Wpływ stosowania fluorku srebra i diaminy na mikrobiom jamy ustnej zdrowego pacjenta pediatrycznego

Cel pracy

Celem tego badania jest:

1. Oceń efekt zatrzymania aplikacji 1-etapowej (tylko SDF) w porównaniu z aplikacją 2-etapową (SDF+KI).
2. Poznaj skuteczność SDF w porównaniu z SDF+KI na mikrobiomie jamy ustnej.
3. Oceń i porównaj skład śliny przed i po aplikacji SDF. Pytanie badawcze Jaki jest kliniczny i laboratoryjny wpływ stosowania fluorku diaminy srebra u dzieci z aktywną próchnicą? Zbadaj hipotezę zerową

1. Nie ma różnicy w działaniu zatrzymującym SDF w porównaniu z aplikacją SDF+KI.
2. Nie ma różnicy pomiędzy skutecznością stosowania SDF w porównaniu z aplikacją SDF+KI na mikrobiom jamy ustnej.
3. Nie ma różnicy w składzie śliny przed i po SDF

Protokół badania:

Materiały i metody Badanie zostanie przeprowadzone w Katedrze Stomatologii Dziecięcej Wydziału Stomatologii Uniwersytetu Króla Abdula Aziza, po uzyskaniu zgody Uniwersyteckiej Komisji Etyki Instytucjonalnej. Świadoma zgoda zostanie uzyskana od rodzica uczestnika. Próbka zostanie pobrana i wysłana do Centrum Badań Medycznych im. Króla Fahda

Rejestracja pacjentów Dokument świadomej zgody zostanie uzyskany od rodziców uczestniczących w badaniu, którzy wyrażą chęć wzięcia udziału w badaniu przed jego rozpoczęciem. Przeprowadzona zostanie krótka ankieta oparta na wywiadzie na temat zdrowia ogólnego i zębów, higieny jamy ustnej, spożycia cukru i demografii rodziny. Kalibrowany dentysta dziecięcy przeprowadzi badania stomatologiczne i ocenę zmian, a następnie pobierze próbkę.

Protokół pobrania próbek biologicznych:

• Wszyscy uczestnicy będą zobowiązani do poszczenia przez 90 minut przed pobraniem próbek.
• Wszyscy uczestnicy będą siedzieć na fotelu dentystycznym w pozycji wyprostowanej.
• Próbka zostanie pobrana podczas pierwszej wizyty od wszystkich dzieci, a od dzieci rekrutowanych w drugiej części badania ponownie zostanie pobrany kolejny komplet próbek.

• Każdemu dziecku zostanie pobrany wymaz z jamy ustnej, ślina, płytka nazębna i podpowierzchniowa zębina. Zbiórka będzie prowadzona w następujący sposób:

  1. Próbka śliny ▪ Od zapisanych dzieci zostanie pobrana ślina niestymulowana (S, Ślina). przy użyciu standardowej metody plucia

     ▪ Do probówki/pojemnika na próbki o pojemności 50 ml zostanie pobranych około 5 ml niestymulowanej śliny.

     ▪ Zebrana ślina zostanie przeniesiona i przechowywana w probówce Eppendorfa przy użyciu strzykawki o pojemności 5-10 ml.

  2. Próbki biofilmu

     ▪ Z obu zębów z powierzchnią próchniczą i bez powierzchni próchnicowej zostaną pobrane próbki biofilmu.

     ▪ Do zbierania płytki nazębnej zostaną użyte wysterylizowane mikroszczoteczki/papierowe końcówki

  3. Podpowierzchniowa zębina próchnicowa ▪ Pobranie próbki z rozległej, nieleczonej próchnicy (podczas wizyty początkowej) ▪ Do pobrania próbki zostaną użyte sterylizowane koparki dentystyczne i sterylizowane duże okrągłe wiertło ▪ Podpowierzchniowe wykopanie zębiny próchnicowej przy użyciu koparki łyżkowej i wiertła okrągłego w celu usunięcia próchnicowej tkanki zębiny ( 1,0 do 1,5 mm głębokości) Procedura pobierania i przechowywania Próbka zostanie pobrana od zrekrutowanych dzieci podczas pierwszej wizyty (w miarę linia bazowa).

