Wpływ kremu emolientowego zawierającego bioaktywny peptyd mleka na objawy kliniczne, świąd i kolonizację bakteryjną łagodnych zmian skórnych w przebiegu atopowego zapalenia skóry w populacji pediatrycznej (AD-GMP-SCORAD)

Atopowe zapalenie skóry jest przewlekłą i nawracającą chorobą skóry charakteryzującą się intensywnym świądem, suchością skóry, stanem zapalnym, a w niektórych przypadkach wypryskiem. Chociaż może wystąpić w każdym wieku, częściej występuje w dzieciństwie, z globalną częstością występowania szacowaną między 5% a 20% u dzieci i około 7,3% u dorosłych. Jego wpływ na jakość życia waha się od łagodnego dyskomfortu do znaczących zaburzeń snu i ograniczeń w codziennych czynnościach.

Patogeneza atopowego zapalenia skóry jest związana ze strukturalnym i funkcjonalnym upośledzeniem naskórka, prowadzącym do stanu zapalnego, dysregulacji limfocytów T pomocniczych (Th1/Th2), zwiększonej produkcji immunoglobuliny E i nadczynności komórek tucznych, co wszystko nasila nieprawidłowości barierowe. Najczęstszym defektem barierowym jest zmniejszona produkcja filagryny lub innych białek warstwy rogowej, przyczyniając się do kserozy i zwiększonej podatności na infekcje. Dodatkowo, zmniejszona produkcja peptydów przeciwdrobnoustrojowych ułatwia kolonizację bakteryjną.

Obecne leczenie atopowego zapalenia skóry opiera się na emolientach, miejscowych kortykosteroidach oraz miejscowych lub ogólnych inhibitorach kalcyneuryny, w zależności od ciężkości i trwałości choroby. Jednak długotrwałe stosowanie tych leków może skutkować działaniami niepożądanymi, takimi jak pieczenie, nadmierne owłosienie, teleangiektazje, zanik skóry, trądzik, zapalenie mieszków włosowych, kontaktowe zapalenie skóry, nefrotoksyczność, hepatotoksyczność, drgawki i nowotwory. Dlatego istnieje potrzeba alternatywnych metod leczenia, które mogą zmniejszyć ilość i czas stosowania leków oraz wspierać powrót pacjenta do zdrowia.

Glikomakropeptyd to 64-aminokwasowy peptyd pochodzący z kazeiny bydlęcej podczas produkcji sera przez chymozynę lub podczas trawienia mleka przez pepsynę. Jest silnie glikozylowany, głównie na resztach seryny i treoniny, z tetrasacharydami zawierającymi kwas sjalowy jako kluczowy składnik jego bioaktywności. Badania kliniczne wykazały bezpieczeństwo doustnego glikomakropeptydu u ludzi, a opisano liczne aktywności biologiczne, w tym działanie przeciwzapalne i przeciwalergiczne w przedklinicznych modelach astmy, pokrzywki, alergii pokarmowej i atopowego zapalenia skóry.

W odniesieniu do skóry, glikomakropeptyd wykazał korzystne efekty na keratynocyty, chroniąc je przed apoptozą, stanem zapalnym i stresem oksydacyjnym, jednocześnie wspierając ich migrację i proliferację, procesy, które wspomagają naprawę skóry w stanach atopowych. Glikomakropeptyd hamuje również aktywację komórek tucznych i makrofagów, kluczowych komórek odpornościowych obficie występujących w zmianach atopowego zapalenia skóry, które przyczyniają się do przewlekłego stanu zapalnego.

Atopowe zapalenie skóry jest związane z dysbiozą skóry, charakteryzującą się zmniejszoną różnorodnością bakteryjną i nadmiernym wzrostem Staphylococcus aureus. Badania in vitro z naszego laboratorium wykazują, że glikomakropeptyd nie sprzyja wzrostowi S. aureus ani Staphylococcus epidermidis. Zamiast tego, hamuje on adhezję S. aureus do ludzkich keratynocytów, a w przeciwieństwie do tego, wzmacnia adhezję S. epidermidis, gatunku komensalnego, który przyczynia się do homeostazy skóry. Ponadto, glikomakropeptyd zmniejsza zdolność S. aureus do tworzenia biofilmów, kluczowego mechanizmu przetrwania.

