Poprawa stanu zdrowia poprzez zrozumienie czynników warunkujących ryzyko resztkowe w chorobie wieńcowej oraz nowe cele w zakresie zapobiegania i leczenia (HURRICANE)

HURRICANE to obserwacyjne badanie kliniczne, przeprowadzane w retrospektywnych i prospektywnych kohortach pacjentów ze stabilną chorobą wieńcową, w celu oceny roli pojawiających się czynników ryzyka kardiometabolicznego i naczyniowego w przewidywaniu ciężkiej i postępującej miażdżycy naczyń wieńcowych, udokumentowanej zaawansowanym obrazowaniem CCT.

Populacja badania retrospektywnego składa się z dwóch równoległych, niezależnych grup pacjentów włączonych do poprzednich badań klinicznych skupiających się na biomarkerach CAD we krwi i CCT. Wszyscy uczestnicy są oceniani pod kątem kwalifikowalności do bieżącego badania, co obejmuje w szczególności dostępność próbek krwi w biobanku i możliwych do interpretacji badań CCT. Dla każdej kohorty i całej retrospektywnej populacji (561 pacjentów) zmienne kliniczne (dane demograficzne, czynniki ryzyka sercowo-naczyniowego, historia wcześniejszej choroby wieńcowej, objawy i leki) oraz konwencjonalne biomarkery krążące (metabolizm lipidów i glukozy, ogólnoustrojowe zapalenie, czynność wątroby i nerek) są rejestrowane. Zmienne obrazowania wieńcowego, które pozwolą określić obecność choroby i punkty końcowe ciężkości, zostaną uzyskane z jakościowych i półilościowych analiz badań CCT zgodnie z systemem klasyfikacji CAD-RADS 2.0.

Populacja prospektywnego badania podłużnego obejmie 400 pacjentów skierowanych w ciągu 12 miesięcy do IRCCS SYNLAB SDN w Neapolu i FTGM w Pizie do klinicznie wskazanej CCT z powodu podejrzenia choroby wieńcowej, podpisujących pisemną świadomą zgodę i spełniających kryteria włączenia i wykluczenia. Na początku pacjenci zostaną scharakteryzowani jak w badaniu retrospektywnym (te same zmienne kliniczne, konwencjonalne biomarkery krążące i zmienne obrazowania CCT), a próbki krwi zostaną pobrane i przechowywane w dedykowanym Bio-Banku w celu zaawansowanych analiz genetycznych/molekularnych. Zostaną poddani wizytom monitorującym i ostatniej wizycie kontrolnej po 12 miesiącach, podczas której zostanie zarejestrowana przestrzeganie zaleceń lekarskich i zdarzenia. Druga próbka krwi zostanie pobrana i przechowywana w dedykowanym Bio-Banku w celu przeprowadzenia zaawansowanych analiz molekularnych. Drugie badanie CCT zostanie wykonane po 12 miesiącach przy użyciu tego samego skanera, w tej samej instytucji, z wykorzystaniem najnowocześniejszej technologii CCT o wysokiej rozdzielczości przestrzennej i czasowej, aby zapewnić ilościowe pomiary objętości blaszki wieńcowej i blaszki wieńcowej skład, który będzie stosowany do określenia punktów końcowych postępu choroby.

Analizy jakościowe i półilościowe badań CCT będą wykonywane przez radiologów zgodnie z systemem klasyfikacji CAD-RADS 2.0 zarówno w populacji retrospektywnej, jak i prospektywnej. W przyszłej populacji obrazy CCT wykonane podczas włączenia do badania i podczas obserwacji będą również analizowane ilościowo w celu określenia ewoluujących fenotypów CAD. Analiza ilościowa zostanie przeprowadzona na wizualnie zidentyfikowanych blaszkach przy użyciu dedykowanego pakietu oprogramowania (QAngio CT Research Edition wersja 3.1.2.0, Medis Medical Imaging Systems, Leiden, Holandia) w celu wygenerowania szczegółowych danych statystycznych dotyczących światła i płytki, w tym stopnia zwężenia , długość zmiany, objętość naczynia, obciążenie blaszką, objętość blaszki i składniki blaszki (zgodnie z wirtualną klasyfikacją histologiczną: gęsty wapń, rdzeń martwiczy, włóknisto-tłuszczowy, włóknisty i media). Ocenie zostaną również poddane dodatkowe parametry uzyskane z tomografii komputerowej, w szczególności nasierdziowa i okołonaczyniowa tkanka tłuszczowa, które zostaną przetestowane w modelach predykcyjnych ewolucji CAD i wprowadzone do analizy danych uczenia maszynowego jako potencjalne zmienne patofizjologicznej sieci CAD.

Krążące biomarkery zostaną ocenione przy użyciu standardowych metod w laboratoriach chemii klinicznej w dwóch uczestniczących ośrodkach klinicznych, a specyficzne krążące biomarkery zostaną przeanalizowane w IFC-CNR Core-Lab zarówno w populacjach retrospektywnych, jak i prospektywnych. W szczególności dodatkowe markery metabolizmu lipidów i funkcji tkanki tłuszczowej, funkcji śródbłonka i obciążenia miażdżycowego będą oceniane za pomocą dedykowanych testów immunologicznych, natomiast markery uszkodzenia/funkcji mięśnia sercowego będą oceniane za pomocą zautomatyzowanych testów immunologicznych. Profil stanu zapalnego zostanie oceniony za pomocą multipleksowych badań przesiewowych cytokin. „Omika” analizy w obu populacjach obejmą analizę lipidomiczną, z oceną krążących gatunków lipidów przy użyciu spektrometrii mas, oraz profilowanie genetyczne za pomocą GWAS (Genome-Wide Association Study) przeprowadzonego przez zewnętrznego dostawcę (Genomix4Life) przy użyciu technologii mikromacierzy nowej generacji do genotypowania pojedynczych warianty nukleotydów (SNV). W reprezentatywnych skrajnych grupach pacjentów z potencjalnej populacji konkretny panel 88 genów kandydujących zaangażowanych w homeostazę lipidów/glukozy, funkcję śródbłonka/naczyń i ogólnoustrojowe zapalenie, wraz z innymi odpowiednimi genami wynikającymi z analizy GWAS, zostanie zsekwencjonowany pod kątem znanych i nieznane warianty w FTGM metodą NGS (sekwencjonowanie nowej generacji). Przygotowanie biblioteki do NGS zostanie przeprowadzone przy użyciu zestawu Illumina DNA Prep with Enrichment Kit. Do opisywania, filtrowania i interpretowania wariantów wykorzystywane będzie oprogramowanie Base-Space Variant Interpreter. Stopień patogeniczności zostanie również oceniony w VarSome (https://varsome.com) i katalogu GWAS (https://www.ebi.ac.uk/gwas/), wyszukiwarkach i narzędziach do analizy wpływu na zmienność genetyczną człowieka. Warianty zidentyfikowane jako istotne patogenetycznie u osobników o ekstremalnych fenotypach zostaną następnie ocenione w pozostałej części populacji. Co więcej, miRNA, przypuszczalnie powiązane z odpowiednimi wariantami genów i poddane analizie bioinformatycznej in silico, zostaną ocenione za pomocą metody qPCR.