Kliniczne i mechanistyczne badanie poprzecznego transportu kości piszczelowej w złożonych owrzodzeniach stóp
20 stycznia 2023 zaktualizowane przez: Samuel KK Ling, Chinese University of Hong Kong
TTT to nowatorska technika chirurgiczna, która może potencjalnie rozwiązać długotrwały deficyt poszukiwania skutecznego leczenia owrzodzeń stopy cukrzycowej, zmniejszając potrzebę amputacji i łagodząc skutki społeczno-ekonomiczne, jakie niesie ze sobą. Ta próba będzie pierwszym na świecie prospektywnym RCT w celu zweryfikowania obiecujących badań klinicznych dotyczących korzyści klinicznych TTT w leczeniu owrzodzeń stopy cukrzycowej. Ponadto próbki krwi z tego badania pozwolą nam zbadać różne czynniki rozpuszczalne w krążeniu ogólnoustrojowym w odniesieniu do neowaskularyzacji, immunomodulacji i mobilizacji komórek macierzystych. Pobierając krew i różne punkty czasowe, lepiej zrozumiemy złożoną zależność między różnymi biomarkerami. Ten GRF pozwoli nam uzyskać próbki tkanek do analizy histologicznych zmian komórkowych po operacji TTT. Zapewni nam to lepszy wgląd w to, jak działa TTT, a także potencjalnie pomoże nam wskazać ważne zmiany i ramy czasowe związane z tą interwencją.
PI, Co-Is i współpracownicy tworzą silny zespół klinicystów i naukowców z solidnymi osiągnięciami klinicznymi i naukami podstawowymi. Zespół opublikował wytyczne i techniki chirurgiczne w TTT i przeprowadził kilka warsztatów szkoleniowych dotyczących zwłok, ucząc technik chirurgicznych TTT miejscowych chirurgów ortopedów. Zespół opracował również szczurzy model TTT i opublikował informacje na temat immunomodulacji TTT i neowaskularyzacji, jako dodatek do innych trwających eksperymentów mechanistycznych na zwierzętach.
Ta prospektywna, wieloośrodkowa, randomizowana, kontrolowana próba może stanowić podstawę do rozpoczęcia opłacalnej operacji TTT w celu regulacji neowaskularyzacji, neurogenezy, immunomodulacji i mobilizacji MSC w leczeniu różnych chorób przewlekłych. Medycyna regeneracyjna to branża warta wiele milionów dolarów, a potencjalne zastosowanie TTT może zaowocować szeregiem zastosowań klinicznych, nie ograniczających się do ZSC.
Przegląd badań
Status
Jeszcze nie rekrutacja
Warunki
Interwencja / Leczenie
Typ studiów
Interwencyjne
Zapisy (Oczekiwany)
54
Faza
- Nie dotyczy
Kryteria uczestnictwa
Badacze szukają osób, które pasują do określonego opisu, zwanego kryteriami kwalifikacyjnymi. Niektóre przykłady tych kryteriów to ogólny stan zdrowia danej osoby lub wcześniejsze leczenie.
Kryteria kwalifikacji
Wiek uprawniający do nauki
18 lat i starsze (Dorosły, Starszy dorosły)
Akceptuje zdrowych ochotników
Nie
Płeć kwalifikująca się do nauki
Wszystko
Opis
Kryteria przyjęcia:
- Dorośli >18 lat
- Pacjenci z owrzodzeniem stopy 4. stopnia wg Wagnera (częściowa zgorzel stopy)
- Brak czynnej infekcji rany potwierdzonej przez obrazowanie fluorescencji bakteryjnej. (podręczne urządzenie Moleculight i:X, Smith and Nephew oświetla fioletowym światłem o długości fali 405 nm, które powoduje, że bakterie emitują charakterystyczne endogenne sygnały fluorescencyjne, które są wizualizowane w czasie rzeczywistym na ekranie urządzenia, umożliwiając obiektywny pomiar odpowiedniego oczyszczenia chirurgicznego)
- cukrzyca potwierdzona biochemicznie z glikemią na czczo ≥ 7,0 mmol/l lub przypadkowym glikemią ≥ 11,1 mmol/l lub stężeniem hemoglobiny A1c (HbA1c) ≥ 6,5%
- Wybrany przez chirurga naczyniowego do angioplastyki/pomostowania naczyniowego
- Wyciągnięty z rekonstrukcyjnej operacji płata przez chirurga mikronaczyniowego
Kryteria wyłączenia:
- Niekontrolowana sepsa
- Przeciwwskazania do zastosowania zewnętrznego stabilizatora w kości piszczelowej (warunki skóry pokrywającej, sprzęt chirurgiczny taki jak gwoździe piszczelowe, całkowita proteza kolana itp.)
- Ciężkie choroby współistniejące wykluczające bezpieczne znieczulenie (niedawny zawał mięśnia sercowego, ograniczona czynność płuc itp.)
- Niepełnosprawność umysłowa lub fizyczna, która może upośledzać zdolność przestrzegania planu interwencji, np. ciężka demencja, psychoza itp.
- Niedawny zabieg rewaskularyzacji (<12 tygodni)
- Niedawne leczenie/interwencja wpływająca na proliferację komórek (np. chemioterapia, radioterapia itp.), radioterapia itp.)
