para los genes diana se calcula como Ct (ciclo de umbral) en el día 2 - Ct en el día 0 mientras que el Ct del control interno se ajusta para que sea igual entre todas las muestras; (iii) los niveles de reducción de las citocinas IL-6, IL-8 y TNF-alfa. El análisis tabular se realiza sobre variables dicotómicas utilizando la prueba de χ2 o la prueba exacta de Fisher cuando el valor esperado de cualquier celda es inferior a cinco. Las variables continuas se comparan mediante la prueba de Wilcoxon, la prueba t o la prueba de Mann-Whitney cuando los datos no tienen una distribución normal. Las correlaciones entre las variables se evalúan mediante el análisis de correlación de Spearman. Los análisis estadísticos y gráficos se realizan en el software GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, EE. UU.). El nivel de significación de todos los análisis se establece en p < 0,05. valores de p.

Resultados esperados: (i) LiveSpo Navax alivia los síntomas de la infección gripal con un 30 % más de eficacia, según lo indicado por el 90 % de los pacientes que utilizan LiveSpo Navax (grupo Navax) no presentan síntomas en los días 2 a 5 de la intervención según los síntomas, en comparación con 60% de los pacientes en el grupo Control; (ii) Los pacientes del grupo Navax tienen reducciones más significativas en la carga viral de influenza (>10 veces) que los pacientes del grupo Control en el día 2 de la intervención.