Do pobrania próbek zostanie użyty sterylizowany instrument dentystyczny. Próbki będą przechowywane w probówkach Eppendorfa wypełnionych 200 lµl roztworu soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS). Przed analizą laboratoryjną wszystkie zebrane próbki będą przechowywane w zamrażarce w temperaturze -80°C.

Badanie kliniczne PICO:

P: Dzieci w wieku 2-10 lat wolne od próchnicy lub z próchnicą aktywną (posiadające co najmniej 1 ząb z głębokimi ubytkami kawitacyjnymi (bez cech zapalenia miazgi)) I: Postępowanie przy użyciu SDF (fluorek srebra diaminowy 38%) C: Postępowanie przy użyciu inny produkt zawierający fluor (SDF 38%+KI) O: Zmiany w metabolomice i mikrobiomie.

Rejestracja pacjentów Podczas pierwszej wizyty dzieci z aktywną próchnicą zębów zostaną poddane procesowi pobierania próbek przez wykwalifikowanego dentystę dziecięcego, który podczas tej samej sesji (wizyta wyjściowa) przeprowadzi również leczenie interwencyjne. Druga wizyta w celu pobrania próbek zostanie wyznaczona po dwóch do trzech tygodniach, a kolejna wizyta kontrolna po dwóch tygodniach.

Grupy badawcze:

• Grupa eksperymentalna Uczestnik interwencji otrzyma fluorek srebra diaminy 38%
• Grupa porównawcza Uczestnik porównania otrzyma system SDF+KI. Interwencja Zabiegi przeprowadzi skalibrowany dentysta dziecięcy. Po zakończeniu składania wniosku o SDF zostanie pobrana próbka śliny i płytki nazębnej.

Przykładowa kolekcja:

• Pobieranie próbek zostanie przeprowadzone przed, 2 i 4 tygodnie po interwencji.
• Uwzględnione próbki obejmują ślinę, płytkę naddziąsłową i okluzyjną, płytkę próchnicową (powierzchnie próchnicowe i SDF) oraz podpowierzchniową zębinę próchnicową (z wnętrza nieleczonej zmiany próchnicowej).▪ Płytka Próbka płytki naddziąsłowej i okluzyjnej zostanie pobrana z zębów mlecznych i stałych . Wyniki Podstawową miarą wyniku będzie różnica w grupach mikrobiomów w czasie oraz różnica w obrębie grup terapeutycznych. Drugorzędnym rezultatem będzie wpływ na metabolomię śliny.

Ocena będzie obejmować:

1. Skład społeczności drobnoustrojów w biofilmie powierzchniowym przed i po obróbce SDF.

2. Mikroflora podpowierzchniowa i skład społeczności drobnoustrojów przed i po leczeniu SDF.

3. Porównanie składu mikroflory podpowierzchniowej zębiny po leczeniu SDF i SDF+KI. 4. Metabolomika śliny przed i po analizach statystycznych SDF Dane ciągłe będą podawane jako średnie i odchylenia standardowe, natomiast zmienne kategoryczne będą przedstawiane jako częstotliwości i wartości procentowe (SD). Istotność statystyczna w grupach zostanie określona przy użyciu jednokierunkowego modelu analizy wariancji (ANOVA) lub nieparametrycznej wersji testu Kruskala-Wallisa, w zależności od tego, czy zmienne mają rozkład normalny. Za pomocą R zostaną wygenerowane wykresy i tabele taksonomii oraz obliczona względna obfitość na różnych poziomach taksonomicznych i wskaźniki różnorodności drobnoustrojów. Pomiędzy grupami zostaną ocenione względna liczebność oraz parametry różnorodności alfa i beta. Ponadto przed i po interwencji badany będzie związek między aktywnością próchnicy, czynnikami ryzyka próchnicy, cechami klinicznymi i składem mikroflory. Istotność statystyczna będzie brana pod uwagę, gdy wartości p będą mniejsze niż 0,05, a wartości p w porównaniach wielokrotnych zostaną skorygowane o współczynnik fałszywych odkryć (FDR). Oczekiwane wyniki:1. Istnieje różnica w działaniu klinicznym i mikrobiologicznym SDF w porównaniu z zastosowaniem SDF+KI na mikrobiom jamy ustnej 2. Występuje zmiana w składzie śliny przed i po SDF.