Vliv aplikace diaminfluoridu stříbrného na orální mikrobiom zdravého dětského pacienta

Cíl Díla

Tato studie si klade za cíl:

1. Vyhodnoťte zastavovací účinek 1-krokové (pouze SDF) versus 2-krokové (SDF+KI) aplikace.
2. Prozkoumejte účinnost SDF ve srovnání s SDF+KI na orálním mikrobiomu.
3. Vyhodnoťte a porovnejte složení slin před a po aplikaci SDF. Otázka studie Jaký je klinický a laboratorní dopad aplikace diaminfluoridu stříbrného u dětí s aktivním kazem? Výzkum nulové hypotézy

1. Neexistuje žádný rozdíl v aretačním účinku aplikace SDF oproti aplikaci SDF+KI.
2. Není žádný rozdíl mezi účinností aplikace SDF oproti aplikaci SDF+KI na orální mikrobiom.
3. Není žádný rozdíl ve složení slin před a po SDF

Výzkumný protokol:

Materiály a metody Studie bude provedena na Klinice dětského zubního lékařství Fakulty zubního lékařství Univerzity krále Abdula Azize po schválení Univerzitní institucionální etickou komisí. Informovaný souhlas bude získán od rodiče účastníka. Vzorek bude shromážděn a odeslán do Centra lékařského výzkumu krále Fahda

Zápis pacientů Dokument informovaného souhlasu bude získán od rodičů účastníků, kteří chtějí být součástí studie, před zahájením studie. Bude proveden krátký průzkum založený na rozhovoru o obecném a zubním zdraví, ústní hygieně, spotřebě cukru a rodinné demografii. Kalibrovaný dětský zubař provede zubní vyšetření a vyhodnocení lézí, po kterých následuje odběr vzorků.

Protokol odběru biovzorků:

• Všichni účastníci budou muset před odběrem vzorku držet půst po dobu 90 minut.
• Všichni účastníci budou sedět ve vzpřímené poloze na zubařském křesle.
• Vzorek bude odebrán při první návštěvě všem dětem a další sada vzorků bude odebrána znovu dětem přijatým ve druhé části studie.

• Každému dítěti bude odebrán ústní výtěr, sliny, supragingivální plak a podpovrchový dentin. Sbírka bude probíhat následujícím způsobem:

  1. Vzorek slin ▪ Nestimulované sliny (S, Saliva) budou odebrány zapsaným dětem. pomocí standardizované metody Spitting

     ▪ Přibližně 5 ml nestimulovaných slin bude odebráno pomocí 50 ml zkumavky Falcon/nádobky na vzorky.

     ▪ Odebrané sliny budou přeneseny a uloženy do zkumavky Eppendorf pomocí 5-10 ml injekční stříkačky.

  2. Vzorky biofilmu

     ▪ Vzorky biofilmu budou odebírány ze zubů s kazivými povrchy i bez nich.

     ▪ Pro odběr zubního plaku budou použity sterilizované hroty Microbrush/papír

  3. Podpovrchový kazivý dentin ▪ Odběr vzorků z rozsáhlého neošetřeného kazu (při základní návštěvě) ▪ Pro odběr vzorků budou použity sterilizované dentální exkavátory a sterilizovaný velký kulatý vrták ▪ Exkavace podpovrchového kazivého dentinu pomocí lžíce a kulatého vrtáku k extrakci tkáně kazivého dentinu ( 1,0 až 1,5 mm hloubky) Postup odběru a uchovávání Vzorek bude odebrán od rekrutovaných dětí při první návštěvě (jako výchozí stav).

Pro odběr vzorků bude použit sterilizovaný dentální nástroj. Vzorky budou uchovávány v Eppendorfových zkumavkách naplněných 200LμL fosfátem pufrovaného fyziologického roztoku (PBS). Před laboratorní analýzou budou všechny odebrané vzorky uchovávány v mrazáku při -80 °C.

Klinická studie PICO:

P: Děti ve věku 2-10 let bez kazu nebo s aktivním kazem (s alespoň 1 zubem s hlubokými kavitovanými lézemi (bez známek pulpitidy)) I: Léčba pomocí SDF (fluorid stříbrný 38 %) C: Léčba pomocí jiný produkt obsahující fluor (SDF 38%+KI) O: Změny v metabolomice a mikrobiomu.

Zápis pacientů Při první návštěvě podstoupí děti s aktivním zubním kazem proces odběru vzorků vedený kalibrovaným dětským zubním lékařem, který také poskytne intervenční ošetření během stejného sezení (základní návštěva). Druhý odběr vzorku bude naplánován po dvou až třech týdnech a po dvou týdnech bude následovat další následná návštěva.

Studijní skupiny:

• Experimentální skupina Účastník intervence obdrží diaminfluorid stříbrný 38 %
• Porovnávací skupina Účastník Porovnání obdrží systém SDF+KI. Zákrok Zákroky provede kalibrovaný dětský zubní lékař. Vzorek slin a plaku bude odebrán po dokončení aplikace SDF.

Vzorová kolekce:

• Odběr vzorků bude proveden před, 2 a 4 týdny po intervenci.
• Zahrnuty vzorky jsou sliny, supragingivální a okluzní plak, kazový plak (kariózní a SDF-ošetřené povrchy) a podpovrchový kazivý dentin (z kariézní neléčené léze) ▪ Plak Vzorek supragingiválního a okluzního plaku bude odebrán z primárních a stálých zubů . Výsledky Primárním měřítkem výsledku bude rozdíl ve skupinách mikrobiomů v průběhu času a rozdíl v rámci léčebných skupin. Sekundárním výsledkem bude vliv na slinnou metabolomiku.

Hodnocení bude zahrnovat:

1. Složení mikrobiální komunity povrchového biofilmu před a po ošetření SDF.

2. Podpovrchová mikroflóra a složení mikrobiální komunity před a po ošetření SDF.

3. Porovnání složení mikrobiální komunity podpovrchové mikroflóry dentinu po ošetření SDF a SDF+KI. 4. Metabolomika slin před a po statistických analýzách SDF Průběžná data budou uváděna jako průměry a standardní odchylky, zatímco kategorické proměnné budou prezentovány jako frekvence a procenta (SD). Statistická významnost napříč skupinami bude stanovena buď pomocí modelu jednosměrné analýzy rozptylu (ANOVA) nebo neparametrické verze Kruskal-Wallisova testu, v závislosti na tom, zda jsou proměnné normálně distribuovány. Pomocí R budou generovány taxonomické grafy a tabulky a bude vypočtena relativní abundance na různých taxonomických úrovních a indexy mikrobiální diverzity. Mezi skupinami bude hodnocena relativní abundance a parametry diverzity alfa a beta. Kromě toho bude před a po intervenci studován vztah mezi aktivitou zubního kazu, rizikovými faktory zubního kazu, klinickými rysy a složením mikroflóry. Statistická významnost bude posuzována, když jsou p-hodnoty menší než 0,05, a P-hodnoty ve vícenásobných srovnáních budou upraveny podle míry falešného objevu (FDR). Očekávaná zjištění: 1. Existuje rozdíl v klinickém a mikrobiálním účinku SDF oproti aplikaci SDF+KI na orální mikrobiom 2. Dochází k posunu ve složení slin před a po SDF.