Plan studiów
Ta sekcja zawiera szczegółowe informacje na temat planu badania, w tym sposób zaprojektowania badania i jego pomiary.
Jak projektuje się badanie?
Szczegóły projektu
- Główny cel: Leczenie
- Przydział: Randomizowane
- Model interwencyjny: Przydział równoległy
- Maskowanie: Brak (otwarta etykieta)
Broń i interwencje
Grupa uczestników / Arm |
Interwencja / Leczenie |
|---|---|
|
Inny: Grupa kontrolna
Leczenie konwencjonalne: opatrunek + terapia podciśnieniowa
|
Opatrunek + Terapia ran podciśnieniowych
|
|
Eksperymentalny: Grupa TT
Opatrunek + Terapia ran podciśnieniowych + Transport poprzeczny kości piszczelowej
|
Poprzeczny transport piszczelowy to nowatorska adaptacja koncepcji stosowanych w histogenezie dystrakcyjnej.
Najczęstszym zastosowaniem tej zasady chirurgicznej jest chirurgia wydłużania kości, która jest dobrze znaną procedurą chirurgiczną polegającą na zastosowaniu zewnętrznego stabilizatora do kości, utworzeniu kortykotomii i stopniowym wydłużaniu kości w optymalnym tempie 0,5 mm/12 godzin.
Biologiczne mechanizmy dystrakcyjnej histogenezy obejmują aktywację szlaków sygnałowych, takich jak cytokiny Interleukina 1 i Interleukina 6, markery prozapalne TNF alfa, proosteogenny TGF-beta, BMP oraz czynniki proangiogenne VEGF i angiopoetyna.
TTT wykorzystuje koncepcję histiogenezy dystrakcji, ale dystrakcja jest wykonywana w płaszczyźnie poprzecznej zamiast dystrakcji podłużnej.
Ponadto okres rozproszenia jest połączony z odpowiednim okresem ucisku i ostatecznie nie powoduje żadnej zmiany netto długości kończyny.
|
Co mierzy badanie?
Podstawowe miary wyniku
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Rozmiar rany
Ramy czasowe: 0 miesiąc
|
Rozmiar rany zostanie zmierzony za pomocą fotografii cyfrowej ze znormalizowanymi kropkami znacznikowymi.
|
0 miesiąc
|
|
Rozmiar rany
Ramy czasowe: 1 miesiąc
|
Rozmiar rany zostanie zmierzony za pomocą fotografii cyfrowej ze znormalizowanymi kropkami znacznikowymi.
|
1 miesiąc
|
|
Rozmiar rany
Ramy czasowe: 3 miesiące
|
Rozmiar rany zostanie zmierzony za pomocą fotografii cyfrowej ze znormalizowanymi kropkami znacznikowymi.
|
3 miesiące
|
|
Rozmiar rany
Ramy czasowe: 6 miesiąc
|
Rozmiar rany zostanie zmierzony za pomocą fotografii cyfrowej ze znormalizowanymi kropkami znacznikowymi.
|
6 miesiąc
|
|
Rozmiar rany
Ramy czasowe: 12 miesięcy
|
Rozmiar rany zostanie zmierzony za pomocą fotografii cyfrowej ze znormalizowanymi kropkami znacznikowymi.
|
12 miesięcy
|
Miary wyników drugorzędnych
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Funkcja stopy
Ramy czasowe: 0 miesiąc
|
Funkcjonalność stopy zostanie obiektywnie zmierzona przy użyciu naszego zatwierdzonego chińskiego wyniku oceny stóp i kostek lub oryginalnej wersji angielskiej.
|
0 miesiąc
|
|
Funkcja stopy
Ramy czasowe: 1 miesiąc
|
Funkcjonalność stopy zostanie obiektywnie zmierzona przy użyciu naszego zatwierdzonego chińskiego wyniku oceny stóp i kostek lub oryginalnej wersji angielskiej.
|
1 miesiąc
|
|
Funkcja stopy
Ramy czasowe: 3 miesiące
|
Funkcjonalność stopy zostanie obiektywnie zmierzona przy użyciu naszego zatwierdzonego chińskiego wyniku oceny stóp i kostek lub oryginalnej wersji angielskiej.
|
3 miesiące
|
|
Funkcja stopy
Ramy czasowe: 6 miesiąc
|
Funkcjonalność stopy zostanie obiektywnie zmierzona przy użyciu naszego zatwierdzonego chińskiego wyniku oceny stóp i kostek lub oryginalnej wersji angielskiej.
|
6 miesiąc
|
|
Funkcja stopy
Ramy czasowe: 12 miesięcy
|
Funkcjonalność stopy zostanie obiektywnie zmierzona przy użyciu naszego zatwierdzonego chińskiego wyniku oceny stóp i kostek lub oryginalnej wersji angielskiej.
|
12 miesięcy
|
|
Częstość amputacji
Ramy czasowe: Do 52 tygodni
|
Częstość amputacji
|
Do 52 tygodni
|
|
Wskaźnik ciśnienia kostka-ramię
Ramy czasowe: 0 miesiąc
|
Wskaźnik kostka-ramię (API) jest klinicznym pomiarem perfuzji naczyń obwodowych.
