Efeito da aplicação de fluoreto de diamina de prata no microbioma oral de paciente pediátrico saudável

Objetivo do Trabalho

Este estudo tem como objetivo:

1. Avalie o efeito de parada da aplicação de 1 etapa (somente SDF) versus 2 etapas (SDF+KI).
2. Explore a eficácia do SDF em comparação com SDF+KI no microbioma oral.
3. Avaliar e comparar a composição da saliva antes e depois da aplicação do SDF. Pergunta de estudo Qual é o impacto clínico e laboratorial da aplicação de fluoreto de diamina de prata em crianças com cárie ativa? Hipótese Nula de Pesquisa

1. Não há diferença no efeito de detenção da aplicação SDF versus SDF+KI.
2. Não há diferença entre a eficácia da aplicação de SDF versus SDF+KI no microbioma oral.
3. Não há diferença na composição da saliva antes e depois do SDF

Protocolo de pesquisa:

Materiais e métodos O estudo será realizado no Departamento de Odontopediatria da Faculdade de Odontologia da Universidade Rei Abdul Aziz, após aprovação do Comitê de Ética Institucional da Universidade. A amostra será coletada e enviada ao King Fahd Medical Research Center

Inscrição de pacientes Um documento de consentimento informado será obtido dos pais participantes dispostos a fazer parte do estudo antes do início do estudo. Uma breve pesquisa baseada em entrevistas será realizada sobre saúde geral e dentária, higiene bucal, consumo de açúcar e dados demográficos familiares. Um odontopediatra calibrado fará exames odontológicos e avaliações de lesões, seguidos de coleta de amostras.

Protocolo de coleta de bioespécimes:

• Todos os participantes deverão jejuar por 90 minutos antes da coleta da amostra.
• Todos os participantes ficarão sentados em posição vertical na cadeira odontológica.
• A amostra será coletada na primeira visita para todas as crianças, e outro conjunto de amostras será coletado novamente para as crianças recrutadas na segunda parte do estudo.

• Cada criança receberá um esfregaço oral, saliva, placa supragengival e dentina subsuperficial. A coleta será realizada da seguinte forma:

  1. Amostra de saliva ▪ Saliva não estimulada (S, Saliva) será obtida das crianças matriculadas. usando um método de cuspir padronizado

     ▪ Aproximadamente 5 ml de saliva não estimulada serão coletados usando um tubo falcon/recipiente de amostra de 50 ml.

     ▪ A saliva coletada será transferida e armazenada em tubo Eppendorf utilizando seringa de 5-10 ml.

  2. Amostras de biofilme

     ▪ Amostras de biofilme serão coletadas de dentes com e sem superfícies cariosas.

     ▪ Microbrush/pontas de papel esterilizadas serão usadas para coleta de placa dentária

  3. Dentina cariada subsuperficial ▪ Coleta de amostras dentro da cárie extensa não tratada (na consulta inicial) ▪ Escavadeiras dentárias esterilizadas e broca redonda grande esterilizada serão usadas para coleta de amostras ▪ Escavação de dentina cariada subterrânea utilizando uma escavadeira de colher e broca redonda para extrair tecido de dentina cariada ( 1,0 a 1,5 mm de profundidade) Procedimento de coleta e armazenamento A amostra será coletada das crianças recrutadas na primeira visita (conforme o linha de base).

Um instrumento odontológico esterilizado será utilizado para a coleta das amostras. As amostras serão armazenadas em tubos Eppendorf preenchidos com 200LμL de solução salina tamponada com fosfato (PBS). Antes da análise laboratorial, todas as amostras coletadas serão mantidas em freezer a -80 °C.

Ensaio clínico PICO:

P: Crianças de 2 a 10 anos livres de cárie ou com cárie ativa (com pelo menos 1 dente com lesões cavitadas profundas (sem sinais de pulpite)) I: Manejo com SDF (Fluoreto de diamina de prata 38%) C: Manejo com um produto diferente contendo flúor (SDF 38%+KI) O: Alteração na metabolômica e no microbioma.

Inscrição de pacientes Na primeira consulta, as crianças com cárie dentária ativa passarão por um processo de coleta de amostra conduzido por um odontopediatra calibrado que também fornecerá o tratamento de intervenção durante a mesma sessão (consulta inicial). Uma segunda consulta de coleta de amostra será agendada após duas a três semanas, seguida por outra consulta de acompanhamento após duas semanas.

Grupos de estudo:

• Grupo experimental O participante da intervenção receberá fluoreto de diamina de prata 38%
• Grupo de comparação O participante da comparação receberá o sistema SDF+KI. Intervenção Um odontopediatra calibrado realizará os procedimentos. Amostras de saliva e placa serão coletadas após a conclusão da aplicação do SDF.

Coleta de amostras:

• A coleta de amostras será realizada antes, 2 e 4 semanas após a intervenção.
• As amostras incluídas são saliva, placa supragengival e oclusal, placa de cárie (superfícies cariosas e tratadas com SDF) e dentina cariosa subsuperficial (de dentro da lesão cariosa não tratada) ▪ Placa Amostra de placa supragengival e oclusal será coletada de dentes decíduos e permanentes . Resultados A medida de resultado primário será a diferença nos grupos de microbioma ao longo do tempo e a diferença dentro dos grupos de tratamento. O resultado secundário será o efeito na metabolômica salivar.

A avaliação incluirá:

1. A composição da comunidade microbiana do biofilme superficial antes e após o tratamento com SDF.

2. Microbiota subterrânea e composição da comunidade microbiana antes e após o tratamento com SDF.

3. Comparação da composição da comunidade microbiana da microbiota subsuperficial da dentina após tratamento com SDF e SDF+KI. 4. Metabolômica salivar antes e depois das análises estatísticas do SDF Os dados contínuos serão relatados como médias e desvios padrão, enquanto as variáveis ​​​​categóricas serão apresentadas como frequências e porcentagens (DP). A significância estatística entre os grupos será determinada usando um modelo de análise de variância unidirecional (ANOVA) ou a versão não paramétrica do teste de Kruskal-Wallis, dependendo se as variáveis ​​são normalmente distribuídas. Usando R, serão gerados gráficos e tabelas de taxonomia, e serão calculadas abundâncias relativas em diferentes níveis taxonômicos e índices de diversidade microbiana. Entre os grupos serão avaliados abundância relativa e parâmetros de diversidade alfa e beta. Além disso, a relação entre atividade de cárie, fatores de risco de cárie, características clínicas e composição da microbiota serão estudadas antes e após a intervenção. A significância estatística será considerada quando os valores de p forem inferiores a 0,05, e os valores de P em comparações múltiplas serão ajustados para a taxa de descoberta falsa (FDR). Resultados esperados:1. Há uma diferença no efeito clínico e microbiano do SDF versus a aplicação de SDF+KI no microbioma oral 2. Há uma mudança na composição da saliva antes e depois do SDF.