Effetti della spruzzatura nasale LiveSpo Navax nel trattamento del virus dell'influenza nei bambini

Il virus dell'influenza di tipo A e B è il virus comune che causa infezioni acute del tratto respiratorio (ARTI) con un alto rischio di bronchiolite per bambini piccoli e neonati. I sintomi dell'infezione influenzale vanno da febbre lieve, tosse, naso che cola e respiro sibilante a sintomi gravi come polso veloce, respiro veloce e insufficienza respiratoria. In una revisione sistematica e meta-analisi del carico globale delle infezioni respiratorie dell'influenza stagionale nei bambini piccoli, hanno stimato che 28.000 - 111.500 bambini sotto i 5 anni muoiono a causa di infezioni influenzali nel 2008, di cui il 99% di questi decessi avvenuto nei paesi in via di sviluppo. La vaccinazione antinfluenzale richiede iniezioni annuali, il che ha reso difficile per i bambini piccoli essere immunizzati in modo efficace. Inoltre, i farmaci nucleotidici antivirali incluso il Tamiflu (oseltamivir) non sono sicuri per i bambini piccoli e sono raccomandati solo per i pazienti ad alto rischio. Negli ultimi anni i probiotici sono emersi come promettenti candidati sicuri per il trattamento di supporto delle ARTI e per la riduzione della dipendenza da antibiotici. Tuttavia, l'uso di probiotici somministrati per via orale come alimenti funzionali è efficace solo per i sintomi lievi e non applicabile per le RTI acute (ARTI). Qui, i ricercatori propongono che l'irrorazione diretta di probiotici nel naso possa essere un trattamento sintomatico rapido ed efficace per le ARTI.

L'obiettivo era quello di studiare gli effetti del trattamento sintomatico del prodotto probiotico LiveSpo Navax, come forma di sospensione liquida contenente spore di Bacillus di ceppi sicuri di B. subtilis ANA4 e B. clausii ANA39, nei bambini con malattie respiratorie acute causate dal virus dell'influenza, valutazione dei ricercatori di una migliore efficacia e di tempi di trattamento ridotti di LiveSpo Navax nei bambini con infezione da influenza; e misurazione dei cambiamenti nella carica virale dell'influenza, nelle concentrazioni batteriche co-infettive e nei principali indicatori di citochine nei campioni nasofaringei prima e dopo 2 giorni utilizzando LiveSpo Navax.

Metodi: viene condotto uno studio clinico randomizzato, cieco e controllato. I genitori del paziente sono tenuti a fornire le seguenti informazioni sui loro figli: nome completo, sesso, età, anamnesi ostetrica, anamnesi di vaccinazione e anamnesi di uso di antibiotici... Dopo il consenso informato, 70 pazienti con ARTI a causa del virus dell'influenza saranno randomizzati in 2 gruppi (n = 35/gruppo): il gruppo di controllo (denominato gruppo "Controllo") utilizza soluzione fisiologica NaCl allo 0,9% e un gruppo sperimentale (denominato gruppo "Navax") utilizza i probiotici LiveSpo Navax. Al paziente viene somministrato uno spray codificato sotto forma di campione cieco per garantire l'obiettività dello studio. Il follow-up clinico sarà di 5 giorni, i campioni nasofaringei saranno raccolti al giorno 0 e al giorno 2 per valutare le potenziali riduzioni della carica virale e dei batteri di co-infezione, nonché la modulazione del rilascio di citochine con reazione eccessiva e la presenza di spore probiotiche nel mucosa nasale del paziente.

PCR in tempo reale per il rilevamento di microrganismi in campioni rinofaringei: i test semiquantitativi per la misurazione delle variazioni della carica virale dell'influenza e delle concentrazioni batteriche di coinfezione sono condotti mediante il protocollo di routine RT-PCR/PCR in tempo reale che è stato standardizzato secondo ISO 15189 : criteri del 2012 e utilizzati nel Vietnam National Children's Hospital. Il rilevamento di B. subtilis ANA4 e B. clausii ANA39 è condotto anche mediante PCR in tempo reale SYBR Green che è stato standardizzato secondo lo standard ISO 17025: 2017 e regolarmente nel Key Laboratory of Enzyme and Protein Technology, VNU University of Science.

Saggi ELISA per i livelli di citochine: i livelli di citochine pro-infiammatorie (pg/mL) inclusa l'interleuchina (IL-6, IL-8) e il TNF-alfa sono quantificati utilizzando un kit di analisi dell'immunosorbente legato all'enzima (ELISA) secondo le istruzioni del produttore.

Durante il trattamento, i pazienti vengono monitorati quotidianamente per i sintomi clinici tipici delle infezioni del tratto respiratorio indotte dall'influenza, tra cui naso che cola, febbre, rantoli secchi, rantoli umidi, temperatura corporea (oC), ossimetria (SpO2) (%), polso (battiti/min ), e respiro (battiti/min) fino alla dimissione. Le condizioni di salute dei pazienti vengono osservate da medici e infermieri e le loro informazioni vengono inserite nelle cartelle cliniche. Durante questo studio, ai genitori dei pazienti viene chiesto di astenersi dal consumo per i propri figli di altri probiotici, sia tramite spray nasale che somministrazione orale, e di astenersi dal pulire il naso dei propri figli con altri nebulizzatori di soluzione fisiologica NaCl allo 0,9%.

Raccolta dati e analisi statistica: vengono raccolte le cartelle cliniche individuali e le informazioni del paziente vengono quindi raccolte e sistematizzate in un set di dati. L'efficacia di LiveSpo Navax viene valutata e confrontata con una soluzione fisiologica NaCl allo 0,9% sulla base dei seguenti criteri clinici e subclinici ottenuti nei gruppi Navax e di controllo: (i) il giorno di sollievo dai sintomi; (ii) i livelli di riduzione (2^△Ct) della carica virale dell'influenza e delle concentrazioni di batteri di co-infezione. △Ct per i geni bersaglio è calcolato come Ct (ciclo di soglia) al giorno 2 - Ct al giorno 0 mentre il Ct del controllo interno è aggiustato per essere uguale tra tutti i campioni; (iii) i livelli di riduzione delle citochine IL-6, IL-8 e TNF-alfa. L'analisi tabulare viene eseguita su variabili dicotomiche utilizzando il test χ2 o il test esatto di Fisher quando il valore atteso di qualsiasi cella è inferiore a cinque. Le variabili continue vengono confrontate utilizzando il test di Wilcoxon, il test t o il test di Mann-Whitney quando i dati non sono distribuiti normalmente. Le correlazioni tra le variabili sono valutate dall'analisi di correlazione di Spearman. Le analisi statistiche e grafiche vengono eseguite sul software GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, USA). Il livello di significatività di tutte le analisi è fissato a p <0,05. Valori P.

Risultati attesi: (i) LiveSpo Navax allevia i sintomi dell'infezione influenzale in modo più efficace di circa il 30%, come indicato dal 90% dei pazienti che utilizzano LiveSpo Navax (gruppo Navax) sono asintomatici al giorno 2-5 dell'intervento a seconda dei sintomi, rispetto a 60% dei pazienti nel gruppo di controllo; (ii) I pazienti nel gruppo Navax hanno riduzioni più significative della carica virale dell'influenza (> 10 volte) rispetto ai pazienti nel gruppo di controllo al giorno 2 dell'intervento.