|
0 miesiąc
|
|
Wskaźnik ciśnienia kostka-ramię
Ramy czasowe: 1 miesiąc
|
Wskaźnik kostka-ramię (API) jest klinicznym pomiarem perfuzji naczyń obwodowych.
|
1 miesiąc
|
|
Wskaźnik ciśnienia kostka-ramię
Ramy czasowe: 3 miesiące
|
Wskaźnik kostka-ramię (API) jest klinicznym pomiarem perfuzji naczyń obwodowych.
|
3 miesiące
|
|
Wskaźnik ciśnienia kostka-ramię
Ramy czasowe: 6 miesiąc
|
Wskaźnik kostka-ramię (API) jest klinicznym pomiarem perfuzji naczyń obwodowych.
|
6 miesiąc
|
|
Wskaźnik ciśnienia kostka-ramię
Ramy czasowe: 12 miesięcy
|
Wskaźnik kostka-ramię (API) jest klinicznym pomiarem perfuzji naczyń obwodowych.
|
12 miesięcy
|
|
ELISA czynników angiogennych
Ramy czasowe: 0 miesiąc
|
W wielu punktach czasowych zostanie pobranych 10 ml próbek krwi obwodowej, a ludzki surowiczy czynnik wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF), zasadowy czynnik wzrostu fibroblastów (bFGF), naskórkowy czynnik wzrostu (EGF) i płytkopochodny czynnik wzrostu (PDGF) zostaną przeanalizowane za pomocą zestaw ELISA przetwarzano zgodnie z jego protokołem.
|
0 miesiąc
|
|
ELISA czynników angiogennych
Ramy czasowe: 1 miesiąc
|
W wielu punktach czasowych zostanie pobranych 10 ml próbek krwi obwodowej, a ludzki surowiczy czynnik wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF), zasadowy czynnik wzrostu fibroblastów (bFGF), naskórkowy czynnik wzrostu (EGF) i płytkopochodny czynnik wzrostu (PDGF) zostaną przeanalizowane za pomocą zestaw ELISA przetwarzano zgodnie z jego protokołem.
|
1 miesiąc
|
|
ELISA czynników angiogennych
Ramy czasowe: 3 miesiące
|
W wielu punktach czasowych zostanie pobranych 10 ml próbek krwi obwodowej, a ludzki surowiczy czynnik wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF), zasadowy czynnik wzrostu fibroblastów (bFGF), naskórkowy czynnik wzrostu (EGF) i płytkopochodny czynnik wzrostu (PDGF) zostaną przeanalizowane za pomocą zestaw ELISA przetwarzano zgodnie z jego protokołem.
|
3 miesiące
|
|
ELISA czynników angiogennych
Ramy czasowe: 6 miesiąc
|
W wielu punktach czasowych zostanie pobranych 10 ml próbek krwi obwodowej, a ludzki surowiczy czynnik wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF), zasadowy czynnik wzrostu fibroblastów (bFGF), naskórkowy czynnik wzrostu (EGF) i płytkopochodny czynnik wzrostu (PDGF) zostaną przeanalizowane za pomocą zestaw ELISA przetwarzano zgodnie z jego protokołem.
|
6 miesiąc
|
|
ELISA czynników angiogennych
Ramy czasowe: 12 miesięcy
|
W wielu punktach czasowych zostanie pobranych 10 ml próbek krwi obwodowej, a ludzki surowiczy czynnik wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF), zasadowy czynnik wzrostu fibroblastów (bFGF), naskórkowy czynnik wzrostu (EGF) i płytkopochodny czynnik wzrostu (PDGF) zostaną przeanalizowane za pomocą zestaw ELISA przetwarzano zgodnie z jego protokołem.
|
12 miesięcy
|
|
Immunobarwienie markerów angiogennych
Ramy czasowe: 0 miesiąc
|
Biopsja 3 mm (RazorMed) zostanie pobrana z krawędzi rany w wielu punktach czasowych.
Próbki zostaną poddane obróbce w celu zatopienia w parafinie i pocięte zostaną seryjne cienkie skrawki o grubości 7 μm.
Markery przeciwciał angiogenezy (CD31, alfa-SMA) i proliferacji komórek (Ki-67) zostaną użyte do barwienia immunologicznego na skrawku parafiny zgodnie z wcześniej opublikowanym protokołem.
Liczba pozytywnie wybarwionych komórek w strefie DFU u każdego pacjenta zostanie określona ilościowo przy użyciu oprogramowania do obrazowania zgodnie z opublikowanym protokołem.
Sparowany test T zostanie zastosowany do porównania różnicy proporcji MSC, angiogenezy i proliferacji komórek u każdego pacjenta za pomocą oprogramowania SPSS 18.0 dla systemu Windows (SPSS, Chicago, IL, USA).
Do porównania wartości średnich wykorzystany zostanie test nieparametryczny z p<0,05 uznanym za istotny statystycznie.
|
0 miesiąc
|
|
Immunobarwienie markerów angiogennych
Ramy czasowe: 1 miesiąc
|
Biopsja 3 mm (RazorMed) zostanie pobrana z krawędzi rany w wielu punktach czasowych.
Próbki zostaną poddane obróbce w celu zatopienia w parafinie i pocięte zostaną seryjne cienkie skrawki o grubości 7 μm.
