Effetto dell'applicazione del fluoruro di diammina d'argento sul microbioma orale di pazienti pediatrici sani

Scopo del lavoro

Questo studio mira a:

1. Valutare l'effetto di arresto dell'applicazione in 1 fase (solo SDF) rispetto a quella in 2 fasi (SDF+KI).
2. Esplora l'efficacia di SDF rispetto a SDF+KI sul microbioma orale.
3. Valutare e confrontare la composizione della saliva prima e dopo l'applicazione dell'SDF. Domanda di studio Qual è l'impatto clinico e di laboratorio dell'applicazione del fluoruro di diammina d'argento nei bambini affetti da carie? Ipotesi nulla della ricerca

1. Non vi è alcuna differenza nell'effetto di arresto dell'applicazione SDF rispetto a quella SDF+KI.
2. Non vi è alcuna differenza tra l’efficacia dell’SDF rispetto all’applicazione SDF+KI sul microbioma orale.
3. Non vi è alcuna differenza nella composizione della saliva prima e dopo l'SDF

Protocollo di ricerca:

Materiali e metodi Lo studio sarà condotto presso il Dipartimento di Odontoiatria Pediatrica, Facoltà di Odontoiatria, Università King Abdul Aziz, dopo l'approvazione del Comitato Etico Istituzionale dell'Università. Il consenso informato sarà ottenuto dal genitore del partecipante. Il campione verrà raccolto e inviato al King Fahd Medical Research Center

Arruolamento dei pazienti Un documento di consenso informato verrà ottenuto dai genitori partecipanti che desiderano prendere parte alla sperimentazione prima dell'inizio dello studio. Verrà condotta una breve indagine basata su interviste sulla salute generale e dentale, sull'igiene orale, sul consumo di zucchero e sui dati demografici familiari. Un dentista pediatrico calibrato eseguirà esami dentali e valutazioni delle lesioni, seguiti dalla raccolta dei campioni.

Protocollo di raccolta dei campioni biologici:

• Tutti i partecipanti dovranno digiunare per 90 minuti prima della raccolta del campione.
• Tutti i partecipanti saranno seduti in posizione eretta sulla poltrona del dentista.
• Il campione verrà raccolto nella prima visita per tutti i bambini e un'altra serie di campioni verrà nuovamente raccolta per i bambini reclutati nella seconda parte dello studio.

• Ad ogni bambino verranno prelevati un tampone orale, saliva, placca sopragengivale e dentina sottosuperficiale. La raccolta verrà effettuata con le seguenti modalità:

  1. Campione di saliva ▪ La saliva non stimolata (S, Saliva) sarà ottenuta dai bambini arruolati. utilizzando un metodo di sputo standardizzato

     ▪ Verranno raccolti circa 5 ml di saliva non stimolata utilizzando una provetta Falcon/contenitore per campioni da 50 ml.

     ▪ La saliva raccolta verrà trasferita e conservata in una provetta Eppendorf utilizzando una siringa da 5-10 ml.

  2. Campioni di biofilm

     ▪ I campioni di biofilm verranno raccolti da entrambi i denti con e senza superfici cariate.

     ▪ Per la raccolta della placca dentale verranno utilizzati microspazzolini/punte di carta sterilizzati

  3. Dentina cariata nel sottosuolo ▪ Raccolta di campioni dall'interno dell'estesa carie non trattata (alla visita basale) ▪ Per la raccolta dei campioni verranno utilizzati escavatori dentali sterilizzati e una grande fresa rotonda sterilizzata ▪ Scavo della dentina cariata nel sottosuolo utilizzando un escavatore a cucchiaio e una fresa rotonda per estrarre il tessuto dentinale cariato ( da 1,0 a 1,5 mm di profondità) Procedura di raccolta e conservazione Il campione verrà raccolto dai bambini reclutati alla prima visita (come riferimento).

Per la raccolta dei campioni verrà utilizzato uno strumento dentale sterilizzato. I campioni verranno conservati in provette Eppendorf riempite con 200 LμL di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS). Prima delle analisi di laboratorio, tutti i campioni raccolti verranno conservati in un congelatore a -80°C.

Studio clinico PICO:

P: Bambini di età compresa tra 2 e 10 anni senza carie o con carie attiva (con almeno 1 dente con lesioni cavitate profonde (senza segni di pulpite)) I: Gestione utilizzando SDF (fluoruro di diammina d'argento 38%) C: Gestione utilizzando un diverso prodotto contenente fluoro (SDF 38%+KI) O: Alterazione della metabolomica e del microbioma.

Arruolamento dei pazienti Alla prima visita, i bambini con carie dentale attiva saranno sottoposti a un processo di raccolta dei campioni condotto da un dentista pediatrico calibrato che fornirà anche il trattamento di intervento durante la stessa sessione (visita di base). Verrà programmato un secondo appuntamento per la raccolta del campione dopo due o tre settimane, seguito da un'altra visita di follow-up dopo due settimane.

Gruppi di studio:

• Gruppo sperimentale Il partecipante all'intervento riceverà fluoruro di diammina d'argento al 38%
• Gruppo di confronto Il partecipante al confronto riceverà il sistema SDF+KI. Intervento Un dentista pediatrico calibrato eseguirà le procedure. Il campione di saliva e placca verrà raccolto al completamento dell'applicazione SDF.

Raccolta campioni:

• La raccolta dei campioni verrà condotta prima, 2 e 4 settimane dopo l'intervento.
• I campioni inclusi sono saliva, placca sopragengivale e occlusale, placca cariosa (superfici cariate e trattate con SDF) e dentina cariata sottosuperficiale (dall'interno della lesione cariata non trattata) ▪ Placca Il campione di placca sopragengivale e occlusale verrà raccolto dai denti primari e permanenti . Risultati La misura del risultato primario sarà la differenza nei gruppi di microbioma nel tempo e la differenza all'interno dei gruppi di trattamento. L'esito secondario sarà l'effetto sulla metabolomica salivare.

La valutazione includerà:

1. La composizione della comunità microbica del biofilm superficiale prima e dopo il trattamento con SDF.

2. Microbiota del sottosuolo e composizione della comunità microbica prima e dopo il trattamento con SDF.

3. Confronto della composizione della comunità microbica del microbiota del sottosuolo della dentina dopo il trattamento con SDF e SDF+KI. 4. Metabolomica salivare prima e dopo analisi statistiche SDF I dati continui saranno riportati come medie e deviazioni standard, mentre le variabili categoriali saranno presentate come frequenze e percentuali (SD). La significatività statistica tra i gruppi sarà determinata utilizzando un modello di analisi della varianza unidirezionale (ANOVA) o la versione non parametrica del test Kruskal-Wallis, a seconda che le variabili siano normalmente distribuite. Utilizzando R, verranno generati grafici e tabelle tassonomiche e verranno calcolati l'abbondanza relativa a diversi livelli tassonomici e gli indici di diversità microbica. Tra i gruppi verranno valutati i parametri di abbondanza relativa e di diversità alfa e beta. Inoltre, prima e dopo l’intervento, verrà studiata la relazione tra attività della carie, fattori di rischio della carie, caratteristiche cliniche e composizione del microbiota. La significatività statistica verrà presa in considerazione quando i valori p saranno inferiori a 0,05 e i valori p nei confronti multipli verranno adeguati per il tasso di false scoperte (FDR). Risultati attesi:1. Esiste una differenza nell’effetto clinico e microbico dell’SDF rispetto all’applicazione di SDF+KI sul microbioma orale 2. C’è un cambiamento nella composizione della saliva prima e dopo l’SDF.