Te odkrycia wspierają potencjał glikomakropeptydu jako miejscowego kandydata terapeutycznego dla atopowego zapalenia skóry, działającego poprzez modulację stanu zapalnego, naprawę skóry i modulację mikrobiomu.

Jest to randomizowane, równoległe, podwójnie ślepe badanie kliniczne. Głównym celem jest ocena ochronnego działania miejscowego glikomakropeptydu na kliniczne objawy i symptomy atopowego zapalenia skóry u dzieci.

Cele drugorzędne to:

1. Określenie, czy miejscowy glikomakropeptyd jest bezpieczny i dobrze tolerowany u dzieci z atopowym zapaleniem skóry.
2. Określenie, czy miejscowy glikomakropeptyd jest związany ze zmianami w ciężkości zmian atopowego zapalenia skóry i zakresie wyprysku, na podstawie indeksu SCORAD.
3. Określenie, czy miejscowy glikomakropeptyd zmniejsza świąd związany z wypryskiem i poprawia czas snu.
4. Określenie, czy miejscowy glikomakropeptyd jest związany ze zmniejszoną kolonizacją S. aureus na skórze.

Główne pytania, na które to badanie ma odpowiedzieć, to:

• Czy glikomakropeptyd zmniejsza objawy i symptomy związane z atopowym zapaleniem skóry w populacji pediatrycznej?
• Czy glikomakropeptyd modyfikuje kolonizację gatunków Staphylococcus w zmianach atopowego zapalenia skóry w populacji pediatrycznej? Populacja badania. Dzieci w wieku od 2 do 12 lat z rozpoznaniem atopowego zapalenia skóry potwierdzonym kryteriami Hanifina i Rajki oraz sklasyfikowanym jako łagodne według indeksu SCORAD (<25 punktów). Uczestnicy zostaną wykluczeni, jeśli wykraczają poza zakres wiekowy, prezentują wynik SCORAD >25, mają współistniejące dermatozy, historię nadwrażliwości lub anafilaksji na jakiekolwiek składniki leczenia, niemożność uczestniczenia w wizytach kontrolnych lub przestrzegania harmonogramu leczenia, lub jakikolwiek stan kliniczny uznany przez badacza za nieodpowiedni.

Procedury weryfikacji danych zostaną wdrożone w celu zapewnienia precyzji i spójności. Baza danych będzie zawierała predefiniowane reguły dla zakresów i kontroli spójności logicznej (na przykład wiek 2-12 lat, SCORAD <25 przy włączeniu). Dane, które wykraczają poza oczekiwany zakres lub są niespójne z innymi polami, zostaną oznaczone do przeglądu i poprawione lub anulowane, w zależności od przypadku.

Strategia rekrutacji. Rekrutacja będzie przeprowadzana poprzez współpracę z lokalnymi stowarzyszeniami medycznymi pediatrii, alergologii i immunologii oraz dermatologii. Dodatkowo, kampanie przesiewowe będą prowadzone w szkołach podstawowych w celu identyfikacji potencjalnych uczestników, a następnie dyskusji o zgodzie opiekunów.

Wielkość próby i interwencje. Łącznie 20 kwalifikujących się uczestników zostanie losowo przydzielonych do dwóch grup:

1. Krem emolientowy z glikomakropeptydem.
2. Krem emolientowy bez glikomakropeptydu (kontrola). Obie formuły będą aplikowane miejscowo na zmiany atopowego zapalenia skóry dwa razy dziennie przez 4 tygodnie. Uczestnicy będą uczestniczyć w cotygodniowych wizytach kontrolnych w celu oceny klinicznej i oceny SCORAD. Podczas pierwszej wizyty zostanie wykonany test skórny (prick test) w celu wykluczenia nadwrażliwości na składniki kremu. Dodatkowo, próbki skóry zostaną pobrane metodą strippingową na początku i podczas wizyty końcowej w celu ilościowego określenia kolonizacji przez gatunki Staphylococcus.

Słownik danych dla zmiennych badania:

Niezależne zmienne badania obejmują:

• Płeć: Zdefiniowana jako różnice morfologiczne między mężczyzną a kobietą. Będzie uzyskiwana z dokumentacji klinicznej i klasyfikowana jako mężczyzna lub kobieta.
• Wiek: Zdefiniowany jako okres czasu między urodzeniem a udziałem w badaniu. Będzie uzyskiwany z dokumentacji klinicznej i wyrażany w pełnych latach, z oczekiwanym zakresem od 2 do 12 lat.