Markery przeciwciał angiogenezy (CD31, alfa-SMA) i proliferacji komórek (Ki-67) zostaną użyte do barwienia immunologicznego na skrawku parafiny zgodnie z wcześniej opublikowanym protokołem.
Liczba pozytywnie wybarwionych komórek w strefie DFU u każdego pacjenta zostanie określona ilościowo przy użyciu oprogramowania do obrazowania zgodnie z opublikowanym protokołem.
Sparowany test T zostanie zastosowany do porównania różnicy proporcji MSC, angiogenezy i proliferacji komórek u każdego pacjenta za pomocą oprogramowania SPSS 18.0 dla systemu Windows (SPSS, Chicago, IL, USA).
Do porównania wartości średnich wykorzystany zostanie test nieparametryczny z p<0,05 uznanym za istotny statystycznie.
|
1 miesiąc
|
|
Immunobarwienie markerów angiogennych
Ramy czasowe: 3 miesiące
|
Biopsja 3 mm (RazorMed) zostanie pobrana z krawędzi rany w wielu punktach czasowych.
Próbki zostaną poddane obróbce w celu zatopienia w parafinie i pocięte zostaną seryjne cienkie skrawki o grubości 7 μm.
Markery przeciwciał angiogenezy (CD31, alfa-SMA) i proliferacji komórek (Ki-67) zostaną użyte do barwienia immunologicznego na skrawku parafiny zgodnie z wcześniej opublikowanym protokołem.
Liczba pozytywnie wybarwionych komórek w strefie DFU u każdego pacjenta zostanie określona ilościowo przy użyciu oprogramowania do obrazowania zgodnie z opublikowanym protokołem.
Sparowany test T zostanie zastosowany do porównania różnicy proporcji MSC, angiogenezy i proliferacji komórek u każdego pacjenta za pomocą oprogramowania SPSS 18.0 dla systemu Windows (SPSS, Chicago, IL, USA).
Do porównania wartości średnich wykorzystany zostanie test nieparametryczny z p<0,05 uznanym za istotny statystycznie.
|
3 miesiące
|
|
Immunobarwienie markerów angiogennych
Ramy czasowe: 6 miesiąc
|
Biopsja 3 mm (RazorMed) zostanie pobrana z krawędzi rany w wielu punktach czasowych.
Próbki zostaną poddane obróbce w celu zatopienia w parafinie i pocięte zostaną seryjne cienkie skrawki o grubości 7 μm.
Markery przeciwciał angiogenezy (CD31, alfa-SMA) i proliferacji komórek (Ki-67) zostaną użyte do barwienia immunologicznego na skrawku parafiny zgodnie z wcześniej opublikowanym protokołem.
Liczba pozytywnie wybarwionych komórek w strefie DFU u każdego pacjenta zostanie określona ilościowo przy użyciu oprogramowania do obrazowania zgodnie z opublikowanym protokołem.
Sparowany test T zostanie zastosowany do porównania różnicy proporcji MSC, angiogenezy i proliferacji komórek u każdego pacjenta za pomocą oprogramowania SPSS 18.0 dla systemu Windows (SPSS, Chicago, IL, USA).
Do porównania wartości średnich wykorzystany zostanie test nieparametryczny z p<0,05 uznanym za istotny statystycznie.
|
6 miesiąc
|
|
Immunobarwienie markerów angiogennych
Ramy czasowe: 12 miesięcy
|
Biopsja 3 mm (RazorMed) zostanie pobrana z krawędzi rany w wielu punktach czasowych.
Próbki zostaną poddane obróbce w celu zatopienia w parafinie i pocięte zostaną seryjne cienkie skrawki o grubości 7 μm.
Markery przeciwciał angiogenezy (CD31, alfa-SMA) i proliferacji komórek (Ki-67) zostaną użyte do barwienia immunologicznego na skrawku parafiny zgodnie z wcześniej opublikowanym protokołem.
Liczba pozytywnie wybarwionych komórek w strefie DFU u każdego pacjenta zostanie określona ilościowo przy użyciu oprogramowania do obrazowania zgodnie z opublikowanym protokołem.
Sparowany test T zostanie zastosowany do porównania różnicy proporcji MSC, angiogenezy i proliferacji komórek u każdego pacjenta za pomocą oprogramowania SPSS 18.0 dla systemu Windows (SPSS, Chicago, IL, USA).
Do porównania wartości średnich wykorzystany zostanie test nieparametryczny z p<0,05 uznanym za istotny statystycznie.
|
12 miesięcy
|
|
Test monofilamentu Semmesa Weinsteina
Ramy czasowe: 0 miesiąc
|
monofilament o rozmiarze 0,57, z siłą wyboczenia 10 gm, jest klinicznie akceptowaną wartością graniczną dla obecności lub braku czucia ochronnego.
Pomiary zostaną ujednolicone dla 3 miejsc; 1. kość śródstopia, 3. kość śródstopia i 5. kość śródstopia.
|
0 miesiąc
|
|
Test monofilamentu Semmesa Weinsteina
Ramy czasowe: 1 miesiąc
|
monofilament o rozmiarze 0,57, z siłą wyboczenia 10 gm, jest klinicznie akceptowaną wartością graniczną dla obecności lub braku czucia ochronnego.
Pomiary zostaną ujednolicone dla 3 miejsc; 1. kość śródstopia, 3. kość śródstopia i 5. kość śródstopia.
|
1 miesiąc
|
|
Test monofilamentu Semmesa Weinsteina
Ramy czasowe: 3 miesiące
|
monofilament o rozmiarze 0,57, z siłą wyboczenia 10 gm, jest klinicznie akceptowaną wartością graniczną dla obecności lub braku czucia ochronnego.
Pomiary zostaną ujednolicone dla 3 miejsc; 1. kość śródstopia, 3. kość śródstopia i 5. kość śródstopia.
|
3 miesiące
|
|
Test monofilamentu Semmesa Weinsteina
Ramy czasowe: 6 miesiąc
|
monofilament o rozmiarze 0,57, z siłą wyboczenia 10 gm, jest klinicznie akceptowaną wartością graniczną dla obecności lub braku czucia ochronnego.
Pomiary zostaną ujednolicone dla 3 miejsc; 1. kość śródstopia, 3. kość śródstopia i 5. kość śródstopia.
|
6 miesiąc
|
|
Test monofilamentu Semmesa Weinsteina
Ramy czasowe: 12 miesięcy
|
monofilament o rozmiarze 0,57, z siłą wyboczenia 10 gm, jest klinicznie akceptowaną wartością graniczną dla obecności lub braku czucia ochronnego.
Pomiary zostaną ujednolicone dla 3 miejsc; 1. kość śródstopia, 3. kość śródstopia i 5. kość śródstopia.
|
12 miesięcy
|
|
Sekcja markerów neurogennych
Ramy czasowe: 0 miesiąc
|
Biopsja 3 mm (RazorMed) zostanie pobrana z krawędzi rany w wielu punktach czasowych.
Próbki zostaną poddane obróbce w celu zatopienia w parafinie i pocięte zostaną seryjne cienkie skrawki o grubości 7 μm.
Próbki zostaną odparafinowane i ponownie uwodnione.
Po odzyskaniu antygenu (za pomocą roztworu Citrate Antigen Retrieval, ~30 min, 65°C) i permeabilizacji (za pomocą Triton™ X-100), markery dla aksonu (beta-tubuliny 3) (38) będą inkubowane przez noc i odpowiednie drugorzędowe przeciwciało będzie inkubowane przez 1 godz.
Pozytywnie wybarwiony obszar w strefie DFU u każdego pacjenta zostanie określony ilościowo przy użyciu oprogramowania do obrazowania zgodnie z opublikowanym protokołem.
Sparowany test T zostanie zastosowany do porównania różnicy powierzchni aksonów u każdego pacjenta za pomocą oprogramowania SPSS 18.0 dla systemu Windows (SPSS, Chicago, IL, USA).
Do porównania wartości średnich wykorzystany zostanie test nieparametryczny z p<0,05 uznanym za istotny statystycznie.
|
0 miesiąc
|
|
Sekcja markerów neurogennych
Ramy czasowe: 1 miesiąc
|
Biopsja 3 mm (RazorMed) zostanie pobrana z krawędzi rany w wielu punktach czasowych.
Próbki zostaną poddane obróbce w celu zatopienia w parafinie i pocięte zostaną seryjne cienkie skrawki o grubości 7 μm.
Próbki zostaną odparafinowane i ponownie uwodnione.
Po odzyskaniu antygenu (za pomocą roztworu Citrate Antigen Retrieval, ~30 min, 65°C) i permeabilizacji (za pomocą Triton™ X-100), markery dla aksonu (beta-tubuliny 3) (38) będą inkubowane przez noc i odpowiednie drugorzędowe przeciwciało będzie inkubowane przez 1 godz.
Pozytywnie wybarwiony obszar w strefie DFU u każdego pacjenta zostanie określony ilościowo przy użyciu oprogramowania do obrazowania zgodnie z opublikowanym protokołem.
Sparowany test T zostanie zastosowany do porównania różnicy powierzchni aksonów u każdego pacjenta za pomocą oprogramowania SPSS 18.0 dla systemu Windows (SPSS, Chicago, IL, USA).
Do porównania wartości średnich wykorzystany zostanie test nieparametryczny z p<0,05 uznanym za istotny statystycznie.
|
1 miesiąc
|
|
Sekcja markerów neurogennych
Ramy czasowe: 3 miesiące
|
Biopsja 3 mm (RazorMed) zostanie pobrana z krawędzi rany w wielu punktach czasowych.
Próbki zostaną poddane obróbce w celu zatopienia w parafinie i pocięte zostaną seryjne cienkie skrawki o grubości 7 μm.
Próbki zostaną odparafinowane i ponownie uwodnione.
Po odzyskaniu antygenu (za pomocą roztworu Citrate Antigen Retrieval, ~30 min, 65°C) i permeabilizacji (za pomocą Triton™ X-100), markery dla aksonu (beta-tubuliny 3) (38) będą inkubowane przez noc i odpowiednie drugorzędowe przeciwciało będzie inkubowane przez 1 godz.
Pozytywnie wybarwiony obszar w strefie DFU u każdego pacjenta zostanie określony ilościowo przy użyciu oprogramowania do obrazowania zgodnie z opublikowanym protokołem.