Zależne zmienne badania obejmują:

• Rozpoznanie atopowego zapalenia skóry: Zdefiniowane jako obecność przewlekłej i nawracającej choroby skóry, potwierdzonej spełnieniem co najmniej trzech głównych i trzech mniejszych kryteriów Hanifina i Rajki. Klasyfikowane jako obecne lub nieobecne.
• Cieżkość atopowego zapalenia skóry: Zdefiniowana jako obiektywne i subiektywne cechy kliniczne choroby, mierzone za pomocą indeksu SCORAD. Ciężkość będzie kategoryzowana jako łagodna (<25), umiarkowana (25-50) lub ciężka (>50).
• Zaostrzenie: Zdefiniowane jako wzrost lub nawrót objawów po okresie bezobjawowym, również mierzone za pomocą indeksu SCORAD, i klasyfikowane jako łagodne, umiarkowane lub ciężkie według tych samych punktów odcięcia.
• Okres remisji: Zdefiniowany jako czas braku objawów atopowego zapalenia skóry. Będzie mierzony w dniach, na podstawie ocen klinicznych.
• Okres zaostrzenia: Zdefiniowany jako czas trwania zaostrzenia objawów. Będzie mierzony w dniach, na podstawie ocen klinicznych.
• Kolonizacja przez S. aureus: Zdefiniowana jako obecność i ilość tej oportunistycznej bakterii Gram-dodatniej w zmianach atopowego zapalenia skóry. Będzie mierzona poprzez próbki strippingowe skóry analizowane metodą hodowli lub PCR, wyrażane jako kopie genu femA S. aureus na ng całkowitego DNA.
• Stosunek S. aureus do S. epidermidis: Zdefiniowany jako związek między gatunkiem patogennym a gatunkiem komensalnym mikrobiomu skórnego. Będzie mierzony poprzez próbki strippingowe skóry analizowane metodą hodowli lub PCR, wyrażany jako stosunek kopii genu DNA femA (S. aureus/S. epidermidis).
• Test skórny (prick test): Zdefiniowany jako test skórny eksponujący komórki tuczne na alergeny w celu wykrycia uczulenia. Będzie rejestrowany jako pozytywny, gdy obserwowany jest bąbel o średnicy ≥3 mm większy niż kontrola negatywna, i negatywny w przeciwnym razie.

Zbieranie danych. Plan zapewnienia jakości zostanie wdrożony w celu zapewnienia precyzji i kompletności zebranych danych. Alergolog dziecięcy i główny badacz będą nadzorować przestrzeganie protokołu u każdego uczestnika we wszystkich ocenach klinicznych, a procedury laboratoryjne będą wykonywane zgodnie ze standardowymi protokołami.

Wszystkie brakujące, niedostępne lub nieinterpretowalne dane będą rejestrowane jako "brakujące". Niespójności danych lub wyniki wykraczające poza zakres również będą uważane za brakujące. Analiza pierwotna będzie wykorzystywać dostępne dane bez imputacji. Dane będą analizowane przy użyciu oprogramowania Prism GraphPad, stosując odpowiednie metody statystyczne zgodnie ze zmiennymi zainteresowania.

Wszystkie zapisy badania będą dostępne do przeglądu przez komisję etyczną lub zewnętrznych audytorów, jeśli będzie to wymagane.

Analiza danych. Analiza statystyczna będzie obejmować statystyki opisowe w celu podsumowania wyjściowych charakterystyk uczestników, w tym średnie, odchylenia standardowe, częstości i procenty, w miarę potrzeby. Porównania między grupami badania będą przeprowadzane przy użyciu testów Chi-kwadrat. Zmienne ciągłe, w tym wyniki indeksu SCORAD, kolonizacja bakteryjna (obciążenie S. aureus i stosunek S. aureus/S. epidermidis) oraz wyniki kliniczne, takie jak czas trwania okresów remisji i zaostrzenia, będą porównywane między grupami przy użyciu testów t-Studenta. Istotność statystyczna będzie ustalona na p < 0,05, a analizy będą przeprowadzane przy użyciu oprogramowania Prism GraphPad.

Raport końcowy i rozpowszechnianie. Na podstawie wyników zostanie przygotowany końcowy raport z badania i opracowany manuskrypt naukowy do potencjalnej publikacji.