Sparowany test T zostanie zastosowany do porównania różnicy powierzchni aksonów u każdego pacjenta za pomocą oprogramowania SPSS 18.0 dla systemu Windows (SPSS, Chicago, IL, USA).
Do porównania wartości średnich wykorzystany zostanie test nieparametryczny z p<0,05 uznanym za istotny statystycznie.
|
3 miesiące
|
|
Sekcja markerów neurogennych
Ramy czasowe: 6 miesiąc
|
Biopsja 3 mm (RazorMed) zostanie pobrana z krawędzi rany w wielu punktach czasowych.
Próbki zostaną poddane obróbce w celu zatopienia w parafinie i pocięte zostaną seryjne cienkie skrawki o grubości 7 μm.
Próbki zostaną odparafinowane i ponownie uwodnione.
Po odzyskaniu antygenu (za pomocą roztworu Citrate Antigen Retrieval, ~30 min, 65°C) i permeabilizacji (za pomocą Triton™ X-100), markery dla aksonu (beta-tubuliny 3) (38) będą inkubowane przez noc i odpowiednie drugorzędowe przeciwciało będzie inkubowane przez 1 godz.
Pozytywnie wybarwiony obszar w strefie DFU u każdego pacjenta zostanie określony ilościowo przy użyciu oprogramowania do obrazowania zgodnie z opublikowanym protokołem.
Sparowany test T zostanie zastosowany do porównania różnicy powierzchni aksonów u każdego pacjenta za pomocą oprogramowania SPSS 18.0 dla systemu Windows (SPSS, Chicago, IL, USA).
Do porównania wartości średnich wykorzystany zostanie test nieparametryczny z p<0,05 uznanym za istotny statystycznie.
|
6 miesiąc
|
|
Sekcja markerów neurogennych
Ramy czasowe: 12 miesięcy
|
Biopsja 3 mm (RazorMed) zostanie pobrana z krawędzi rany w wielu punktach czasowych.
Próbki zostaną poddane obróbce w celu zatopienia w parafinie i pocięte zostaną seryjne cienkie skrawki o grubości 7 μm.
Próbki zostaną odparafinowane i ponownie uwodnione.
Po odzyskaniu antygenu (za pomocą roztworu Citrate Antigen Retrieval, ~30 min, 65°C) i permeabilizacji (za pomocą Triton™ X-100), markery dla aksonu (beta-tubuliny 3) (38) będą inkubowane przez noc i odpowiednie drugorzędowe przeciwciało będzie inkubowane przez 1 godz.
Pozytywnie wybarwiony obszar w strefie DFU u każdego pacjenta zostanie określony ilościowo przy użyciu oprogramowania do obrazowania zgodnie z opublikowanym protokołem.
Sparowany test T zostanie zastosowany do porównania różnicy powierzchni aksonów u każdego pacjenta za pomocą oprogramowania SPSS 18.0 dla systemu Windows (SPSS, Chicago, IL, USA).
Do porównania wartości średnich wykorzystany zostanie test nieparametryczny z p<0,05 uznanym za istotny statystycznie.
|
12 miesięcy
|
|
Cytometria przepływowa komórek zapalnych
Ramy czasowe: 0 miesiąc
|
Pobrane zostanie 10 ml krwi obwodowej.
Komórki jednojądrzaste zostaną zebrane przez izolację Ficoll-Paque w gradiencie gęstości wirowania.
Populacje monocytów klasycznych i nieklasycznych będą analizowane metodą cytometrii przepływowej i identyfikowane na podstawie proporcji komórek CD172a+ i CD43+.
|
0 miesiąc
|
|
Cytometria przepływowa komórek zapalnych
Ramy czasowe: 1 miesiąc
|
Pobrane zostanie 10 ml krwi obwodowej.
Komórki jednojądrzaste zostaną zebrane przez izolację Ficoll-Paque w gradiencie gęstości wirowania.
Populacje monocytów klasycznych i nieklasycznych będą analizowane metodą cytometrii przepływowej i identyfikowane na podstawie proporcji komórek CD172a+ i CD43+.
|
1 miesiąc
|
|
Cytometria przepływowa komórek zapalnych
Ramy czasowe: 3 miesiące
|
Pobrane zostanie 10 ml krwi obwodowej.
Komórki jednojądrzaste zostaną zebrane przez izolację Ficoll-Paque w gradiencie gęstości wirowania.
Populacje monocytów klasycznych i nieklasycznych będą analizowane metodą cytometrii przepływowej i identyfikowane na podstawie proporcji komórek CD172a+ i CD43+.
|
3 miesiące
|
|
Cytometria przepływowa komórek zapalnych
Ramy czasowe: 6 miesiąc
|
Pobrane zostanie 10 ml krwi obwodowej.
Komórki jednojądrzaste zostaną zebrane przez izolację Ficoll-Paque w gradiencie gęstości wirowania.
Populacje monocytów klasycznych i nieklasycznych będą analizowane metodą cytometrii przepływowej i identyfikowane na podstawie proporcji komórek CD172a+ i CD43+.
|
6 miesiąc
|
|
Cytometria przepływowa komórek zapalnych
Ramy czasowe: 12 miesięcy
|
Pobrane zostanie 10 ml krwi obwodowej.
Komórki jednojądrzaste zostaną zebrane przez izolację Ficoll-Paque w gradiencie gęstości wirowania.
Populacje monocytów klasycznych i nieklasycznych będą analizowane metodą cytometrii przepływowej i identyfikowane na podstawie proporcji komórek CD172a+ i CD43+.
|
12 miesięcy
|
|
Barwienie immunofluorescencyjne makrofagów
Ramy czasowe: 0 miesiąc
|
Zostanie pobrana biopsja 3 mm (RazorMed) i przygotowana do skrawków parafinowych.
Populacje i lokalizacje zarówno monocytów (fenotypy klasyczne i nieklasyczne), jak i makrofagów (fenotyp M1 i M2) w miejscu rany skóry zostaną określone za pomocą barwienia immunofluorescencyjnego swoistymi przeciwciałami przeciwko CD68 (ogólny marker dla makrofagów), anty-iNOS ( makrofag M1), CD206 (makrofag M2) [32] CD172a (ogólny marker dla monocytów) i CD43 (nieklasyczny marker swoisty dla monocytów).
|
0 miesiąc
|
|
Barwienie immunofluorescencyjne makrofagów
Ramy czasowe: 1 miesiąc
|
Zostanie pobrana biopsja 3 mm (RazorMed) i przygotowana do skrawków parafinowych.
Populacje i lokalizacje zarówno monocytów (fenotypy klasyczne i nieklasyczne), jak i makrofagów (fenotyp M1 i M2) w miejscu rany skóry zostaną określone za pomocą barwienia immunofluorescencyjnego swoistymi przeciwciałami przeciwko CD68 (ogólny marker dla makrofagów), anty-iNOS ( makrofag M1), CD206 (makrofag M2) [32] CD172a (ogólny marker dla monocytów) i CD43 (nieklasyczny marker swoisty dla monocytów).
|
1 miesiąc
|
|
Barwienie immunofluorescencyjne makrofagów
Ramy czasowe: 3 miesiące
|
Zostanie pobrana biopsja 3 mm (RazorMed) i przygotowana do skrawków parafinowych.
Populacje i lokalizacje zarówno monocytów (fenotypy klasyczne i nieklasyczne), jak i makrofagów (fenotyp M1 i M2) w miejscu rany skóry zostaną określone za pomocą barwienia immunofluorescencyjnego swoistymi przeciwciałami przeciwko CD68 (ogólny marker dla makrofagów), anty-iNOS ( makrofag M1), CD206 (makrofag M2) [32] CD172a (ogólny marker dla monocytów) i CD43 (nieklasyczny marker swoisty dla monocytów).
|
3 miesiące
|
|
Barwienie immunofluorescencyjne makrofagów
Ramy czasowe: 6 miesiąc
|
Zostanie pobrana biopsja 3 mm (RazorMed) i przygotowana do skrawków parafinowych.
Populacje i lokalizacje zarówno monocytów (fenotypy klasyczne i nieklasyczne), jak i makrofagów (fenotyp M1 i M2) w miejscu rany skóry zostaną określone za pomocą barwienia immunofluorescencyjnego swoistymi przeciwciałami przeciwko CD68 (ogólny marker dla makrofagów), anty-iNOS ( makrofag M1), CD206 (makrofag M2) [32] CD172a (ogólny marker dla monocytów) i CD43 (nieklasyczny marker swoisty dla monocytów).
|
6 miesiąc
|
|
Barwienie immunofluorescencyjne makrofagów
Ramy czasowe: 12 miesięcy
|
Zostanie pobrana biopsja 3 mm (RazorMed) i przygotowana do skrawków parafinowych.
Populacje i lokalizacje zarówno monocytów (fenotypy klasyczne i nieklasyczne), jak i makrofagów (fenotyp M1 i M2) w miejscu rany skóry zostaną określone za pomocą barwienia immunofluorescencyjnego swoistymi przeciwciałami przeciwko CD68 (ogólny marker dla makrofagów), anty-iNOS ( makrofag M1), CD206 (makrofag M2) [32] CD172a (ogólny marker dla monocytów) i CD43 (nieklasyczny marker swoisty dla monocytów).
|
12 miesięcy
|
|
Identyfikacja cytokin regulatorowych do mobilizacji mezenchymalnych komórek macierzystych krwi obwodowej (PB-MSC)
Ramy czasowe: 0 miesiąc
|
W wielu punktach czasowych zostanie pobranych 10 ml krwi obwodowej.
Każda próbka krwi obwodowej zostanie pobrana do probówek zawierających K2-EDTA.
Próbki krwi będą odwirowywane przy 1800 g przez 6 min w 4°C w celu uzyskania osocza i rozdzielone na 1 ml porcje i przechowywane w temperaturze -80°C.
Zróżnicowana ekspresja białek zostanie określona za pomocą 8-pleksowych znaczników izobarycznych do ilościowej analizy proteomicznej opartej na względnych i bezwzględnych oznaczeniach ilościowych (iTRAQ).
|
0 miesiąc
|
|
Identyfikacja cytokin regulatorowych do mobilizacji mezenchymalnych komórek macierzystych krwi obwodowej (PB-MSC)
Ramy czasowe: 1 miesiąc
|
W wielu punktach czasowych zostanie pobranych 10 ml krwi obwodowej.
Każda próbka krwi obwodowej zostanie pobrana do probówek zawierających K2-EDTA.
Próbki krwi będą odwirowywane przy 1800 g przez 6 min w 4°C w celu uzyskania osocza i rozdzielone na 1 ml porcje i przechowywane w temperaturze -80°C.
Zróżnicowana ekspresja białek zostanie określona za pomocą 8-pleksowych znaczników izobarycznych do ilościowej analizy proteomicznej opartej na względnych i bezwzględnych oznaczeniach ilościowych (iTRAQ).
|
1 miesiąc
|
|
Identyfikacja cytokin regulatorowych do mobilizacji mezenchymalnych komórek macierzystych krwi obwodowej (PB-MSC)
Ramy czasowe: 3 miesiące
|
W wielu punktach czasowych zostanie pobranych 10 ml krwi obwodowej.
Każda próbka krwi obwodowej zostanie pobrana do probówek zawierających K2-EDTA.
Próbki krwi będą odwirowywane przy 1800 g przez 6 min w 4°C w celu uzyskania osocza i rozdzielone na 1 ml porcje i przechowywane w temperaturze -80°C.
Zróżnicowana ekspresja białek zostanie określona za pomocą 8-pleksowych znaczników izobarycznych do ilościowej analizy proteomicznej opartej na względnych i bezwzględnych oznaczeniach ilościowych (iTRAQ).
|
3 miesiące
|
|
Identyfikacja cytokin regulatorowych do mobilizacji mezenchymalnych komórek macierzystych krwi obwodowej (PB-MSC)
Ramy czasowe: 6 miesiąc
|
W wielu punktach czasowych zostanie pobranych 10 ml krwi obwodowej.
Każda próbka krwi obwodowej zostanie pobrana do probówek zawierających K2-EDTA.
Próbki krwi będą odwirowywane przy 1800 g przez 6 min w 4°C w celu uzyskania osocza i rozdzielone na 1 ml porcje i przechowywane w temperaturze -80°C.
Zróżnicowana ekspresja białek zostanie określona za pomocą 8-pleksowych znaczników izobarycznych do ilościowej analizy proteomicznej opartej na względnych i bezwzględnych oznaczeniach ilościowych (iTRAQ).
|
6 miesiąc
|
|
Identyfikacja cytokin regulatorowych do mobilizacji mezenchymalnych komórek macierzystych krwi obwodowej (PB-MSC)
Ramy czasowe: 12 miesięcy
|
W wielu punktach czasowych zostanie pobranych 10 ml krwi obwodowej.
Każda próbka krwi obwodowej zostanie pobrana do probówek zawierających K2-EDTA.
Próbki krwi będą odwirowywane przy 1800 g przez 6 min w 4°C w celu uzyskania osocza i rozdzielone na 1 ml porcje i przechowywane w temperaturze -80°C.
Zróżnicowana ekspresja białek zostanie określona za pomocą 8-pleksowych znaczników izobarycznych do ilościowej analizy proteomicznej opartej na względnych i bezwzględnych oznaczeniach ilościowych (iTRAQ).
|
12 miesięcy
|
Współpracownicy i badacze
Tutaj znajdziesz osoby i organizacje zaangażowane w to badanie.
Sponsor
Daty zapisu na studia
Daty te śledzą postęp w przesyłaniu rekordów badań i podsumowań wyników do ClinicalTrials.gov. Zapisy badań i zgłoszone wyniki są przeglądane przez National Library of Medicine (NLM), aby upewnić się, że spełniają określone standardy kontroli jakości, zanim zostaną opublikowane na publicznej stronie internetowej.
Główne daty studiów
Rozpoczęcie studiów (Oczekiwany)
1 grudnia 2023
Zakończenie podstawowe (Oczekiwany)
31 stycznia 2026
Ukończenie studiów (Oczekiwany)
31 stycznia 2026
Daty rejestracji na studia
Pierwszy przesłany
13 października 2022
Pierwszy przesłany, który spełnia kryteria kontroli jakości
20 stycznia 2023
Pierwszy wysłany (Oszacować)
30 stycznia 2023
Aktualizacje rekordów badań
Ostatnia wysłana aktualizacja (Oszacować)
30 stycznia 2023
Ostatnia przesłana aktualizacja, która spełniała kryteria kontroli jakości
20 stycznia 2023
Ostatnia weryfikacja
1 stycznia 2023
Więcej informacji
Terminy związane z tym badaniem
Dodatkowe istotne warunki MeSH
Inne numery identyfikacyjne badania
- TTTFootUlcers
Informacje o lekach i urządzeniach, dokumenty badawcze
Bada produkt leczniczy regulowany przez amerykańską FDA
Nie
Bada produkt urządzenia regulowany przez amerykańską FDA
Nie
Te informacje zostały pobrane bezpośrednio ze strony internetowej clinicaltrials.gov bez żadnych zmian. Jeśli chcesz zmienić, usunąć lub zaktualizować dane swojego badania, skontaktuj się z register@clinicaltrials.gov. Gdy tylko zmiana zostanie wprowadzona na stronie clinicaltrials.gov, zostanie ona automatycznie zaktualizowana również na naszej stronie internetowej .